资源描述
高级免疫学实验技术 2014级硕士研究生,吉林大学基础医学院
免疫学系,免疫学实验技术概述,免疫学实验技术概述,小调查-对免疫学实验技术的了解,目前你知道的免疫学实验技术有哪些？
这些免疫学实验技术的原理是什么？
这些技术有什么应用？,免疫学实验技术概述,免疫学技术的范畴,1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定
2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定,免疫学检测技术的评价,一、评价标准
Specificity（特异）
Sensitivity（敏感）
Simplicity（简便）
Safety（安全）
Saving（节约）
二、特异性与敏感性的关系
特异性高、敏感性低
敏感性高、特异性低,免疫学实验技术概述,抗原抗体反应
淋巴细胞的检测技术
细胞因子的检测技术
免疫学常用的分子生物学技术,多克隆抗体
单克隆抗体
基因工程抗体
前两者常用于实验研究，而后者用于临床治疗研究。,抗体的应用,多克隆抗体是通过免疫动物血清分离获得
优点：制备方法比较简单，价格低廉，制备所需时间短等
在确定新基因编码蛋白研究方面，仍然是首选抗体类型。但由于多克隆抗体含有针对多个抗原表位的抗体成分，也可能包括抗原变性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗体在检测变性抗原——如采用Western Blot检测蛋白时，其效果比单克隆抗体更敏感。,多克隆抗体,缺点：
纯度差
易发生交叉反应
来源有限
所产生的抗体因动物个体差异滴度不同
不易标准化
因免疫动物血清中含有非常复杂的多种蛋白质成分，所以在进行实验室分析、检测之前，必须将其有效的抗体成分分离、纯化。,多克隆抗体,单克隆抗体(mAb)是通过B细胞杂交瘤获得
与多克隆抗体相比，单克隆抗体主要具有以下三个显著特点（优点）：
①高度均质性
②高度特异性
③来源稳定
不足：
制备方法比较复杂，价格昂贵，制备所需时间较长。,单克隆抗体,根据实验的目的不同，其分离、纯化的纯度要求也不同。
作为ELISA检测时的抗体，部分情况下饱和硫酸胺纯化即可；
最常使用的抗体是经过A蛋白(Protein A)亲和层析获得的IgG型抗体；
免疫放射测定的标记用抗体必须达到双级纯才可应用(亲和层析纯+SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳纯)。,纯度要求,单克隆抗体在制备过程中经过严格的筛选，因此应根据不同的应用目的选择不同单克隆抗体亚类，如标明供ELISA检测用的单克隆抗体，可能不适合Western Blot检测。
作为初学者尤其应该注意各类单克隆抗体标明的应用范围，而多克隆抗体一般情况下均有较宽的适用范围。,适用范围,一抗和二抗,一级抗体：抗原特异性的抗体
二级抗体：抗抗体（针对一抗的Fc段，具有种属特异性）,Ag,Ag,沉淀反应
凝集反应
免疫标记技术,抗原抗体反应,淋巴细胞的检测技术,淋巴细胞的分离
淋巴细胞的功能测定技术,细胞因子的检测技术,生物活性检测
免疫学检测
分子杂交
PCR检测,免疫学常用的分子生物学技术,免疫印迹技术
免疫PCR
免疫沉淀,mAb是由起始于一个B淋巴细胞的单克隆细胞系所分泌的，因此是一种每个抗体分子的结构(包括氨基酸排列顺序和空间构型)都相同的均质性抗体。,高度均质性,,mAb只专一的识别抗原分子上单个抗原位点，因此容易获得特异性抗体，较少产生交叉反应。,高度特异性,,可大量生产，当得到稳定分泌mAb的杂交瘤细胞系后，可置液氮中长期保存，需要时取出复苏，既可在体外培养中收获mAb，也可将杂交瘤细胞接种入同系小鼠腹腔内，然后从荷瘤小鼠的腹水中收获大量mAb。,来源稳定,,
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