五味子多糖提取优化.doc

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资源描述

1、毕业设计 (论文 )选题报告设计(论文)题目: 学生姓名: 学 号: 系 别: 班 级: 指导教师: 年 月 日选题报告填写要求1选题报告作为毕业设计(论文)答辩委员会对学生答辩资格审查的依据材料之一。此报告应在指导教师指导下,由学生在毕业设计(论文)工作前期内完成,经指导教师签署意见审查后生效。 2选题报告内容可以用手写也可以打印。手写时必须用黑墨水笔或蓝黑墨水笔工整书写;打印时按教务处统一设计的电子文档标准格式打印,正文内容一律用宋体、小四号,行距为 20 磅。禁止打印在其它纸上后剪贴。完成后应及时交给指导教师签署意见方可进入毕业设计阶段。3学生查阅资料的参考文献应在 5 篇及以上(其中辞

2、典、手册不超过 2本),选题报告的字数要在 1000 字以上。4有关年月日等日期的填写,应当按照国标 GB/T 740894数据元和交换格式、信息交换、日期和时间表示法规定的要求,一律用阿拉伯数字书写。如“2005 年 9 月 26 日”或 “2005-09-26”。毕 业 设 计 (论 文 )选 题 报 告1、课题的研究意义五味子,俗称山花椒、秤砣子、药五味子、面藤、五梅子等。古医书称它荎蕏、玄及、会及,最早列于神农本草经上品,中药功效在于滋补强壮之力,药用价值极高。五味子其味以酸、成为主,而其皮味甘、核辛苦,故五味具备。其性温润,治疗作用广泛,而尤长于保肺气、收心气、滋肾水。 临床用于敛肺

3、止咳,主要对久嗽不愈、肺张叶举、肺气浮散而产生的干咳失音、气短喘息、身倦无力等。 五味子由于能滋肝肾之阴、收脾肺之津、敛心耗散之气,故还有养阴生津功效。特别是对汗出过多而致气阴耗散、体倦神疲、口干而渴、心衰脉虚之症。现代研究证明,五味子含有多种有机酸,如苹果酸、枸橼酸、酒石酸等。并含有挥发油、维生素 C、五味子素及多量糖分等。 20 世纪 90 年代以来,许多学者从五味子水提液中分离得到了五味子多糖(the coarse polysaccharide from Schisandra chinensis,CPSC),并对其药理活性进行了研究,研究表明五味子多糖具有多种药理作用和功效。目前我国学者

4、在五味子临床疗效、有效成分提取鉴定、药理作用及植物资源等方面作了大量的研究而且比较深入。在活性成分研究方面,主要的研究重点在五味子的脂溶性成分方面。从五味子中分离得到的木脂素类单体化合物有近 40 种,其药理作用研究涉及消化系统,心血管系统,中枢神经系统,生殖系统以及抗氧化,抗衰老等各个方面。然而中药传统用药习惯以及许多五味子水提液的显著药理活性提示我们“五味子水溶性有效成分的研究不可忽视” ,而五味子水溶性有效成分主要以五味子多糖为主.由于技术的限制,目前五味子多糖的提取分离与纯化的效率仍较低。因此,充分利用各种现代技术,研究开发高效提取分离与纯化技术仍是当前五味子多糖研究的方向之一。五味子

5、多糖含量高,制备方法简便,药理活性强,在保肝、增强免疫、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤等方面具有良好的应用前景。但目前的研究水平相对简单,我国五味子资源丰富,应用范围广,如果能制备出纯度更高的多糖,相信对于五味子资源的深入利用将大有裨益。与此同同时在提升五味子这一我国传统中药的品牌竞争力和国际市场份额以及加大该资源可持续综合开发利用方面将大有作为。2、课题的基本内容1 仪器与材料1.1 仪器与试剂7220 型分光光度计,研钵,电子分析天平,恒温水浴锅,台式离心机,电热恒温干燥箱。1.2 苯酚、浓硫酸、葡萄糖、无水乙醇、乙醚(试剂均为国产分析纯) ,五味子(市购) 。2 方法2.1 溶液配置材料的预处理

6、2.1.1 将五味子在 80烘箱中烘干后用粉碎机粉碎,过 60 目筛,于棕色磨口瓶中存放备用。2.1.2.1 1mg/mL 葡萄糖标准溶液准确称取 80烘至恒重得分析纯葡萄糖 100mg,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到 100mL 容量瓶中,用蒸馏水定容至 100mL,混匀,4冰箱中保存备用。2.1.2.2 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将 6.3 克 DNS 和 262ml 2mol/L 氢 氧 化 钠 , 加 到 500ml 含 有 182 克 酒 石 酸钾 钠 的 热 水 溶 液 中 , 再 加 上 5 克 重 苯 酚 和 5 克 亚 硫 酸 钠 , 搅 拌 溶 解 , 冷

7、 却 后加 水 定 容 到 1000ml, 即 制 成 3,5-二 硝 基 水 杨 酸 试 剂 , 贮 于 棕 色 瓶 中 备 用 。2 方法2.1 五味子粗多糖提取方法称取一定量的五味子粉于具塞三角瓶中,按实验的设计加入一定量的蒸馏水,放入水浴中按一定的温度浸提。冷却后,以 4 000 r/min 离心 20 min,所得提取液浓缩至原体积的约 1/5,然后加入 5 倍体积的乙醇,摇匀后,在 4冰箱中放置24 h,以 4 200 r/min 离心 18 min。所得沉淀蒸干乙醇后,在 70烘箱中烘至干燥,所得固体即为五味子多糖。2.3 粗多糖的纯化方法a1五味子预处理蒸馏水浸提离心浓缩Sev

8、age 法脱蛋白活性炭脱色醇沉离心干燥研磨干燥检测多糖提取率(%)=多糖质量/试材质量100%2.4 多糖含量的测定 制作葡萄糖标准曲线取 7 支 25mL 具塞刻度试管编号,按表一分别加入浓度为 1mg/mL 得葡萄糖标准溶液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂,配成不同葡萄糖含量得反应液。将各管摇匀,在沸水浴中准确加热 5min,取出,冰浴冷却至室温,用蒸馏水定容至 25mL,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上比色。调波长 540nm,用 0 号管调零,测出 16 号管的光密度。以光标度为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为很坐标,做出标准曲线。2.4(1) 测未知样,方法与测标准曲线索 5

9、 管进行操作,以 0 管为对比。测吸光值,按标准曲线查多糖含量。多糖含量(%)=样品浓度稀释倍数样品体积多糖试样质量100%表 1 葡萄糖标准曲线制作管号 1mg/mL 葡萄糖标准溶液(mL) 蒸馏水(mL) DNS(mL) G 含量(mg) A540nm0 0 2 1.5 01 0.2 1.8 1.5 0.22 0.4 1.6 1.5 0.43 0.6 1.4 1.5 0.64 0.8 1.2 1.5 0.85 1.0 1.0 1.5 1.06 1.2 0.8 1.5 1.22.5 五味子多糖提取的单因素实验研究为了更准确地反映出提取多糖的量,本文除了采用人们普遍使用的直接利用提取的多糖质量

10、与试样质量之比的多糖得率计算方法来考察因素外,还利用定量分析提取的多糖中的多糖含量,继而换算出五味子试样中多糖得率的方法来指示各因素提取多糖的多寡,进而指示各因素的优劣。这样可以避免提取的多糖质量高,即提取的多糖质量与样品质量之比的多糖得率高但多糖含量不一定高的问题。同时也可以说明有的文献中出现的异常数据,使各因素考查的结果更具可信性。单因素实验提取剂选用乙醇、乙酸、石油醚、氯仿、水五个条件;提取温度采用()50、60、70、80 五个条件;提取时间为( min)30,60,90,120 四个条件;提取 pH 值采用 6,7,8,9 四个条件;提取料液比采用1:15,1:20,1:25,1:3

11、0,1:35 五个条件;提取剂浓度采用 95%,85%,75%,65%四个条件 2.6 响应面法优化提取条件由单因素实验设计筛选影响提取率的三个主要因素,利用 Minitab 软件设计一个三因素三水平共 15 个试验点的实验设计,其中 12 个为析因点,另外,为保证试验准确,设 3 个零点来判分析隙误差。以多糖提取率为响应值,用 Minitab15.0 软件对实验结果进行多元回归分析,借助软件中的回归拟合,可得到试验因子 X 对响应值 Y 的影响的回归方程,并通过逆矩阵得到优化方案和绘制响应立体分析图和等高线图。3 结果分析及为题讨论4 结论指导教师意见:指导教师:年 月 日专业负责人意见:专业负责人: 年 月 日系部审查意见:系部负责人:年 月 日

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