实验室生物安全操作及管理.ppt

实 验 室生物安全操作及管理,,一、定义和概念,1. 生物因子 biological agents 微生物和生物活性物质。 2.危险 hazard 可能导致死亡、伤害或疾病、财产损失、工作环境破坏或这些情况组合 的根源或状态。 3.危险识别 hazard identification 识别存在的危险并确定其特性的过程。 4.风险 risk 危险发生的概率及其后果严重性的综合。,5.气溶胶 Aerosol 悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001-100μm的固态或液态微小粒子形成的稳定的分散体系。 6.微生物危害评估 Hazard Assessment for Microbes 对实验微生物和毒素可能给人或环境带来的危害所进行的评估。 7.污染 contamination 物质或事物由外来的物质或因子而造成的不希望的影响。 8.去除污染 decontamination 为了安全，去除或减少污染物（原）或其影响的过程或方法。,9.传染控制 control of infection plan 在实验室建立的限制感染扩散的程序。 10消毒 disinfection 减少细菌芽胞除外的微生物的数量，不需杀灭或清除全部的微生物。 11.灭菌 sterilization 有效致使目的物没有微生物的过程。 12.消毒剂 disinfectant,13.净化 clean 去除生物和非生物的所有类型污染的过程。 14. 高效空气过滤器 HEPA High Efficiency Particulate Air Filter 通常以0.3μm 微粒为测试物，在规定的条件下滤除效率高于99.97%的空气过滤器。 15.实验室生物安全laboratory biosafety 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。,16. 物理防护设备 Containment Device 用物理或机械方法防止病原体逸出的设备。 17. 排风罩（烟罩） extraction hood（fume hood） 实验室设备上面的排除空气或烟雾的箱体或罩体，避免其在室内循环。 18. 安全罩 safety hood 覆盖在生物医学实验室工作台或仪器设备上的相抵于环境为负压的排风罩，以减少实验室工作者的危险。,19.生物安全柜biological safety cabinet，BSC 具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。 20.个人防护装备 personal protective equipment 用于防止人员受到化学和生物等有害因子伤害的器材和装备，包括衣服。,21.生物医学实验室 biological and medical laboratory 为人类健康和社会生产的发展提供科学依据，进行人体和动、植物科学观察和试验的实验室。 22.生物安全防护实验室 Biosafety containment for Laboratories 通过规范的实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用，严格遵从标准化的工作操作程序和管理规程等，确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害，确保周围环境不受其污染,确保实验因子保持原有本性所采取综合措施的实验室。,23.兽医实验室 veterinary laboratory 一切从事兽医病原微生物、寄生虫研究与使用，以及临床诊疗、检疫、监测的实验室。 24.人畜共患病 zoonosis 人和动物间相互传播的传染病。 25.外来病 exotic disease 国外存在和流行的，但国内尚未证实存在或已被消灭的传染病。 26.压力梯度 Relative Pressure 两个压力测量点间气压的差值。,27.实验室分区 classification of laboratory area 在生物安全实验室中按照实验因子污染的概率分区。 27.1. 清洁区 在正常工作中没有实验因子污染的可能。 27.2.半污染区 在正常工作中没有污染，只是存有潜在轻微污染的可能。 27.3.污染区 在正常工作中一般没有污染，但有一定的较大和较严重的污染机会。,28.气锁air lock 具备机械送排风系统、整体消毒灭菌条件、化学喷淋（适用时）和压力可监控的气密室，其门具有互锁功能，不能同时处于开启状态。 29. 单向锁定 unilateralism lock 一个门锁定后，另一个门才能开启 30. 安全资料数据单 material safety data sheets (MSDS) 详细提供的危险因素及预防信息的技术报告。,P3和BSL-3的不同 31、P：physical containment level（lab.)的字头,即（物理屏障水平（实验室）） 32、BSL：biosafety level（或BL）即：生物安全水平 —— P只强调物理屏障的作用， —— BSL—则反映必须采取综合措施才能达到生物安全的本质特点。,二、实验室生物安全防护水平分级,根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平分为4级： 1.安全防护水平I级 生物安全防护水平为一级的实验室适用于操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物； 2.安全防护水平Ⅱ级 生物安全防护水平为二级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物,3.安全防护水平III级 生物安全防护水平为三级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物 4.安全防护水平Ⅳ级 生物安全防护水平为四级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。,三、生物危险评价,评价内容 1. 微生物的传染性和致病性 2.传播途径 3.微生物的稳定性 4.感染剂量 5.微生物浓度 6.来源 7.动物研究数据的可用性 8.预防和治疗,微生物的危险评价常常是涉及以下范畴： 1.已知的传染微生物 2.未知传染微生物 3.基因修饰微生物 4未知是否有未知传染性的生物材料 5.动物实验,美国CDC/NIH对微生物指导性分类 第一类，不引起健康成年人疾病 第二类，可通过破损皮肤、消化道及粘膜暴露等方式引起人 类疾病 第三类，本土或外来的微生物，通过吸入途径暴露时可以造 成严重或潜在致死性疾病 第四类，可以引起严重且威胁生命的人类疾病，可通过气溶 胶传播，或相关的传播危险性不明的微生物 生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别。,,当建设、使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须进行微生物危害评估。 通过微生物危害评估确定对象微生物应在哪一级的生物安全防护实验室中进行操作。根据危害评估结果，制定相应的操作规程、实验室管理制度和紧急事故处理办法，必须形成书面文件并严格遵守执行。,四、生物安全,（一）生物安全水平1.生物安全水平分级,1.生物安全水平（biosafety level，BSL） 以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4（bio-safety level，BSL）表示仅从事体外操作的实验室的相应生物安全防护水平 以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4（animal bio-safety level，ABSL）表示包括从事动物活体操作的实验室的相应生物安全防护水平。,2.生物安全的重要性,（1）    反生物恐怖的需要 （2）    应对紧急卫生事件的需要 （3）    防止外来生物危险因子侵入的需要 （4）    实验室工作的需要 （5）    防止医院感染的需要 （6）    防止人畜共患病的需要,3.生物安全的由来,生物恐怖 医院感染 实验室感染 动物实验室感染,动物实验中的安全,（1）带进实验室的动物应进行检查处理,勿使带有体外寄生虫和传染病。 （2）已接种动物不得与健康动物混合饲养。要单独饲养在相应安全级别的隔离室内。 （3）接触动物时,特别是猴、狗等大动物,要戴防护手套和穿防护靴。要针对各种动物行为特点,采取相应措施防止被其抓咬。 实验室内任何死亡动物必须经技术人员鉴定后才可处理，一般都应予以焚烧。实验动物尸体焚烧前应装于密封塑料袋内以防扩大污染 要强调的是，动物感染微生物时，安全防护的级别要比感染微生物原有危险级别提高一级。,能够产生微生物气溶胶的活动,接种环操作，吸管操作，针头和注射器操作： 培养和划线培养，混合微生物悬液;吸管操作液体溢出在固 体表面，排除注射器中的空气;从塞子中拔出针头;接种动物; 针头从注射器上脱落喷出毒液;离心;使用搅拌机、混合器、 超声波仪和混合用的仪器;打开培养容器；感染性材料的溢 出；在真空中冻干和过滤；接种鸡胚和培养物的收取。,4.生物威胁的来源,生物安全与生物威胁是双胞胎： 首先，各种致病微生物的威胁, 其次，是外来生物入侵。据1999年康乃尔大学公布的研 究结果说明，美国外来生物入侵所造成的直接经济损失每年 都达1226亿美元。 再次，随着现代科学技术的发展，世界上出现了越来越 多的转基因生物，转基因生物存在着一定风险。体健康。 第四, 生物恐怖事件,5.保障生物安全的主要措施,A.区域划分，围场操作，避免逃逸。 B.负压过滤，通风，高空排放。 C.灭菌消毒 D.初级防护 E. 次级防护,（二）生物安全条件,1.国际常见市售生物安全柜及其型号 BSC BSC-1 BSC-2 IIB-1 IIB-2 IIB-3 BSC-3,2.II级生物安全柜的安装,(1)生物安全柜在安装搬运过程中，严禁将其侧倒放置和拆卸，到搬入安装现场后拆开包装。 (2)生物安全柜安装位置在设计未指明时应避开人流频繁处，并应避免房间气流对操作口空气幕的干扰。  (3) 如果实验室有窗户，应始终保持关闭。安全柜不能安装在房间通风系统的进口，以免气流直接吹到安全柜正面的操作口和排风滤器上。 (4) 安全柜的周围应留出12英寸(304.8 mm)的空间，以便于清除赃物。如果由于空间限制，至少应在两边留出3英寸(76.2 mm)，背面留出1.5英寸(38.0 mm)。应在安全柜的电源处留出足够的空间，以便于在不移动安全柜的情况下，就可以进行维修。 (5)安装的生物安全柜的背面、侧面离墙壁距离应保持在80～300mm之间。底面和底边紧贴地面的安全柜，所有沿地边的缝隙应加以密封。 (6)生物安全柜的排风管道的连接方式，必须以更换排风过滤器方便来确定。,3.II级生物安全柜的检测试验,下列情况之一时，必须对II级生物安全柜进行现场检测： （1）实验室施工时，在II级生物安全柜搬到指定位置后。 （2）II级生物安全柜移动位置时。 （3）对II级生物安全柜进行检修后。 （4）II级生物安全柜更换过滤器后。 （5）II级生物安全柜的一年一度的常规检测。,4.现场检测的必测项目,垂直气流速度断面测定。所用仪器方法是： （1）仪器：准确度为读数±3%的热球风速仪。 （2）方法：测点为柜内送风口下方0.15m处，为均匀测点。测点间距不大于0.12m.测点布置不少于3行，靠内壁的行距内壁0.15m,每行不少于7个测点。 （3）判定：垂直气流均匀区所测平均风速与生产厂家给定值之差±0.025m/s,且单点风速与所测平均风速之差不大于20%为合格。,5.工作窗口进风风速测定,（1）方法：采用JGJ-90洁净室施工及验收规范中所规定方法 测定生物安全柜对应工作窗口进风风量的排风风量（见下注），再除以生物安全柜工作窗口面积, 便可计算出进风风速。 注：某些型号的生物安全柜除从工作窗口进风以外，还有另外的进风口。从排风管的总排风量扣除进风口进风量即为对应工作窗口进风风量的排风风量。 （2）判定：所测进风风速与生产厂家给定值之差小于0.025m/s为合格。,6.烟雾试验：用发烟物作直观判断,(1)在工作表面中线上方高于工作窗口上沿0.15m处, 从侧壁的一端到另一端,边发烟边移动，烟雾运动应为垂直流线，不得有死角和回流。 (2)距观察窗内表面0.15m处从一端到另一端发烟，应为垂直流线，不得有死角和回流，也无烟雾从安全柜溢出。 (3)距工作窗口外沿0.04m,沿窗口发烟，吸入的烟无溢出，工作表面无烟雾。 (4) 如为推拉式工作窗口，应检查边沿密封情况。,7.安全泄漏试验,（1）压力试验:试验前使生物安全柜处于全关闭状态，即将风管和工作窗口关闭（可用密封胶带密封）。断电时对生物安全柜内部充气加压至500Pa后停止加压，观察压力保持情况。压力30分钟下降小于10%为合格。 （2）压力渗漏试验：应确认所有接缝的气密性及整个设备没有漏气。  （3）其他检测,8.生物安全柜的操作,1、一切操作动作都不能破坏安全柜的定向气流。 2、操作人员在安全柜前的走动速度不可过快，如果安全柜附近放置有电扇、加热器、空调器或空气净化器等设备，也会影响安全柜的气流方向。 3、正常使用过程中也要每6个月或每年检测一次。 4、安全柜必须进行标准所规定的各项检测内容，必须进行满足生物性能、使用时间、可靠性、安全性以及操作维护和洁净度要求的各项测试。,五、实验室生物安全管理制度,（一）实验室内设置和准入 在主实验室内应合理设置清洁区、半污染区和污染区 非实验有关人员和物品不得进入实验室 实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批准,（二）实验室工作人员资格和培训,实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始工作 实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危险并接收实验室安全教育，自愿从事实验室工作 实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程 三级和四级生物安全防护实验室的工作人员留本底血清进行相关检测，以后定期复检。,（三）实验室特殊管理,对可能的危险因素，制定保证安全的工作程序 事前进行有效的培训和模拟训练 对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业性保健治疗的措施，足以应付紧急情况 实验室事故处理及上报,六、不同实验室的要求,一级生物安全实验室 BSL-1 二级生物安全实验室 BSL-2 三级生物安全实验室 BSL-3 四级生物安全实验室 BSL-4,（一）一级生物安全防护实验室 1,实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物； 包含微生物举例 大肠杆菌 格鲁伯耐格里原虫 感染性犬肝炎病毒 枯草杆菌,一级生物安全防护实验室 2,实验室设施和设备要求： 实验室的门应有可视窗并可锁闭，门锁及门的开启方向应不妨碍室内人员逃生。 应设洗手池，宜设置在靠近实验室的出口处。 在实验室门口处应设存衣或挂衣装置，可将个人服装与实验室工作服分开放置。 实验室的墙壁、天花板和地面应易清洁、不渗水、耐化学品和消毒灭菌剂的腐蚀。地面应平整、防滑，不应铺设地毯。 实验室台柜和座椅等应稳固，边角应圆滑。 实验室台柜等和其摆放应便于清洁，实验台面应防水、耐腐蚀、耐热和坚固。 实验室应有足够的空间和台柜等摆放实验室设备和物品。,一级生物安全防护实验室 3,应根据工作性质和流程合理摆放实验室设备、台柜、物品等，避免相互干扰、交叉污染，并应不妨碍逃生和急救。 实验室可以利用自然通风。如果采用机械通风，应避免交叉污染。 如果有可开启的窗户，应安装可防蚊虫的纱窗。 实验室内应避免不必要的反光和强光。 若操作刺激或腐蚀性物质，应在30 m 内设洗眼装置，必要时应设紧急喷淋装置。 若操作有毒、刺激性、放射性挥发物质，应在风险评估的基础上，配备适当的负压排风柜。 若使用高毒性、放射性等物质，应配备相应的安全设施、设备和个体防护装备，应符合国家、地方的相关规定和要求。,一级生物安全防护实验室 4,若使用高压气体和可燃气体，应有安全措施，应符合国家、地方的相关规定和要求。 应设应急照明装置。 应有足够的电力供应。 应有足够的固定电源插座，避免多台设备使用共同的电源插座。应有可靠的接地系统，应在关键节点安装漏电保护装置或监测报警装置。 供水和排水管道系统应不渗漏，下水应有防回流设计。 应配备适用的应急器材，如消防器材、意外事故处理器材、急救器材等。 应配备适用的通讯设备。 必要时，应配备适当的消毒灭菌设备。,（二）二级生物安全防护实验室 1,生物安全防护水平为二级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物 涉及到的微生物举例： —— 沙门氏菌 、志贺氏菌、 —— 弓形体、衣原体 —— 乙型肝炎病毒、麻疹病毒、,二级生物安全防护实验室 2,实验室设施和设备要求： 适用时，应符合 BSL-1实验室的要求。 实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门应可自动关闭；实验室主入口的门应有进入控制措施。 实验室工作区域外应有存放备用物品的条件。 应在实验室工作区配备洗眼装置。 应在实验室或其所在的建筑内配备高压蒸汽灭菌器或其他适当的消毒灭菌设备，所配备的消毒灭菌设备应以风险评估为依据。 应在操作病原微生物样本的实验间内配备生物安全柜。 应按产品的设计要求安装和使用生物安全柜。如果生物安全柜的排风在室内循环，室内应具备通风换气的条件；如果使用需要管道排风的生物安全柜，应通过独立电力供应。必要时，重要设备（如：培养箱、生物安全柜、冰箱等） 应配置备用电源。,二级生物安全防护实验室 3,特殊微生物操作规程 满足一级实验室 (标准微生物操作规程) 各款要求， 在此基础上特别注意： 制定出入制度 实验室人口贴上生物危险标志 制定实验室特定的生物安全操作规则 每年一次最新培训制度,二级生物安全防护实验室 4,特殊微生物操作规程 针具 & 利器使用注意事项： 禁止用手处理破碎的玻璃器具 用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止用手直接从注射器取下。 用过的针头必须直接放入防穿透的容料中。 非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒,二级生物安全防护实验室 5,特殊微生物操作规程 培养基、组织、体液及其它具有潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌。,二级生物安全防护实验室 6,特殊微生物操作规程： 工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等) 必要时收集从事危险性工作人员的本底血清 实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒 人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案 禁止将无关动物带入实验室,二级生物安全防护实验室 7,安全设施和个体防护 在一级生物安全基础上，处理以下致病微生物时应在生物安全柜 (Ⅱ级) 中进行 ，包括: 高浓度 大容量 有喷溅可能性 上述材料的离心操作如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行。 当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用面部保护装置,二级生物安全防护实验室 8,安全设施和个体防护 在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤或丢弃。 当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得戴着手套离开实验室，工作完全结束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。,二级生物安全防护实验室 9,负责人： 应为更具责任感、能力的专家 限制免疫耐受者进入实验室 限制正在接受免疫抑制剂者进入实验室 工作人员： 认识到工作中可能存在的危险 操作/技术熟练,（三）三级生物安全防护实验室（P3）,实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素。通常已有预防的疫苗。 涉及到的微生物举例： 鼠疫杆菌、炭疽杆菌、结核分枝杆菌 立克次氏体、HIV (血清学检测除外) 狂犬病毒等,P3实验室管理及安全,P3实验室设施管理 P3实验室人员管理 P3实验室规章制度 P3实验室安全操作,1.P3实验室设施 1,离开建筑物内的行走区，禁止随便进入实验室。至少需要经过两道自动门，才能进入实验室。所有的门都应有锁。过道里可以设计一个更衣室。 装有脚踏或感应流水装置，备有冲洗眼睛的生理盐水，足够的一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜。,P3实验室设施 2,备有真空系统设施，产生从洁净区到实验室污染区的定向气流。排出室外的空气不准在建筑物内其它区域循环使用，须经过过滤和其它处理程序排出。实验室工作人员必须保证进入实验室气流的方向正确（负压，清洁-污染）。 应配置生物安全柜，安全柜放置地点应远离门及实验室内行走区。 污染的设备在运出维护前必须消毒。所有废弃物或物品，在丢弃或重新使用前必须消毒。 须注意设施的锐角 以上为基本设施，其余应根据实验工作决定,2.P3实验室人员管理 1,负责人应经验丰富并能胜任以下工作 ◆建立实验室准人制度 ◆建立实验室的安全规则及操作规程 ◆对实验室人员进行培训 负责人应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所设计的生物材料，对实验室环境做安全检查。 新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前，必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和物品不得进入实验室。,P3实验室人员管理 2,工作人员必须经过HIV检测技术和实验室安全培训，包括上岗培训和复训。已知实验室的潜在危险，自愿参加工作并接受实验室管理人员的监督。 实验室的安全责任人对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。 必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。 严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度。每半年进行一次HIV抗体检测，并保留样品。 对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外事故造成HIV职业暴露者，所在单位应负责解决抗病毒及其它相应治疗的医疗费用。,P3实验室人员管理 3,实验室工作人员 ■ 严格执行P3级生物学安全实验室各项规章制度，按操作规程使用仪器设备 ■ 熟练操作 ■ 接受定期培训 ■ 汇报事故 ■ 参加定期的体检,P3实验室人员管理 4,工作人员在对病原体进行操作时，不得触摸暴露的皮肤、眼睛等。临时有病如感冒、咳嗽、过敏、皮肤创伤等不得进入P3实验室核心部分。 严格的个人防护对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险性。 每个工作人员必须对自己工作过的区域进行消毒处理和打扫卫生，所有打扫卫生的用品在各工作区不能交叉使用。,3.P3实验室规章制度 1,（1）出入制度 Ⅰ区：更换P3实验室专用衣、裤、鞋、帽、口罩、手套 Ⅱ区：可在此区进行血清学检测等工作 缓冲间：加穿无菌衣、鞋套、戴口罩、帽子、眼镜及双层乳胶手套 Ⅲ区：进行细胞和病毒培养及各类带毒操作。 进入各区后，必须立即关门，而且各区门不可同时打开。 人员出实验室各区，按上述顺序逆向更衣、换鞋，不可穿实验室内工作服、鞋出实验室。,P3实验室规章制度 2,所有进入P3实验室的人员（包括来访者、维护工人、修理工和其它只进入一次或偶尔进入的人员）都应作记录。 实验操作时要限制学生、来访者、清洁工、维护人员及修理工等无关人员入内。,P3实验室规章制度 3,（2）物品管理制度 进入P3级生物学安全实验室的一切物品，外表必须干净、无尘，进入Ⅲ区的物品应为无菌。每次使用的全套防护服必须高压灭菌处理。 移出P3实验室的一切物品，凡能高压消毒的必须经120℃高压灭菌消毒30分钟；凡不能消毒的，其外暴露部分必须经75％乙醇或0.5％过氧乙酸消毒；各种废物、废液需经高压灭菌处理后，运出实验室。,P3实验室规章制度 4,实验室必须备消毒液体如10%（v/v）次氯酸钠溶液，70％乙醇溶液及棉球。 实验室内不可有锐器(刀、针、碎玻璃等)暴露，剪刀用完立即放回盒中，一次性针头用完放入饭盒内高压，不慎打破的玻璃器皿必须立即将全部碎片收集干净。,P3实验室规章制度 5,对存放生物试剂和有毒物区域的监控 冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学危险品、放射性物质的容器置于工作人员视线之外的地点时应上锁。应设有专门储存阳性血清的低温冰柜，并应上锁。 各种毒种，从国外引进和本实验室分离的，根据其在细胞内外存在，分别保存在液氮和深低温冰箱内。指派专人保管毒种，严格登记，使用毒种必须经批准。,P3实验室规章制度 6,（3）实验室及设备使用维护制度 实验室日常护理：每日晨清洁实验台面、各仪器表面及地面灰尘；开启实验室动力系统，调结好压力及温度，开紫外灯照射20分钟；检查，记录实验室内各设备的工作情况(重点C02孵箱、冰箱、生物安全柜及废物处理情况)；待全部实验完成后开室内紫外灯30分钟后关灯，写实验日志，检查电灯是否断电，锁门。,P3实验室规章制度 7,实验室内各种仪器设备作定期维护和检修，每月对高压锅进行一次生物质控并做好记录，每半年对实验室及安全柜进行一次安全性鉴定并做好记录。 每月对实验室搞一次卫生大扫除，内容包括所有地面、桌面、窗、墙、壁，超净台及C02孵箱内，玻璃窗等实验室内所有部位。,P3实验室规章制度 8,（4）实验资料记录、管理制度 应及时准确地做实验记录，内容包括：日期、操作者，所用毒种、细胞、实验内容、过程，结果及有无事故等。 整个P3实验室统一的实验资料要有专人负责，按固定格式记录在案，其项目包括：实验室工作日志，毒种及细胞保存记录，仪器设备记录、药品记录、血清学检测记录等。,4.P3实验室安全操作 1,（1）实验开始前 开机1小时净化空气，检查空调，通风系统及其负压值，开P3洁净间紫外灯照射20分钟。 关紫外灯10分钟后，穿戴隔离衣、帽、口罩和高质量手套。 与实验无关人员不得进入。,P3实验室安全操作 2,（2）实验过程中 实验时，由实验室主任决定限制或禁止人员进入实验室。 接触传染源的人员 在离开实验室取下手套后，要洗手。 在生物安全柜中操作 使用防止气溶胶的设备 如有溅出，迅速消毒,P3实验室安全操作 3,不能用嘴移液，只能用机械装置移液。 所有的操作过程应尽量细心，避免产生气溶胶。 尽量避免使用尖锐物品和利器，包括注射器、针头、刀片、玻璃制品、载玻片等。建议用不易破碎材料制品，如塑料移液管等。,P3实验室安全操作 4,实验室内严禁饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。实验室内戴隐型眼镜的人，也要戴眼镜和面罩 不得用戴着手套的手触摸暴露的眼睛、鼻子和皮肤，一旦发现手套破损或受污染，应立即脱下手套，用肥皂洗手，再更换手套，如发生皮肤损伤或样品材料污染皮肤，应流水用力挤压冲洗伤口，再用酒精洗擦，并做记录、报告。,P3实验室安全操作 5,所有与传染源有关的开放操作，都应在II级或III级生物安全柜中进行。,P3实验室安全操作 6,当操作不能在生物安全柜中进行时，应适当的综合使用个人防护设施(如，口罩，面罩等)和物理遏制设施(如：带安全罩或密封转头的离心机)。 实验在负压存在下进行时，实验过程中不得开门、开传递窗。 停电后应立即停止实验。 不间断电源,P3实验室安全操作 7,当进入内有感染动物的房间时，应采取呼吸和面部保护措施。 当有传染源洒出或溅出后，应当使用有效的消毒剂消毒。 洒出的传染源需由专业人员、或由经过培训且配有装备的处理高浓度传染源的人员进行消毒、处理、清洗。,P3实验室安全操作 8,（3）实验结束后 对实验中使用过的仪器、工作台用乙醇一碘伏或其它有效氯含量为10%（v/v）的消毒剂擦抹消毒；其它器材、物品及污物(固体、液体)高压消毒120℃1小时。 检查空调通风系统及其负压值，并做记录。 打开紫外灯消毒30分钟，检查水电安全后再锁门。,P3实验室安全操作 9,（4）带入和带出实验室的物品 对所有带入实验室的物品都应进行检查。含有测试样品的包裹应在安全柜或其它适当的装置内打开。 将测试样品转送到其它实验室时，应防止对人员和环境的污染。护送样品的人应明确接受地点和接收人，实验室负责人或其指定的人员应及时确认样本已送达指定的实验时，被转入安全位置并得到妥善处理。,P3实验室安全操作 10,污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。 试验室所有垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于专门污物袋内，经焚烧或有效消毒处理后丢弃，污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤。 所有尖锐物品应置于不易刺破的容器内，消毒后用合适的方法处理。,P3实验室安全操作 11,（5）样本的转送和发放 样品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或血浆，除特殊需要外，一般不能用全血。 且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有明显的标记。清楚地标记为感染性材料（按所在生物安全防护实验室的级别标明相同的级别）。 感染性材料必须放在密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料的生物危险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质，以免破碎，容器外表有专用字样。如果路程较远或者气候炎热时，盛有样本的容器应至于4℃以下转运,P3实验室安全操作 12,第一道包装（紧贴样品层） 加入吸水层（第二层） 第二道包装（第三层） 防渗漏包装（第四层） 外包装（最外层）,P3实验室安全操作 13,（6）实验室事故处理 职业暴露是指实验室、医护、预防保健人员以及有关的监管工作人员，在从事传染病防治工作及相关工作的过程中意外被传染病感染者或患者（患病动物）的血液、体液污染了破损的皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有传染病病原的血液、体液污染了的针头及其它锐器刺破皮肤，而具有被相应传染病原感染的可能性的情况。,P3实验室安全操作 14,紧急处理措施 皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤出的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。,P3实验室安全操作 15,粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。 污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。,P3实验室安全操作 16,事故登记 事故发生的时间、地点及详细经过。 暴露方式；受伤部位、伤口深浅、暴露程度；污染物种类（培养液、血液或其它体液）以及其中含有HIV的情况。,P3实验室安全操作 17,处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。 是否采用暴露后药物预防，如果是，应详细记录用药情况，包括首次用药时间、服药方案和毒副作用。 随访检测的日期、项目和结果。,P3实验室安全操作 18,报告和检测 发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测抗体，暴露一年内要定期检测。 发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家，检测同前。,P3实验室安全操作 19,对感染可能性很大的医护、检验人员可使用预防性治疗药物，治疗方案须根据暴露情况由专家决定。对于感染危险性很小的，建议不使用药物预防。 对仍可能有危险的人，是否用药治疗，应权衡较低的感染危险性与使用药物的效力和药物毒、副反应以及坚持用药的依从性等利弊。,结束语,实验室安全关系到你、我、他； 涉及到你家、我家和大家； 我们的工作影响到到社会政治稳定！ 经济持续发展！ 人民生命安全！ 完善工作条件 严守操作规程 避免事 故发生。,