1、,实验八 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定,2,掌握PH梯度法的原理及操作技术,1,熟练进行薄荷中的挥发油和青蒿中的青蒿素的提取分离操作；能进行当归、丁香中挥发油的提取分离操作。,3,通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。,一、实验目的,能够运用回流提取法对大黄中总蒽醌类化合物进行提取，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。,4学习蒽醌类化合物鉴定方法,二、实验原理,三、实验步骤,1乙醇总提取物的制备,游离蒽醌的提取 取大黄粗粉50g，置于500ml圆底烧瓶中，加95%乙醇以约高出生药面为度，置水浴加热回流23小时，趁热抽滤。滤渣再以95%乙
2、醇热提二次，趁热抽滤后合并三次乙醇提取液。浓缩乙醇提取液，得到乙醇总提取物。,2总游离蒽醌的提取，亲脂性成分与亲水性成分分离,将乙醇总提取物浸膏加水适量混悬，加乙醚150ml于500ml分液漏斗中萃取，充分振荡后放置，倾出醚层，再加50ml乙醚振摇，放置，倾出醚层，同法操作6次，直至乙醚液呈色较浅时为止，合并乙醚液，乙醚溶液含总游离蒽醌。,3蒽醌的分离, 大黄酸的分离,将含有游离蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中，加5%NaHCO3水溶液20ml，振摇。放置分层，放出下层NaHCO3溶液，置于另一三角瓶中，上层乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加5%NaHCO3溶液15ml萃取一次，每次振摇提
3、取后，放置分层时间应稍久，以免乙醚溶液混在下层水液中，影响分离效果。提取过程中，如乙醚挥发，可酌量补加。合并NaHCO3提取液，注意其呈色，在搅拌下小心滴加盐酸调pH23，观察酸化过程中的呈色变化，析出物抽滤收集，干燥后称重。, 大黄素的分离,留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次1520ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止，约需67次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH23，放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上，干燥后称重。, 大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离,留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收集沉淀，经水洗，抽干移至
4、表面皿上，干燥后称重。,4鉴定,（1）碱液试验：分别取蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴5%氢氧化钾试剂振摇，溶液呈红色,（2）醋酸镁试验：分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁试剂，产生橙、红、紫等颜色,（3）薄层检识,吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板。 样品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液；1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：苯-醋酸乙酯（82）；苯-甲醇（81） 显色：氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察,（4）纸色谱检识,支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm7cm）,样品：各蒽
5、醌成分1%三氯甲烷溶液,对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液,展开剂：甲苯,显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液,四、思考题,1在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中若出现乳化现象，应如何处理？,2大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？, 芦荟大黄素的分离,留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取34次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取23次，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液，加盐酸调pH23，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。,（三） 蒽醌类化合物的提取与分离,蒽醌的提取与分离,提
6、取方法,分离方法,碱溶酸沉法,蒽醌苷和游离蒽醌的分离,利用PH梯度萃取法分离,有机溶剂提取法,利用色谱法分离,游离蒽醌的分离,蒽醌苷的分离,蒽醌苷的分离,游离蒽醌的分离,提取方法,分离方法,有机溶剂提取法常用甲醇或乙醇提取，可将不同极性或类型的醌类成分都提取出来，得到总醌类再进行分离。,碱溶酸沉法适用于具有酚羟基的醌类化合物，由于其可溶于碱液，加酸后又沉淀出。,游离蒽醌与蒽醌苷的分离,利用苷与苷元极性不同，溶解度不同的特点进行分离。,pH梯度萃取法此法是分离游离蒽醌最常用的方法。是利用其酸性的差异进行分离的。,（三） 蒽醌类化合物的提取与分离,色谱法常用的吸附剂有硅胶和聚酰胺，慎用氧化铝，因羟基蒽醌能与氧化铝形成牢固的螯合物，难以洗脱。,蒽苷的分离比苷元困难，分离前一般先用溶剂法除去大部分杂质，得较纯的总苷后，再用柱色谱分离。,
