1、western 转膜条件蛋白来源：RAW264.7 总蛋白蛋白名称（可保密）：一些转录因子蛋白分子量：4070 KDWB 用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 400 mA转膜时间：6090 minPS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要， 曾经因为失误，转了 15 min 就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。蛋白来源：内皮细胞 总蛋白蛋白名称（可保密）：occludin & AKT蛋白分子量：65 KD & 56 KDWB 用膜类型、孔径：0.45 PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压
2、 100 V转膜时间：6070 min设备名字是“Bio-Rad mini”。蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织 总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：65 KD & 55 KDWB 用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒压 12 V转膜时间：30-40 min设备：“Bio-Rad mini”建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。 蛋白来源：293T 细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：95 KD & 35 KDWB 用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要
3、超过 300 mA。转膜时间：70 min 蛋白来源：肿瘤手术标本蛋白名称（可保密）：转录因子蛋白分子量：33 KDaWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个 30-70 KDa 的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何； 实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：smad3蛋白分子量：54 KDaWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流转膜时间：150 min转膜设备
4、：湿转 Bio-Rad 蛋白来源：胰腺癌细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDa and 42 KDaWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：72 KD，42 KD 和 22 KDWB 用膜类型、孔径：一般的 PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜 0.26 A，两张膜 0.3 A。转膜时间：90 min设备：“Bio-Rad mini”建议：转膜缓冲液最多用 3 次，最好现用现配，我们用的没有加 SDS，转的时候最好能用冰
5、块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。 蛋白来源：大鼠 PBMC蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：55 KDWB 用膜类型、孔径：0.22 的 PVDF 膜转膜方式（恒流）：湿转转膜时间：60-90 min设备：“Bio-Rad mini”建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了 其实 0.22 的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实 也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过 一张膜转，17 KD 的和 170 KD 的，按照 170 KD 的条件
6、，17 KD 的转膜也很好的。蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：大于 250 kDWB 用膜类型、孔径：millipore PVDF 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流 0.3A。转膜时间：180min设备：“Bio-Rad ”建议：电转保持电压在 70 V 以上，保持低温，如果电压低过 70 就需要换缓冲液了。蛋白来源：白血病细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：28 KDWB 用膜类型、孔径：0.45 的 NC 膜转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0.25 A设备：“Bio-Rad ”建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三
7、明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker 都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。 蛋白来源：肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200 KDaWB 用膜类型、孔径：millipore PVDF 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：120 v 恒压转膜时间：120 min转膜设备：湿转 Bio-Rad建议：转膜缓冲液只用 2 次，基本都转上，5%BSA 封闭，减少背景。蛋白来源：胰腺 细胞蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：90-130 KDaWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：250 mA 恒流
8、转膜时间：150 min转膜设备：湿转蛋白来源：原核表达蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：38 KDWB 用膜类型、孔径：0.45 NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒压：100 V转膜时间：120 min蛋白来源：心脏蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDaWB 用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70 v120 min，180 min，5-6 h转膜设备：伯乐湿转建议改进方向（可选）：40 kDa 一下，70 v ，60-90 min 足够，40-70 kDa 90-120 min即可。70-120 kDa ，70
9、 v，120-180 min 足够，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa 以上建议 6 h。蛋白来源：卵巢癌细胞膜蛋白蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：53 KDWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：80 V 100 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：人宫颈癌 HELA 细胞总蛋白蛋白名称（可保密）：-actin蛋白分子量：42WB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：50 4 h转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：脑组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16
10、 KD、27 KD、32 KD、42 KDWB 用膜类型、孔径：PVDF 0.22 um转膜方式（恒压、恒流）：半干转 恒流 1 mA/cm2 或 2 mA/cm2转膜时间：不定转膜设备：北京六一仪器建议：我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。在 预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的 5 分 钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。蛋白来源：CHO cell蛋白名称
11、（可保密）：酶原蛋白分子量：40 KDWB 用膜类型、孔径：0.22 的 PVDF 膜（Biorad）转膜方式（恒压）：100 V，湿转，转膜时间：60 min。设备：Tanon（上海天能）建议：1. 转膜液现用现配，用完倒掉。2. 转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。蛋白来源：Hepg2蛋白名称（可保密）：EGFR蛋白分子量：170kdWB 用膜类型、孔径：pvdf 0.45转膜方式（恒压、恒流）：24V转膜时间：2 个半小时转膜设备：伯乐半干转蛋白来源：肝癌细胞蛋白名称：HIF-1蛋白分子量：120 kDWB 用膜类型、孔径：NC 膜转膜方式（
12、恒压）：80 伏，湿转转膜时间：150 分钟设备：“Bio-Rad mini”建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是 150 分钟，80 伏恒压。经李春红染 色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36 kD。蛋白来源：心肌细胞总和膜蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KDWB 用膜类型、孔径：NC 膜 0.2 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70 V 200 min转膜设备：湿转 Bio-Rad建 议
13、：转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V 电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到 150 ml。对大分子量如 200 KD 转膜时间延长 6-8 h。蛋白来源：肺脏蛋白名称（可保密）：ICAM-1蛋白分子量：85110 KDWB 用膜类型、孔径：0.22NC转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 300 mA转膜时间：120 min设备名字 Bio-Rad mini一抗用的 santa cruz 1 mL 包装的。 比例调整到 1：800 做出很好的条带。 效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：16 KDa
14、WB 用膜类型、孔径：0.2 um PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：0.2 A 恒流转膜时间：65 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：成纤维细胞蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：28 KDaWB 用膜类型、孔径：0.2 umPVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：0.25 A 恒流转膜时间：60 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80 KDWB 用膜类型、孔径：0.45 um PVDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：半干转移系统恒流，勿超过 0.85 mA/cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）转膜时间：60-90 min设备：B
15、io-Rad其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。蛋白来源：人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白蛋白名称（可保密）：*蛋白分子量：17-116 kdWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒流 200 mA转膜时间：3 h转膜设备：湿转 北京六一 24D mini蛋白来源：CO COS7 293T蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KDWB 用膜类型、孔径：0.45 um P
16、VDF 膜转膜方式（恒压、恒流）：湿转 90 V 电流约为 230-280 mA 之间。两张膜串联叠加。转膜时间：40 min设备：Bio-Rad 法码西亚蛋白来源：人肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：30-60 KDaWB 用膜类型、孔径：pall NC 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜转膜时间：60-90 min转膜设备: 北京六一 半干转建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成 2 倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞蛋白名称（可保密）：notch
17、蛋白分子量：60-120 KDaWB 用膜类型、孔径：pall NC 膜 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒流 0.3 A转膜时间：-20 度冰柜 120 min转膜设备: 湿转 Bio-Rad建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成 10 倍或 5 倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。蛋白来源：胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：18 KDa 、36 KDa、55 KDa、98 KDaWB 用膜类型、孔径：NC 膜 PALL转膜方式（恒压、恒流）：0.35 恒流转膜时间：60 min转膜设备：湿转 Bio-Rad mini转缓液的配制有点讲究。如果蛋
18、白大于一百多，一般加入 SDS，时间延长结果会更好些。由于，目前试验的蛋白就都不大，所以，我们都采用不加 SDS 的转缓液，跑出来的条带也很整齐、干净。蛋白来源大肠癌 205蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：92 kd，43 kdWB 用膜类型、孔径：0.45pvdf转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：90 min转膜设备：湿转，天能。蛋白来源：大鼠脑组织蛋白名称（可保密）：BDNF （28 KDa）、Bactin（42 KDa）、LaminB（72 KDa），以及磷酸化蛋白（保密 43 KDa）WB 用膜类型、孔径：PVDF（0.45 ）膜转膜方式（恒压、恒流）：300 mA 恒流转膜时
19、间：60 min转膜设备：湿转 Bio-Rad Mini转膜缓冲液：25甲醛 觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker 转到膜上很鲜艳。 用立春红染色效果也很好。蛋白来源：表达产物蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：29 KDaWB 用膜类型、孔径：PVDF转膜方式（恒压、恒流）：0.3 A 恒流转膜时间：80 min转膜设备: 湿转 Bio-Rad蛋白来源：cell lysate, culture medium蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：15-50 kDWB 用膜类型、孔径：NC，PVDF ， 0.45 um转膜方式（恒压、恒流）：恒压， semi
20、-dry转膜时间：about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V， if not increase to 3-4 h。转膜设备： Bio-Rad蛋白来源：肺脏、肝脏等。蛋白名称（可保密）：actin蛋白分子量：43 kDWB 用膜类型、孔径：NC 膜 PALL 0.22 um转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 200 mA转膜时间：4560 min设备名字 Bio-Rad mini用的 santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般 1：1000-1：3000 左右，可稳定较长一段时间。蛋白来源肺脏
21、蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：19 kd,35 kdWB 用膜类型、孔径：0.2pvdf转膜方式（恒压、恒流）：恒流 250转膜时间：150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad mini蛋白来源：大鼠血管蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：140 kdWB 用膜类型、孔径：0.45pvdf转膜方式（恒压、恒流）：恒流，200 mA转膜时间：210 min转膜设备:湿转,北京六一蛋白来源：心肌蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：90 kDa，70 kDa,12.6 kDaWB 用膜类型、孔径：NC转膜方式（恒压、恒流）：恒压转膜时间：70 v 240 min，120 min，60 min转膜
22、设备：伯乐湿转 蛋白来源：脑蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：16 KD 60 KDWB 用膜类型、孔径：16 的用 0.22 的 PVDF，60 的用 0.45 的 NC转膜方式（恒压、恒流）：20 V转膜时间：16 的 30 min，60 的 90 min转膜设备：Bio-Rad 半干蛋白来源：子宫内膜癌组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：156.8WB 用膜类型、孔径：NC 膜转膜方式（恒压、恒流）：恒流 400mA转膜时间：90 min转膜设备：湿转 Bio-Rad蛋白来源：真核表达蛋白名称（可保密）：（多种，30 个以上）蛋白分子量：40-200 kDWB 用膜类型、孔径：PVDF
23、转膜方式（恒压、恒流）：恒压 100 V（电流在 280 mA 至 350 mA 之间）转膜时间：60 min（M100kD）,60-100min (100kDM200kD)转膜设备：湿转蛋白来源：大鼠肾脏蛋白名称（可保密）：保密蛋白分子量：130 kDWB 用膜类型、孔径：0.45NC 膜 PALL转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流 350 mA转膜时间：120min设备名字 Bio-Rad mini一抗用的 sigma 羊抗大鼠，0.2 mL 包装的，打折后价格 3000 多，有些贵哦。比例调整到 1：1500 左右条带可，用 BSA 封闭。但是背景稍高。蛋白来源：脑组织蛋白名称（可保密）：蛋白分子量：38 KDaWB 用膜类型、孔径：PVDF 膜，转膜方式（恒压、恒流）：80 v 恒压转膜时间：180 min转膜设备：湿转 Bio-Rad mini蛋白来源：真核表达
