1、某种生物（所有或部分DNA),限制酶,多个DNA片段,多个重组DNA,受体菌的不同个体,分别导入,DNA连接酶,载体,群体（基因组或部分基因文库）,（不同个体含不同DNA片段）,（同种限制酶切割）,1.从基因组文库中提取目的基因,目的基因的制备：,2.利用PCR技术扩增目的基因,(1)反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。,目的基因的mRNA,杂交双链(单链RNA/单链DNA),单链DNA,反转录酶,DNA聚合酶,双链DNA(目的基因),3、人工合成目的基因（DNA合成仪）,已知核苷酸序列，且基因较小，也可
2、通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。,(2)根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ：,根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。,蛋白质的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,基因的核苷酸序列,推测,推测,目的基因,化学合成,蛋白质的氨基酸排列顺序可以用测序仪自动完成。,如何构建？,导入的方法？,如何检测？,进行细胞培养,1.基因工程流程图：,（重组DNA分子导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞）,1. 目的基因导入植物细胞,双子叶+裸子植物,单子叶,3.目的基因导入 微生物细胞,2
3、、目的基因导入动物细胞（常用受精卵）,2.蛋白质工程流程图：,蛋白质三维结构,氨基酸序列多肽链,基因DNA,mRNA,1、植物组织培养技术,注意技术的原理、培养的条件、特点、优点。,营养、激素,营养、激素,杂种植株,融合的原生质体AB,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,2.植物体细胞杂交技术,1.植物细胞的融合,2.植物组织培养,植物细胞A,原生质体B,原生质体A,杂种细胞AB,去 壁,人工诱导,融合完成的标志,植物细胞B,去壁,-酶解法,融合内容：膜、质、核的融合。,（筛选出杂种细胞）,融合原理：膜的流动性；,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶处理,单个细胞,加培养液,制成,细胞
4、悬浮液,不死细胞,原理：细胞增值,无限传代,作用：去掉组织间蛋白质,思考:动物细胞培养最终能培养成生物体?,1.动物细胞培养培养过程：,不能,部分细胞遗传物质改变,原代培养,随细胞数增多，细胞分裂贴壁生长到表面相互接触时就会停止分裂增殖细胞接触抑制,传代培养,动物细胞培养条件,1、无菌、无毒的环境: （添加一定量的抗生素，定期更换培养液.）2、营养:（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH: 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、气体环境（注意作用） O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,O2是细胞代谢的需要， CO2是维持培养液的PH值,某种生
5、物（供体）,M期的卵母细胞,体细胞,细胞质,细胞核,卵裂,重组细胞,体细胞核移植,细胞培养,受体（代孕）母体子宫,胚胎移植,2.克隆动物产生的过程：,3.动物细胞融合,杂交细胞的特点是什么？,克隆化培养和抗体检测,4.单克隆抗体的制备,1、植物组织培养与动物细胞培养的比较,2、植物体细胞杂交与动物细胞融合的区别,主要用于制备单克隆抗体,获得杂种植株,用 途,物理、化学方法（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱导细胞融合,去除细胞壁后诱导原生质体融合,细胞融合的过程,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,细胞融合的原理,动物细胞融
6、合,植物体细胞杂交,比较项目,精子、卵子发生的比较,胚胎移植,采集卵母细胞,体外培养,采集精子,体外获能,体外受精,早期胚胎培养,受体牛,（时期： ）,1）超数排卵（试剂） 2）活体取卵（仪器） 3）从屠宰的卵巢取卵,方法,（方法，试剂）,（试剂）,（培养条件、目的阶段）,成熟的卵子,获能的精子,MII中期,方法,胚胎工程,选择,供体母牛,受体母牛,同期发情处理,超数排卵,供体公牛,配种,冲卵,质量检查、培养,胚胎移植,妊娠检查,分娩（胚胎移植的犊牛）,胚胎移植的基本程序：,同期发情技术：主要是借助外源激素剌激卵巢，使其按照预定的要求发生变化，使处理母畜的卵巢生理机能都处于相同阶段，从而达到同期发情。,有性生殖 无性生殖,核移植技术、胚胎移植,遵循 不遵循,体外受精胚胎移植,比较试管动物和克隆动物,来自2个个体 主要来自核供体,
