电化学发光免疫分析方法.ppt

电化学发光免疫分析法,11月 刘博,免疫分析法 发光和化学发光 化学发光免疫分析法 电化学发光 电化学发光免疫分析法 甲状腺功能介绍,免疫分析,基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段； 免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。,免疫学检测历史演进,放射免疫检测（现仍普遍使用于县级以上医院）； 酶联免疫检测（各临床机构普遍使用）； 以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术,发光分类,光照发光:发光剂（荧光素）经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光（荧光）。 生物发光：指发生在生物体内的发光现象，比如萤火虫的发光，反应底物荧光素在荧光素酶的催化下利用ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在回复到基态时多余的能量以光子形式放出。 化学发光（生物体内各种现象都与化学反应有关，都属于化学发光现象）,化学发光,化学发光是指伴随化学反应过程中所产生的光的发射现象，某些特殊的化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激发态，当其回到基态时以发射光子的形式释放能量。,化学发光分析,根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为化学发光分析。,化学发光分析优点,化学发光具有荧光的特异性，同时不需要激发光，就避免了荧光分析中激发光杂散光的影响有很高的灵敏度， 并且不像放射分析那样存在环境污染和健康危害,化学发光分析缺点,虽然化学发光具备很高的特异性和很小的干扰，但化学分析本身的不特异性，制约了整个方法的使用。,化学发光免疫分析（CLIA）,CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。 这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性。,化学发光免疫分析（ CLIA）分类,按标志物的不同及反应原理的不同分为 直接化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析,电化学发光,电化学发光（ECL）是通过在电极上施加一定的波形电压或电流信号进行点解反应的产物之间或与体系中共存组反应产生化学发光的现象,定义:指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质 特点： 反应在电极进行 化学发光剂：三联吡啶钌 电子供体为：三丙胺,电化学发光剂,电化学发光免疫分析（ECLI),ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨荧光免疫技术之后的新一代标记免疫测定技术； ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物； ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术之一。,ECLI原理,在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌标记Ab(Ag),通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量或定性分析。,,ECLIA特点,三联吡啶钌在电场中不断得到电子，可持续发光，信号强度高，容易测定容易控制 三联吡啶钌直接标记抗原或抗体，结合稳定，不影响标志物的理化特性 试剂灵敏度高，稳定性好,ECLIA优越性,高度敏感，可达pg／ml或pmol水平； 特异性强，重复性好，CV＜5％。 测定范围宽，可达7个数量级。 试剂灵敏度高，稳定性好，无毒害，无污染，有效期长，达数月甚至数年。 操作简单，耗时短，易于自动化。,临床应用,由于该技术无放射性污染，同时有放射免疫测定的灵敏度，且具有快速、准确、特异、可自动化等特点，广泛应用于以下几个方面: 激素:甲状腺激素、生殖激素、垂体激素和皮质 激素 肿瘤标记物:AFP、CEA、PSA、CA199、CA125、CA153等 贫血因子:VB12、叶酸、铁蛋白、转铁蛋白等 糖尿病:胰岛素、血清C-肽、血浆胰高血糖素等,感染性疾病:衣原体抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体等 其它 如一些心脏标志物、病毒标志物、治疗药物的监测等,甲状腺功能项目： 促甲状腺素（TSH）、 游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、 游离甲状腺素(FT4)、 三碘甲状腺原氨酸（T3）、 甲状腺素（T4）、 抗甲状腺球蛋白抗体（Anti-TG)、 抗甲状腺过氧化物酶抗体（Anti-TPO)。,游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）,介绍：T3是由甲状腺滤泡细胞合成及分泌的激素。FT3约占T3的0.5%,能透过细胞膜进入组织细胞，发挥生理效应，其浓度与组织中的三碘甲状腺原氨酸浓度一致，也与机体代谢状态一致，对非甲状腺疾病也有诊断价值。 临床意义： 增高：见于甲亢、三碘甲状腺原氨酸型甲状腺功能亢进。 降低：见于甲状腺功能减退。 正常参考值：2.0-4.4pg/ml,游离甲状腺素（FT4）,介绍：血清游离甲状腺素是甲状腺功能体外试验的灵敏指标，即使在生理情况下引起血浆甲状腺素结合蛋白结合力和浓度改变时，也能较准确反映甲状腺的功能。 临床意义： 增高：甲状腺中毒症、突眼性甲状腺功能亢进症、无痛性甲状腺炎伴甲亢、亚急性甲状腺炎伴甲亢、甲状腺制剂服用过量、甲状腺受体不应症、慢性甲状腺炎伴甲亢。 降低：甲状腺功能减退(原发性)、垂体性或者无痛性亚急性甲状腺炎的一过性功能减退期、低白蛋白血症。 正常参考值：0.93～1.70ng／dL,促甲状腺激素（TSH）：,介绍：促甲状腺激素是腺垂体分泌的促进甲状腺的生长和机能的激素，具有促进甲状腺滤泡上皮细胞增生、甲状腺激素合成和释放的作用。 临床意义： 增高：原发性甲状腺功能减退、伴有甲状腺功能低下的桥本病、亚急性甲状腺炎恢复期。摄人金属锂、碘化钾、促甲状腺激素释放激素可使促甲状腺激素增高。 降低：垂体性甲状腺功能低下、非促甲状腺激素瘤所致的甲状腺功能亢进，以及摄入阿司匹林、皮质激素及静脉使用肝素可使促甲状腺激素降低。 正常参考值：0.27～4.20uIU／mL,总三碘甲状腺原氨酸(TT3)：,介绍：10%～20%T3由甲状腺合成与释放，80%～90%来自于周围组织T4的脱碘转化成T3。T3为主要发挥生物活性的甲状腺激素。血清中T3的绝大多数(99.5%)与血浆中特异蛋白结合，仅极少数处于游离状态(0.5%)。血清中TT3浓度的改变，表示甲状腺功能的异常，TT3浓度的改变常和TT4平行，但有时存在差异，如T4型甲亢，TT3则正常。因此，临床上常同时测定TT3和TT4值。 临床意义： 增高：TT3是诊断甲状腺功能亢进(甲亢)最灵敏的指标，甲亢时TT3可高出正常值4倍；同时TT3是诊断T3型甲亢的特异性指标。 降低：常见于甲状腺功能减低(甲减)。 正常参考值：血清TT3值与年龄有关，出生后TT3水平高于正常成人，5岁后随年龄增长逐渐下降，老年人TT3常低于正常人。成人：0.73～2.88ng/ml。,总甲状腺激素(TT4)：,介绍：TT4是甲状腺分泌的主要产物，也是构成下丘脑-垂体前叶-甲状腺调节系统完整性不可缺少的成份。TT4测定可用于甲亢、原发性和继发性甲减的诊断以及TSH抑制治疗的监测。 临床意义： 增高：甲亢，急性甲状腺炎，亚急性甲状腺炎，急性肝炎，肥胖症，应用甲状腺激素时，进食富含甲状腺激素的甲状腺组织等。 降低：甲减，全垂体功能减退症，下丘脑病变，剧烈活动等。 正常参考值：5.10-18.00ug/dl,抗甲状腺过氧化物酶自身抗体 （TPOAb） ：,介绍：甲状腺过氧化物酶是甲状腺微粒体的主要抗原成分，其功能与甲状腺素的合成有关。抗甲状腺过氧化物酶抗体或抗甲状腺微粒体抗体可能使甲状腺细胞损伤。检测抗甲状腺过氧化物酶抗体的方法与抗甲状腺球蛋白抗体类似。测定抗甲状腺过氧化物酶抗体的临床意义与抗甲状腺球蛋白抗体也大致相同，主要对于慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进症、原发性甲状腺功能减退症，有辅助诊断、疗效考核价值。 临床意义： 桥本(Hashimoto)甲状腺炎患者血清中ATG检出率可达90%～95%;甲状腺功能亢进患者检出率40%～90%不等，检出率高的可能与部分病例属于桥本甲亢有关;原发性甲状腺功能低下症患者检出率65%左右。 参考值：0.00-34.00IU/mL,抗甲状腺球蛋白抗体（Anti-TG),介绍：甲状腺球蛋白是一种潜在的自身抗原，当进入血液后可刺激机体产生Anti-TG抗体。 Anti-TG，测定有助于诊断自身免疫疾病。 临床意义：在自身免疫性甲状腺炎患者中可发现Anti-TG抗体浓度升高出现频率大约是70%-80%。Graves病Anti-TG抗体的阳性率约60%，经治疗后滴度下降提示治疗有效。甲亢病人测Anti-TG阳性且滴度较高，提示抗甲状腺药物疗效果不佳，且停药后易复发。 参考值：0.00-115.00IU/ml,异常值处理：,TSH>10uUI/ml 时应进行1：10稀释重做。 TPO>600IU/ml时应进行1：5稀释重做。 出现单个项目过高或过低时，按处理异常结果流程寻找原因。,谢谢！,