1、微生物学模块一啤酒酵母菌种群数量的测定,一、实验目的1、学习并掌握微生物直接计数 （血球计数板法）技术。2、检测酵母菌的死亡率和生芽率。,二、实验原理 血球计数板进行真核微生物细胞（个体较大细胞）的直接计数，其计得的是死菌和活菌的总和，故称为全菌计数法。而平板菌落计数法只能计得能生长繁殖的菌量，故又称活菌计数法。,三、血球计数板计数酵母菌： 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又
2、分成 16 个小方格；另一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是 400 个。每一个大方格边长为 1mm ，则每一个大方格的面积为 1mm3 ，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为 0.1mm ，所以计数室的容积为 0.1mm3 （万分之一毫升）。,计数室,四、计数 计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上 25 或 16 ，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成 1mL 菌液中的总菌数。 1、设五个中方格中的总菌数为 A ，菌液稀释倍数为 B ，如果 25 个中方格的计数
3、板，则： 1mL 菌液中总菌数 =A/5 25 104 B=50 000A B （个） 同理，如果是 16 个中方格的计数板， 1mL 菌液中总菌数 =A/5 16 104 B=32 000A B （个）,五；步骤1、取清洁无油血球计数板,在计数室上加盖玻片。2、取酵母菌液摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。3、静止5 min，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。 4、高倍镜下计数：计数左上、左下、右上、右下和中间五个中格的酵母菌数，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。,六、计算方法 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体大于母体1/2时，就按两个酵母计数。 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。,谢谢！,
