1、公猪采精1公猪采精与稀释操作规程1、采精与精液处理流程（讲究卫生，控制温度）（1）采精过程流程1、 进入实验室后清洁双手2、 准备稀释液，并将稀释液放入 35水浴锅中升温3、 打开显微镜上的加热板控制开关，设定温度到 384、 安装集精杯（预热到 37），准备其它采精用品，放入壁厨5、 将公猪赶入采精室，关上栅栏，清洁其体表6、排出包皮液用 0.1KMnO4 溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。7、 戴上双层手套，诱导公猪爬跨假母猪8、 锁定并拉出阴茎9、 待排出部分清亮液体后，开始收集精液10、将集精杯放入壁厨11、将公猪赶回圈内（2）精液处理操作流程1将一预温后的烧杯或塑料杯放在电子
2、秤上，打开电子秤，当显示为零时，将装精液的食品袋从集精杯中取出放入杯中，显示读数为精液的重量。2将放精液的烧杯轻轻摇匀精液后，放入 35的水浴锅中与稀释液等温。3立即用取样器取精液 1025 微升左右，滴在载物台上预热的载玻片上，盖上盖玻片，估测活力。精子活力大于 0.6，则可用于下一步的处理。4另取 1 毫升精液放入加有 10 毫升生理盐水的精子密度杯中，读出读数后，在查对表上查到精子密度值。5计算精液可分装的份数和最终的精液体积或重量。6将大烧杯放在电子秤上，除皮，然后再将精液袋放入其中，并将精液袋上口翻在杯沿外，将装稀释液的三角瓶从水浴锅中取出，擦去底部水分，将稀释液加入大烧杯中，直到达
3、到计算的最终重量，轻轻摇动或用玻璃棒搅拌精液使其混合。7、精液稀释后，检查精液活力，若无明显下降，开始分装。8将精液按规定重量分装于各个精液瓶（袋）中，排出空气后封口，进行精液标记，置 22-25的室温 1 小时后(或用几层毛巾包被好后)，降温到20左右时直接放置 17冰箱中。公猪采精29清洗各种容器并放于消毒柜中干燥消毒。2、稀释液的配制过程 2.1 配制过程以 1000 毫升 BTS 稀释液为例，可用任一方法：经过清洗干燥消毒的三角瓶，将一袋 BTS 稀释粉（50 克）全部加入瓶中，用量筒量取双蒸馏水 1000 毫升，加入三角瓶中。盖上盖子或用稀释粉袋套在三角瓶口上，封紧摇动，使稀释粉完全
4、溶解。或放在磁力搅拌器上，搅拌加速溶解。取下盖子，放入 35的水浴锅中预温。稀释液用过后，三角瓶应用蒸馏水冲洗，空干水分，然后将三角瓶、量筒用牛皮纸封口，放入 80120的消毒柜或干燥箱中烘干。将两个食品袋相套放入大烧杯中或塑料杯中，放在电子秤上，打开电子秤开关，当电子秤上读数为零时，将连接蒸馏水容器的硅胶管放出少量水后，将管口对准杯口注水，并注意读数变化，当接近 1000 克时，应放慢流速，改为滴注，直到 1000 克。之后，应将蒸馏水管的龙头套好，防止污染。在大烧杯中加入一袋稀释粉（50 克）。从盛磁珠的小烧杯中取镊子并夹取磁珠，在废液缸上用洗瓶冲洗磁珠 2-3次，待磁珠上水分滴净后，放入
5、烧杯中，然后将烧杯放在磁力搅拌器上，打开电源开关和加热开关，调整磁珠转速旋扭，使磁珠以适当速度旋转（水体形成涡流），使稀释粉全部溶解后，降低磁珠转速，关闭加热和电源开关。将杯子放入 35的水浴中预温。注：不能控温的加热磁力搅拌器使用时间不可超过 10 分钟，或及早关闭加热电源；平时磁珠放在一个清洗干燥过的小烧杯中，注入新鲜蒸馏水半杯，镊子为不锈钢材料，也经清洗干燥放入杯中，盖上干净的培养皿，每 3 周应换掉陈水，冲净换上新的蒸馏水。稀释液加入精液中后，应用小烧杯中的镊子将磁公猪采精3珠从大烧杯中夹出，并在废液缸上冲洗磁珠和镊子前端 3-4 遍，待磁珠上水分滴净后，连同镊子放入小烧杯中，盖上培养
6、皿。这种方法由于稀释液是在一次性食品袋中配制的，因此，不需要对配制稀释液的容器进行清洗和消毒，实现了稀释液配制的免消毒。冬季稀释粉溶解较慢，可将稀释粉与水混合后，放入水浴锅中预温 10 分钟，再摇匀，可加速稀释粉溶解。使用加热磁力搅拌器者不必在水浴锅中预温。注：除大规模人工授精站外，一般不主张自己配制稀释粉，推荐使用商业化稀释粉，这些产品质量稳定可靠。另外，稀释粉与蒸馏水按什么比例混合是十分严格的，应按照说明书上的配比进行稀释粉的溶解，不可改变配比。2.2 PH 值与渗透压用 1N 稀盐酸或 1N 氢氧化钠调整 BTS 稀释液的 PH 值为 7.2(6.8-7.4)左右,渗透压为 330mOs
7、m2.3 稀释液的保存液态状稀释液冰箱 4保存，不超过 24 小时，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。3、采精前的准备1.集精杯的准备应在实验室中进行。用保温杯作集精杯时，不能直接将精液采入杯中。将两层食品袋装入保温杯内，并用洁净的玻璃棒使其贴靠在保温杯壁上，袋口翻向保温杯外，上盖一层专用过滤网，用橡皮筋固定，并使过滤网中部下陷 3 厘米，以避免公猪射精过快或精液过滤慢时，精液外溢。安装好后，将其放恒温箱在 37温度下备用。如果是纸杯作集精杯，在杯口上固定上一次性过滤网，并使网面下陷 23厘米，如果没有恒温箱，可在安装集精杯之前，用电吹风机将集精杯内壁加热到温热状态（不可加热到烫手）。公猪采精
8、4采精前应将集精杯、消毒纸巾、一次性手套放入壁厨中，以方便采精时取用。2精液品质检查用品准备 最好先将显微镜调好备用，把显微镜加热板放在显微镜载物台上，用标本夹固定好，打开电热板控制器电源开关，把设定温度调到 38再打到测温状态，准备好两张洁净的载玻片和两张洁将的盖玻片放在加热板上预温。将电子秤、密度测定等用品准备好。3 公猪的准备采精员将待采精的公猪赶至采精栏，关上采精区的栅栏门，并用毛刷刷拭假母猪的台面和后躯下；然后再清扫公猪两侧肋腹部及下腹部，必要时，可将公猪的阴毛剪短（留 3 厘米）。4采精员的准备采精员应穿上工作服，将公猪赶入采精室后，清扫猪体后，应尽快右手戴上双层无毒的一次性手套，
9、带上纸巾、集精杯、小凳准备采精。4、采精技术一、采精的目标与要求1用最简单的方法采集到全部含较多精子的精液公猪性反射和射精特点与牛羊不同，其龟头对压力、约束力较为敏感，而对温度相对不敏感，因此公猪采用假阴道法采精效果往往不佳，而且猪射精时是分段射精的，一般不能收集最初射出的精液和清亮无精子的精液，因此，公猪适合用拳握法进行采精。这种方法既简单，又便于分段收集精液。2采集到的精液最大限度地不受到任何污染由于采精过程中，射精、收集精都是在开放的环境中，精液极易受到污染。采精用的手套、集精杯、过滤网等与精液接触的物品必须无菌和对精子无毒害，一定要避免公猪体表及阴毛上的污物、包皮液、尿生殖道中的尿液、
10、空气中的灰尘进入精液中。3尽可能使精液不受到外界温度的影响公猪的精液对温度十分敏感，尤其是低温。因此，采精室的温度能够控制，不应低于 10，最好在 15-25之间，这不仅有利于公猪的性行为正常，而且能避免外界温度对精液温度的影响。二、采精过程公猪采精51、 诱导公猪爬跨假母猪 采精员可摩仿发情母猪的叫声，并敲击假母猪诱导公猪爬跨。2、 在 采 精 之 前 先 剪 去 公 猪 包 皮 上 的 被 毛 ， 防 止 干 扰 采 精 及 细 菌 污 染2、排出包皮液 用 0.1KMnO4 溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。公猪爬跨上假母猪后，采精员可坐公猪左后侧的小凳上，用右手按摩公猪包皮腔，
11、尽可能将包皮腔中的包皮液（尿液）排净，并用纸巾拭干。3、锁定公猪阴茎并将其拉出 公猪阴茎勃起后，开始有试图插入母猪阴道的动作，但有些公猪伸出阴茎较慢，需要按摩包皮以帮助阴茎伸出。公猪阴茎伸出后，采精员应脱去外层手套，右手呈锥形的空拳，即拇指一侧较松，小指一侧较紧，拳心向上，使龟头（螺旋部分）进入空拳中，只让公猪的龟头伸出空拳 1 厘米左右，或不让其伸出拳外，用中指、无名指和小指锁定龟头，注意不要抓握阴茎体部（非螺放部分），以防造成公猪不适而从假母猪上退下，然后顺其向前冲力，将阴茎的“S”状弯曲尽可能地拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可安静下来并开始射精；如果假母猪的结构合理，可将其阴茎向左
12、前上拉，并使龟头向下弯（见图），这样有利于防止包皮腔中的残存包皮液顺着阴茎流至集精杯。“挤 出 包 皮 积 尿 ， 按 摩 公 猪 的 包 皮 部 ， 待 公 猪 爬 上 假 台 猪 后 ， 用 温 暖 清 洁 的 手 (有无 手 套 皆 可 )握 紧 伸 出 的 龟 头 ， 顺 公 猪 前 冲 时 将 阴 茎 的 “S“状 弯 曲 拉 直 ， 握 紧 阴 茎 螺旋 部 的 第 一 和 第 二 摺 ， 在 公 猪 前 冲 时 允 许 阴 茎 自 然 伸 展 ， 不 必 强 拉 。 充 分 伸 展 后 ， 阴茎 将 停 止 推 进 ， 达 到 强 直 、 “锁 定 ”状 态 ， 开 始 射 精
13、。 射 精 过 程 中 不 要 松 手 ， 否 则 压力 减 轻 将 导 致 射 精 中 断 。 ”4、左手打开集精杯盖，取下上面的纸巾。5、 精液收集 公猪开始射精后，不要立即收集，待公猪射出部分精亮的液体后，再开始收集含精多的部分，如果手中的胶状物较多，可隔着纸巾将胶状物擦除。6、 在精液收集过程中，应尽可能根据公猪的射精特点，只收集含精丰富的部分，不要收集清亮的液体和胶状物。注 意 在 采 精 过 程 中 不 要 碰 阴 茎 体 ， 否 则 阴茎 将 迅 速 缩 回 。7、 采精过程中，如果仍有包皮中的尿液顺阴茎流出，可先将龟头抬高，然后在射精间隙或只射出清亮液体时，放下集精杯，左手拿纸
14、巾将其吸附，避免流入集精杯中。8、 当公猪开始环顾四周时，说明公猪射精即将结束。可略松开龟头，以观察公猪反应，如果阴茎又开始转动，说明射精没有结束，应立即锁定龟头；如果阴茎软缩，说明射精结束，可结束采精。8采精后，小心地将集精杯上的过滤网去掉，防止其掉入集精杯中，将集精杯中食品袋束口，将袋口上部放在集精杯沿上，盖上集精杯盖，然后应看着公猪爬下假母猪。将精液放入采精室与实验室之间的壁厨内，然后将公猪赶回圈内。公猪采精65、精液的稀释1精液稀释的目的新采集的动物精液精子浓度高，而且温度较高，精子的代谢强度大，很快就产生大量的代谢产物，并使其自身的生命耗尽。即使很短的时间内，都可能因精子的代谢产物对
15、精子产生毒害，而使精子保存时间缩短。而用合理的稀释液稀释精液，则可给精子提供营养，中和代谢产物，并且允许精液降温，从而大大延长精子的存活时间，并能保持精子的受精能力。所以，对人工授精来说，猪精液尽快进行稀释十分重要，这也是为什么要将实验室建在采精室的隔壁的原因。另外，原精液的精子浓度大，而一次输精的总精子数仅几十个亿，只相当于几毫升到十几毫升的原精，而母猪受精时需要的总精液量又不能低于 100毫升，这也是必须稀释的另一个原因。因此，精液稀释的目的是：（1）增加精液容量，以确保每头母猪输精的总精液量。（2）有利于精子的体外存活和受精能力的保持。猪精液的稀释液配方有很多种，如在常温下可保存 35
16、天的配方有BTS，Kiev、Modena 等，保存 57 天的长效保存稀释液有 ZorPVA。也有冷冻精液稀释液。最常用的稀释液为 BTS 稀释液。2每份精液的总精子数目前还没有一个每头份精液的最低精子数标准和体积标准，但一般认为一次输入 15 亿以上个精子，对受胎率和产仔数是可靠的。但也没有必要超过 60亿个精子。在实际生产中，建议刚刚开展人工授精的猪场，每份精液应有 5060 亿个精子；如果人工授精人员技术已经熟练，可将每份精液总精子数降到 40 亿。而个体人工授精站每份精液的总精子数应在 2530 亿。从精液的容量上讲，初配母猪一次输入精液量应为 100 毫升，经产母猪一次输精的精液量为
17、 120 毫升。原精液的活力（大于 0.6）必须合格。（1ml 精液约为 1 克）3精液稀释相关数据的计算公猪采精7原精液总精子数=原精液体积（或重量）原精液精子浓度*活率（活率通常为 0.91，考虑有畸形精子）原精液可分装的份数=原精液总精子数每份精液的总精子数（通常 40 亿）（取整数部分，不按四舍五入，而是舍去小数点后面的数）原精液稀释后的最终体积（或重量）=可分装的份数每份精液的体积（100 或 120ml）最大稀释的倍数最好不超过原精液体积的 10 倍。举例说明：某头公猪一次采精精液的重量为 230ml（或克），经测定精子浓度为 1.8 亿/毫升（或克），规定每份精液的总精子数为 4
18、0 亿，体积为 100 毫升（或重量 100 克），计算原精液稀释后最终的体积或重量。（以重量计算）总精子数=原精液体积（或重量）原精液精子浓度=2301.8= 230*1.8 =414 亿（是不是还有个活力问题？414*活力）原精液可分装的份数=原精液总精子数每份精液的总精子数=41440=10.35 份实际按 10 份计算。原精液稀释后的最终重量=可分装的份数每份精液的重量=10100=1000克（所需的稀释液为 1000-230=770 克）稀释后总重量小于原精液量的 10 倍（即 2300 克），说明稀释倍数在正常范围内。如果精子浓度很高，则可先进行 5 倍左右的稀释，摇匀后，过 30
19、 分钟后，再将剩余的稀释液加入，混合均匀。两次稀释后，总稀释体积也不能超过原精液体积的 15 倍。4稀释过程把空塑料杯或大烧杯放在电子秤上，除去皮重，然后将原精液从集精杯中提出，放入杯中，根据计算出的稀释后的最终重量，将与精液等温的稀释液缓缓加入杯中，直到重量达到最终稀释后总重量为至。如上例，原精液与稀释液的总重量应为 1000 克。稀释加入后，应轻轻摇动或用洁净的玻璃棒搅拌精液，使其混合均匀。精液稀释要注意以下事项：公猪采精8（1）精液和稀释液的温差应尽可能小或是在等温情况下进行稀释 精液稀释关键是温度，在精液稀释前，必须使精液和稀释液尽可能等温，在温度下降到 32 摄氏度以前，两者的温度最
20、多相差 1。否则就可能对精子的活力产生不良影响。如果可能，在精液品质检查过程前，应将装精液的食品袋放入大烧杯，然后将其放入同一个水浴锅中，待精液品质检查完毕，一般精液的温度与稀释液温度已经很接近了。但最好的办法是根据季节，实测采集精液的温度，以便在这个季节中，采精前，将水浴锅温度事先设定在合适的温度值上。（2）应将稀释液加入精液中，而不应该相反。（3）稀释液应尽量从低处沿杯壁流入装精液的大烧杯中，避免将稀释液从高处倒下，形成冲击。6、精液的分装精液的分装可以先稀释精液，再进行分装，也有先将鲜精根据每份的应加入的原精液量分装于精液容器中，再加入稀释液。但我们推荐第一种方法。6.1 精液分装的体积
21、精液容器既是精液贮存的地方，又是输精时的容器。也就是说，分装时，是按每头母猪一次输精的剂量进行灌装的。精液容器种类不同，其容量也不同，一般可容纳的总体积为 80 毫升，100 毫升，袋装精液往往能装到 120 毫升。从形状上可分袋装精液、瓶装精液、牙膏式管装精液等。最常用的是瓶装和袋装两种。6.2、分装方法瓶装精液较容易分装，一是它有盖，瓶口较大，二是它有刻度。将塑料杯或烧杯中上口翻卷到外壁的食品袋拉紧，然后将精液从杯嘴处向精液瓶中注入精液，直到达到相应刻度值。公猪采精9瓶装精液加至刻度线后，上部仍会有一定的空间，会存留空气，对精子保存不利，可先将精液瓶盖旋上半圈，然后，轻轻挤压精液瓶，使精液
22、上升至瓶口处，旋紧瓶盖，这样精液瓶内基本上没有空气。袋装精液分装时较为困难，如果购买昂贵的精液分装机，肯定大多数场、站不能接受。建议的分装方法是：一个有机玻璃架（分装架），顶上安装两个螺钉，用来将精液袋的两孔挂在上面，在架上有两个有机玻璃孔或金属箍用来固定漏斗使漏斗的玻璃管插入精液袋中。将分装架连同漏斗、精液袋放在电子秤上，打开电子秤，除皮，然后将精液从漏斗口加入精液袋中。当重量达到规定重量时，取下精液袋，放在热封口机上，排出空气后，封口。6.3 标记与降温稀释的精液分装后，应在输精瓶（袋）上贴上标签（也可用标记笔标记），注明分装日期、公猪号、品种、失效期。分装后，应将输精瓶（袋）放在泡沫塑料
23、箱中，让其缓慢降温（在 2225环境温度下 1 小时左右），大约达到20-25时，将装有分装过的输精瓶（袋）放入 17 摄氏度（1518）的恒温冰箱中保存。7、猪精液的保存1保存温度不应低于 15，不高于 20，最佳保存温度为 17如果有条件应尽量使用恒温设备来保存精液，应注意不可将精液保存在普通冰箱中，因为普通冰箱冷藏室内最高温度为 8，而猪的精液的最低保存温度不能低于 14。也不宜将稀释后的精液保存在 20以上的室温下，即使室温在 1520范围内，也最好不要求在这种环境中保存，因为室温日夜变化太大，除非 24 小时内就使用，否则不能在这种环境下保存。适当降低保存温度有利于延长精子的存活期，
24、减少代谢产物对精子的伤害。但温度不可低于 15，否则精子就会受到损伤。在各种动物中，猪的精子对温度的变化十分敏感，尤其是低温，其原因不详。猪的精子对较高保存温度（2025）有一定的耐受力，如果保存时间在 12 小时内，精子活力不会受到什么影响。公猪采精10我们推荐的保存温度是 17，上下温差不超过 2。2精液稀释分装后应尽可能在 72 小时内使用完平时要有经常检查保存精液精子活力的习惯。如果保存时间超过 48 小时用前应进行活力检查，一般稀释液如果精液的保存时间超过 72 小时，就应废弃。应该注意的是，自精液被稀释分装保存开始，在有效的保存时间内，精子的受精能力是逐步下降的，尽管精液保存 96
25、 小时，受胎率仍没有明显降低，但在 72 小时用完，受胎率是十分可靠的。每天将精液摇匀两次 在精液保存中，精子会沉淀到底部，每天应由工作人员分两次轻轻摇动或上下翻转输精瓶（袋），使精液再次混合后再放入保温箱中。3精液保存的设备（1）常规保存设备一般应使用专用的恒温冰箱，它能够保证在气温较高时制冷降温，在气温较低时加热，在供电正常的情况下全天候使用，而恒温（培养）箱通常只能在气温较低的情况下使用，高于精液保存温度的气温，则保温箱无控温能力。精液的保存环境重点是温度，应尽可能使温度在合适的范围内，保存容器应使精液不受强光的影响。没有全面开展人工授精的猪场，从其它场购回的精液，可存放在地窖中，地窖温
26、度一般在 1525。可进行精液的短期存放，但在使用前应进行精子活力的检查。（2）停电或冰箱故障的应急措施猪的精子对低温十分敏感，因此，重点要防止精液温度过低。如果恒温冰箱停电或出现故障，在适宜的室温条件下，即室温在 1525内变化，可不必采取特殊措施，因为这种室温下，对精液的短期存放不会有太大影响。停电时间如果不超过 3 小时，一般也不会有太大问题。但如果气温高于 25或低于 15，则需要进行特殊处理。在冬季可将热水袋或输液瓶充入5070的热水用厚毛巾包好，放入冰箱中，使其缓慢散热；在夏季，则可用袋装冰块（可用普通冰箱制冰），同样用毛巾包好，放入冰箱中。每 2 小时观察一次箱内温度，使箱内温度在 1620之间，如果温度不合适，应调整水温或增减外部隔热材料的厚度，以控制散热或吸热的速度。4、注意定期摇动保存过程中要求每 12 小时将精液混匀一次,防止精子沉淀而引起死亡。
