1、超声波辅助浸提法测定维吾尔巴德吉布牙中的木犀草素含量的测定及提取工艺,答 辩 人：图尔荪阿依.斯力木班 级：化学 09-2 班 指导教师： 迪丽菲尕尔 老师,答辩日期：2013年5月11日,论文的结构和主要内容,第一部分 摘要第二部分 绪论 第三部分 材料与方法 第四部分 溶液的制备第五部分 标准曲线的绘制 第六部分 巴德吉布牙中木犀草素的提取工艺研究第七部分 结果与分析,摘要,摘要：本论文主要介绍了维吾尔药材巴德吉布牙中的木犀草素的结构，元素组成，合成，含量测定以及提取工艺。以巴德吉布牙为原料用超声波辅助浸提法提取以及含量测定。巴德吉布牙是一种草本植物医药，分布于我国华北、东北、西北等省区，
2、新疆以南疆和东疆栽培较多。香青兰主要含有挥发油、萜类、黄酮类（木犀草素）、氨基酸、微量元素等等。挥发油的主要成分有柠檬烯25 %50 %、香叶醇约30 %、橙花醇约7 %、香茅醇约4 %、百里香酚约0. 23 %、并含有萜烯和倍半萜烯,在初果期含量最高,果实成熟期柠檬醛含量最高。黄酮类有香青兰苷,还有少量胡萝卜素等。 关键词：巴德吉布牙；木犀草素；99.7%乙醇；95%乙醇；90%乙醇；75%乙醇；60%乙醇；45%乙醇；30%乙醇；超声波清洗器；紫外分光光度计。,绪论,1.1 巴德吉布牙及其作用 香青兰 Dracocephalum moldavicum L. 一年生草本国内分布于黑龙江、吉林
3、、辽宁、内蒙古、河北、陕西、河南、山西、甘肃及青海；生于干燥山谷地、山谷、河滩多石处，海拔220-1600米（青海至2700米）。苏联西伯利亚、东欧、中欧，南延至克什米尔地区均有分布。 1抗心肌缺血作用 香青兰全草水提取物腹腔注射，显著延长小鼠常压缺氧下的存活时间；显著对抗异丙肾上腺素所致小鼠心肌氧耗增加作用，提高其耐缺氧能力；明显对抗垂体后叶素所致家兔急性心肌缺血ST-T变化，并使正常小鼠心率明显减慢，P-R间期延长。 2.抗冠心病作用 冠心病患者服用香青兰生药20g/d，水煎服，每日2次，2星期为1疗程，发现患者有服药后血浆中脂质过氧化物，血栓烷B2（TXB2)、TXB2/6-酮-前列腺素
4、F1比值明显降低；超氧化物歧化酶、6-酮-前列腺素F1明显升高。血小板中脂质过氧化物降低，超氧化物歧化酶升高。,绪论,巴德吉布牙,绪论,1.2 木犀草素 木犀草素是一种很具有代表性的天然黄酮，属弱酸性四 羟基黄酮类化合物，广泛存在于蔬菜、水果、牧草和药用植物中，是植物成分中分布最广的一类多酚化合物。 标准程序的化学分 析研究表明，等摩尔浓度条件下的木犀草素与槲皮素及辣椒 素相比，木犀草素具有最强的抗氧化活性；有关药理及临床 实验的结果还表明木犀草素在体内具有抗菌、抗炎，抗肿瘤，抗过敏，抗生育与激素作用，抗炎症性脱髓鞘疾病，抗纤维化，抗病毒及降低 血脂和胆固醇的作用。，在自然界中以糖甙型和游离型
5、存在，并以其生物化学及药理作用的多样性，引起了国内外学者的广泛重视，已成为国内外天然药物开发利用研究对象。,1.2.1 木犀草素的生理功能木犀草素，多以糖苷的形式存在于多种植物中，在香青兰、辣椒、野菊花、金银花、紫苏中含量较高。具有镇咳和祛痰作用。研究表明，木犀草素抑制巨噬细胞磷酸化，抑制转录因子NF-kB的活性，能够抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞产生细胞因子IL-6，TNF-a。后两种细胞因子在炎症机制中扮演非常重要的角色，是反映炎症程度的敏感指标。木犀草素还能提高IFN-，降低特异性Ig-E，减少嗜酸性粒细胞的浸润。另外，木犀草素除了抗炎、抗过敏作用以外，还具有抑制PDE、抗SARS、
6、HIV病毒特性，其原因为抑制SARS病毒前S蛋白的活性，从而阻止其进入宿主细胞。用于治疗COPD、支气管哮喘、以及慢性咽炎、变应性鼻炎等引起的慢性咳嗽。,木犀草素的分子结构式,2超声波法 全自动超声波清洗机原理主要是将换能器，将功率超声频源的声能，并且要转换成机械振动，通过清洗槽壁使之将槽子中的清洗液辐射到超声波。由于受到辐射的超声波，使之槽内液体中的微气泡能够在声波的作用下从而保持振动。当声压或者声强受到压力到达一定程度时候，气泡就会迅速膨胀，然后又突然闭合。在这段过程中，气泡闭合的瞬间产生冲击波，使气泡周围产生1012-1013pa的压力及局调温，这种超声波空化所产生的巨大压力能破坏不溶性
7、污物而使他们分化于溶液中，蒸汽型空化对污垢的直接反复冲击。一方面破坏污物与清洗件表面的吸附，另一方面能引起污物层的疲劳破坏而被驳离，气体型气泡的振动对固体表面进行擦洗，污层一旦有缝可钻，气泡立即“钻入”振动使污层脱落，由于空化作用，两种液体在界面迅速分散而乳化，当固体粒子被油污裹着而粘附在清洗件表面时，油被乳化、固体粒子自行脱落，超声在清洗液中传播时会产生正负交变的声压，形成射流，冲击清洗件，同时由于非线性效应会产生声流和微声流，而超声空化在固体和液体界面会产生高速的微射流，所有这些作用，能够破坏污物，除去或削弱边界污层，增加搅拌、扩散作用，加速可溶性污物的溶解，强化化学清洗剂的清洗作用。由此
8、可见，凡是液体能浸到且声场存在的地方都有清洗作用，其特点适用于表面形状非常复杂的零件的清洗。尤其是采用这一技术后，可减少化学溶剂的用量，从而大大降低环境污染,1.4 紫外分光光度计原理及特点,由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同。因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。其应用波长范围为200400nm的紫外光区、400850nm的可见光区。因不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，所以在本实验中用紫外
9、分光光度计来测定物质的吸光度。,2.1.试验材料 巴德吉布牙：粉碎，过筛，备用 2.2.主要试验仪器KQ2200DE型数控超声波清洗器 昆山市超声波仪器有限公司；ZFA三用紫外分析仪 上海康华生化仪器制造有限公司；锥形瓶；试管；容量瓶；胶头滴管；移液管；洗耳球。2.3.主要试验试剂木犀草素 标准样品（），99.7%乙醇 ，99.5%乙醇，90%乙醇，60%乙醇，45%乙醇，30%乙醇，甲醇 （均为分析纯，天津永晟精细化工有限公司）,材料与方法,3.1.色谱条件 AgilentHC-C18(4.6mm150mm，粒径为5um）色谱柱，流动相为乙腈：水=85:15，流速0.8mL/min，检测波长
10、210nm。柱温25，进样量为20L。在该色谱条件下熊果酸标准品的保留时间3.152min。3.2.对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的熊果酸对照品1.8mg置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为0.18mg/mL的对照品储备液，把储备液以甲醇逐渐稀释所得的浓度分别为：0.018、0.072、0.108、0.144、0.18mg/mL并用0.45um微孔滤膜过滤。依次进样20L ，重复3次，在选定色谱条件下进行测定。按所选的色谱条件，在上述各浓度下进行（每个浓度进3次）。以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标做标准曲线(图2)得回归方程：y= 24538x+117 ，相关系数(R2
11、=0.99903)；,产）；,木犀草素标准工作曲线,线性关系 以吸光度对浓度进行线性回归，得回归方成y=24538x+117， R=0.9998。线性范围为0.1790.195g/mL 内。,溶液的制备,3.3 样品溶液的制备分别称取2g布牙共9份，再其中分别各加入75ml乙醇（不同浓度的：99.7%，95%，90%，60%，75%，45%，30%）99.5%甲醇，石油醚，放置24小时后用超声波溶解，抽滤，处理滤液再次测定各溶液的吸光度 3.4 单因素实验用不同百分比的的乙醇来测定。99.7%,60%,45%,30%乙醇放2布牙，抽滤，乙醇滤液的处理方法如前，测定在不同的时间，不同的温度以及不
12、同的物料比条件下的吸光度,巴德吉布牙中木犀草素的提取工艺研究,4.1.正交试验因素水平设计 选取乙醇体积分数、 提取时间、料液比和提取次数为考察因素，按照正交设计优化提取工,结果与分析,木犀草素提取试验结果,木犀草素提取实验结果分析,方差分析结果表明，乙醇体积分数对木犀草素的提取量有显著影响。 各因素的影响大小为乙醇物料比提取温度提取时间提取质量分数，木犀草素的最佳提取条件为A2B2C3D1，即乙醇体积分数为 60，提取时间为50min，料液比为 1:60，提取温度50时提取量为最佳。,结果与分析,精密度实验 取制备好的样品溶液，将其显色后测定一次，共测定5次记录吸光度。,稳定性实验 取制备好
13、的样品溶液，将其显色后每5min测定一次，共测定7次记录吸光度。,回收率实验 分别准确量取已知总黄酮含量为 mg/ml的1ml提取液5份，分别加入一定量泸定标准品，按上述方法进，测定吸光度。,结论,木犀草素在植物中多以糖苷形式存在，为了准确测定巴德吉布牙中木犀草素的含量，我们对其实验测定的波长选择是在查阅相关资料基础上，通过在200700 nm之间波长扫描，考虑到标准品和样品扫描结果是352 nm处吸收值差别不大，因此选择352 nm为测定波长。本试验通过正交实验法对巴德吉布牙中木犀草素的提取工艺条件进行了优化，并按最佳条件进行了验证实验。结果证明用该工艺提取巴德吉布牙中木犀草素工艺简单，提取
14、率高，操作控制容易，稳定性好，为巴德吉布牙的药理生产提供了合理依据。,参考文献,1刘勇民.维吾尔药志(上)M.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999:4054072田树革，刘丛. 香青兰中总黄酮的测定J . 新疆师范大学学报,1999，18（2）: 2122 3 万方数据期刊论文 木犀草素-7-O-D-葡萄糖苷在几种分子聚集体系中的增溶行为研究 - 化学学报 - 2009 67 ( 17 ) 4 尹海波，康廷国，王冰等，正交实验法优选木犀草素的提取工艺J.中药材，2005,28（12）：1 112 5 Lpez-Lzaro M. Distribution and biological acti
15、vities of the flavonoid luteolin. Mini Rev Med Chem. 2009, 9 (1): 3159. doi:10.2174/138955709787001712. PMID 19149659.,致谢,首先深深的感谢我的指导老师迪丽菲尕尔老师，在本设计期间给予的悉心的指导和精心的培养。迪丽菲尕尔老师渊博的知识、严谨的治学态度令我钦佩不已。老师提供了良好的实验条件，使我极其顺利的完成了毕业设计，同时在老师那里不仅学到了知识，学会了研究的方法，更学会了做人的道理，这些都使我受益非浅。再次深深的感谢迪丽菲尕尔老师。同时非常感谢实验室的所有老师，在我的毕业设计期间给了我无私的帮助和热心的指导。他们丰富的实践经验、踏实的工作作风给我留下了深刻的印象。深深感谢大学四年教过我的老师们，他们给了我丰富的知识。感谢师兄师姐和同学们，在本设计期间他们给了我无私的帮助。深深感谢含辛茹苦养育我的父亲和母亲，在我求学期间，他们始终给了我最大的支持和关爱。,
