1、实验室菌种管理规程目的：保证菌种合理、有效地使用和保存，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，保证实验室和社会的生物安全。职责：主管负责菌种的出入库保管、保存、分发，组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。范围：本规程适用于实验室菌种的管理，包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。1 菌种的保存1.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用平板低温保存法。将菌种接种在适宜的固体培养基上，待菌生长充分以后，转移至 28 冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间为 1 周，超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化，若菌
2、落活力下降则从-80冰箱中取用甘油冷冻管。1.2 传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法。1.2.1 甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内，置于适宜的培养条件下培养，菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内，再加入等体积的无菌甘油（浓度 40%） ，即为 20%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，在-80冷冻条件下保存，保存期限为 3 年。每个菌株保存至少 30 个无菌冷冻管。使用时，取出一支放至室温，接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏，挑取纯菌落传代或工作用。2 菌种的传代2.1 工作用菌种的传代当工作用菌种代数小于 5 时，在规定保存期限内，可直接
3、用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。取在冰箱 28 保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。菌种每 1 周传代一次，当超过 5 代，须用 “甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。2.2 传代用菌种的传代首先划线接种确认，根据日常检验工作的需要量，挑取纯菌落转接平板，作为工作用菌种；同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落制成菌悬液，按“1.2”的方法制备甘油冷冻管数支，作为传代用菌种。2.3 传代时注意事项无菌操作，使菌株不死亡，不污染、不丢失。同时实验人员也要采取有效
4、的预防措施进行自我保护，如工作时必须穿工作服，佩带无菌手套，实验完成以后消毒实验进行的区域、实验仪器和器具。如发生意外，如菌种泄漏或人员受伤，应立即向主管报告以便及时进行处理。3 菌种的保管3.1 实验室全部菌种都应由菌种负责人记录在册，并输入电脑以电子版形式存档，以便查找。菌种上应贴上明显的标签，标明名称、培养基、保种人、日期、编号等。菌种设专人加锁保管，并对所保存的菌种建立菌种保存、领用登记台账 （附表 3） 。3.2 菌种的定期检查在菌种的保存期间，应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管的塞子是否松动或生霉，如有异常应及时处理。3.3 所保管的菌种，不能随意转让其他单位和个人，需要时应有单
5、位证明和批准手续以及李爱科组长签字方可供应。4 菌种的领用与使用4.1 实验室人员根据实验需要，需到主管领取工作用菌种或传代用菌种，同时填写菌种领用登记台账相关内容。4.2 实验室人员从主管领取工作用菌种或传代用菌种，用于日常检验或验证试验，使用后及时填写菌种使用登记台账 （附表 6） ，以便追踪菌种使用历史。5 菌种（废弃）的销毁下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等，必须采用 121、45 分钟湿热灭活处理：新一代菌种制备成功后的上一代菌种；使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；超过有效期的菌种；凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种；其他应废弃的菌种。6 附则附表 1：检定菌接收记录
6、附表 2：检定菌种传代、分离记录 附表 3：检定菌种保存、领用登记台账 附表 4：检定菌种观察记录 附表 5：检定菌种鉴定记录 附表 6：检定菌种使用登记台账 附表 7：废弃菌种（物品）销毁处理记录菌种资源详细信息（密）此项信息不对外公布，保存核心成员手中。菌种登记：编号+详细名称+ 来源+特性 +动物实验+，随时补充，留照片。附表 1：菌种接收记录 代码记录名称 菌种接收记录页次 1 共 页名称及编号 数量 代数 来源 接收日期 接收人 检查情况 保存条件附表 2：菌种传代、分离、保存记录 代 码记录名称 菌种传代、分离记录页次 1 共 1 页名称及编号 购进（领取）日期 年 月 日 来源传代前菌种保存方法 传代用培养基传代用菌种 工作用菌种传代日期 传代用菌种编号 总数量数量 编号 有效期 保存方法 数量 编号 有效期 保存方法操作人分离与纯化过程纯度检查结果 操作人： 复核人：附表 3：菌种使用登记台账 代码记录名称 菌种保存、领用登记台账页次 1 共 1 页收到日期 名称及编号 数量 接收人 移交人 领用日期 用途 数量 发放人 领用人附表 4：菌种观察记录 代码记录名称 菌种观察记录页次 1 共 1 页日 期冰箱温度（） 塞子是否松动 是否霉变 处理措施 观察人
