1、1,南方医科大学南方医院肾内科,如何写好自然科学研究基金申请书,侯凡凡,2,科技活动的目标导向分类,考虑应用目标,追求基本认识,基础研究（波尔象限）,应用基础研究（巴斯德象限）,应用研究（爱迪生象限）,数据积累活动,巴斯德象限：基础科学与技术创新 D.E.司托克斯,生物学只受认知需求推动，不受实际应用引导的研究活动,农学、林学、畜牧兽医科学、水产学、基础医学、临床医学、预防医学与卫生学、军事医学与特种医学、药学、中医学与中药学既寻求扩展知识的边界，又受到应用目的影响的研究活动,单纯的应用研究，不寻求对某一学科领域的全面认识,3,国家自然科学基金支持的范围,基础研究（波尔象限）,应用基础研究（巴
2、斯德象限）,应用研究（爱迪生象限）,数据积累活动,只受认知需求推动，不受实际应用引导的研究活动,既寻求扩展知识的边界，又受到应用目的影响的研究活动,单纯的应用研究，不寻求对某一学科领域的全面认识,支持,其它资助渠道973863863支撑计划平台项目,自然科学基金：支持基础研究，坚持自由探索，发挥导向作用。促进学科均衡协调可持续发展。,4,研究项目系列,面上项目,重点项目,实质性国际合作项目,重大项目,面上项目：学科全面均衡布局，人才developing scientist, developed scientist,重大研究计划,联合基金项目,5,人才项目系列,创新研究群体科学基金,国家杰出青年
3、科学基金（含外籍）,青年科学基金,基础科学人才培养基金,地区科学基金,青年科学基金：稳定青年队伍，培育后继人才，扶持独立科研，激励创新思维。地区科学基金：扶植地区人才，促进区域发展。,海外及港澳青年学者合作研究基金,6,科研基金标书的写作,要有一个好的故事 一个内容新颖、有意义的故事 一个完整的故事 一个能够实现的故事要写好这个故事 要让别人对这个故事感兴趣 要让别人读懂这个故事 要让别人相信这个故事,7,自然科学研究的创新性和价值,创新性是研究课题的灵魂创新的关键是一个“创”字（内毒素和动脉粥样硬化的故事）创新要有一定的根据（理论根据、预试验）要体现创新的价值,8,科研基金标书的写作,要有一
4、个好的故事 一个内容新颖、有意义的故事 一个完整的故事 一个能够实现的故事要写好这个故事 要让别人对这个故事感兴趣 要让别人读懂这个故事 要让别人相信这个故事,9,自然科学基金申请书的完整性,项目的背景、提出假设的依据（国内外研究现状）、假设、研究要解决的主要问题、研究的学术意义和应用价值、小结、参考文献注意研究技术路线的完整,10,蛋白质氧化修饰产物促使肾脏细胞氧化应激：慢性肾脏病进展的新机制,11,一、项目的立项依据（一）研究意义及其背景（二）国内外研究现状及分析1蛋白质是体内氧化应激损伤的主要原初靶 ，蛋白质的氧化先于脂质过氧化，且羟自由基与蛋白质直接相互作用的可能性要比与DNA作用大2
5、0倍（DeAtley SM, et al. Pharmacol Toxicol 1998; Reinheckel T, et al. Free Radic Biol Med 1998）。因此目前普遍认为，蛋白质是体内ROS损伤的主要原初靶。人体内蛋白质库巨大，其中最易被氧化修饰的白蛋白又是循环中主要的蛋白质（Witko-Sarsat V, et al, J Immuno 1998）。因此，阐明蛋白质氧化修饰及其产物在人类疾病中的作用将为研究氧化应激相关性疾病的发病学提供新的理论，并为其干预提供新的途径或靶标。,12,（二）国内外研究现状及分析2蛋白质氧化修饰产物参与人类疾病的发病学 我们和其它
6、学者的工作已证实，在许多人类重要慢性疾病，如糖尿病（Kalousova, et al, Physiol Res, 2002）、代谢综合征（Atabek ME，et al，Eur J Pediatr 2006）、动脉粥样硬化（Kaneda H，Atherosclerosis 2002）、慢性肾脏病（Hou FF，J Am Soc Nephrol 2004，Witko-Sarsat V, et al, J Immunol 1998）等都存在蛋白质氧化修饰产物潴留，其中某些蛋白质修饰产物、如AGE已被证实参与了许多慢性疾病的发病学如透析相关性淀粉样变（Hou FF，et al，J Am Soc Ne
7、phrol 2002）、CKD的免疫功能障碍（Hou FF，et al，Kidney Int 2001； Li JT，et al，Scan J Immunol，2007）、糖尿病微血管病变（Baynes JW，et al，Diabetes 1999）和老年性痴呆（Yan SD，et al，Nature 1996）等。这些证据表明，蛋白质氧化修饰产物蓄积不仅是氧化应激的后果（或标志物），其本身可能作为致病介质参与人类多种重要疾病的发生或发展。,13,（二）国内外研究现状及分析3蛋白质修饰产物AOPP是一类促细胞炎症、促血管病变的生物介质 最近我们团队的体外研究证实，从CKD和糖尿病患者体内分离、
8、纯化的AOPP以及体外合成的AOPP均能激活人血管内皮细胞，这一病理过程是通过激活内皮细胞NADPH氧化酶依赖的、氧应激敏感的细胞内信号途径实现的（Guo ZJ，et al，Arterioscler Thromb Vasc Biol，in press）。整体模型研究证实，AOPP慢性负荷导致动脉血管壁AOPP沉积，促进正常新西兰白兔的大动脉壁产生细胞炎症和脂滴沉积，并加速高脂血症家兔动脉粥样斑块的形成（Liu SX , Hou FF, et al，Arterioscler Thromb Vasc Biol，2006）。这些研究结果提示，AOPP在循环和组织的蓄积可能导致包括血管在内的人体细胞的
9、氧化应激和损伤。,14,（三）项目的预试验结果 （四）本项目的假设 氧化应激所致的蛋白质氧化修饰产物潴留能导致肾细胞氧化应激和损伤，是促进慢性肾脏病进展的重要机制。,15,（五）本项目拟研究的主要内容本项目的主要研究目的有三方面：1）证实AOPP潴留导致肾脏细胞氧化应激，促进肾脏病变进展，探寻CKD“共同发病途径”的新机制；2）揭示AOPP促细胞应激的机制，阐明这类新致病物质导致肾脏病变进展的分子基础；3）探寻在不同层面阻断AOPP作用的干预方法，研究其对CKD进展的影响，为临床延缓或防治CKD进展提供新靶标。（六）本项目的学术意义和应用前景（七）小结,16,科研基金标书的写作,要有一个好的故
10、事 一个内容新颖、有意义的故事 一个完整的故事 一个能够实现的故事要写好这个故事 要让别人对这个故事感兴趣 要让别人读懂这个故事 要让别人相信这个故事,17,自然科学基金申请书的可行性,避免从文献中来到文献中去必须有自己的预试验资料必须提供足够的研究背景注意团队成员的研究背景及其与项目的联系,18,（三）项目的预试验结果1临床研究提示，糖尿病和非糖尿病CKD患者中80循环AOPP水平增高，AOPP水平与大动脉血管病变的发生率和程度以及肾功能减损的程度密切相关（杨小兵等，中华内科杂志，2005，见附录首页1）。在高脂血症模型同样证实，AOPP促进动脉粥样硬化性病变（Liu SX, Hou FF,
11、 et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006）这些临床研究结果提示，AOPP潴留与人类血管病变密切相关。 2对CKD患者的肾组织活检标本进行观察证实，病变肾组织中有AOPP沉积，其主要分布于肾小球足细胞、系膜细胞和肾小管上皮细胞，糖尿病肾病的肾小球结节性病变中也存在AOPP沉积（见附图1）。发现人类病变肾组织局部存在AOPP沉积不仅为AOPP参与肾脏病变的假设提供了依据，也为进一步研究AOPP致病作用的细胞和分子机制提供了靶标。,19,（三）项目的预试验结果3对正常大鼠、非糖尿病CKD（5/6肾切除）以及糖尿病（ST2诱导）大鼠三种整体模型的研究表明，
12、持续注射AOPP修饰的同种白蛋白使循环AOPP达到与人类疾病状态下相似的水平能增加肾组织中AOPP的沉积，增加肾组织的细胞炎症反应和尿液白蛋白排泄量，导致加速性肾纤维化和进行性肾功能减退（Li HY，Hou FF, et al，J Am Soc Nephrol 2007，见附录首页3）。这些体内研究证据提示，AOPP潴留对肾脏有直接损伤作用。 4对人大血管内皮细胞的体外实验发现，AOPP能通过活化细胞表面的AGE受体RAGE诱导内皮细胞的氧化应激反应，其细胞内信号传递依赖于内皮细胞NADPH氧化酶的激活（待发表资料，见附图5，6，7）。这一发现非常有意义，因为目前已证实肾脏多种固有细胞表达RA
13、GE和NADPH氧化酶亚单位。这些体外实验资料提示肾脏固有细胞很可能是AOPP攻击的靶细胞。,20,可行性分析1项目假设已进行前期研究，立论具有充分理论和实验依据。2完成本项目研究所需的大多数关键技术（见技术路线中引用的文献）。为顺利完成本项目提供了技术保障。3在前期研究中已从西藏胡黄连中提取了一种无毒成分L-22，细胞学和动物整体研究证实其能抑制AOPP诱导的内皮细胞应激为研究AOPP病理生物学活性及对其干预创造了条件。4项目团队自1996年以来一直从事有关蛋白质修饰与疾病关系的研究，有丰富的研究经验和比较坚实的研究基础。在此领域已负责6项国家自然科学基金面上项目。有关蛋白质糖基化（AGE）
14、修饰、蛋白质和脂质氧化修饰与疾病关系的研究已有60余篇论著在国内外期刊发表。5项目负责单位是广东省重点专科，下属实验室是广东省医学重点实验室，具有完成项目的设备和条件。,21,科研基金标书的写作,要有一个好的故事 一个内容新颖、有意义的故事 一个完整的故事 一个能够实现的故事要写好这个故事 要让别人对这个故事感兴趣 要让别人读懂这个故事 要让别人相信这个故事,22,自然科学基金写作的注意事项,充分体现项目的意义，用事实而不是说大话明确揭示项目的创新性,23,研究意义及其背景 慢性肾脏病（CKD）是一组由糖尿病、高血压和各种炎症或代谢性肾脏病变所致的慢性进展性疾病群。CKD进展的最终后果是发展至
15、终末期肾病（ESRD，即尿毒症）。ESRD患者虽能依赖肾替代治疗（透析或肾移植）生存，但耗费大量医疗资源勿庸置疑，CKD已成为当前重要的“全球公众健康问题”。国际肾脏病学会已将每年3月第3个周末定为“世界肾脏日”，以唤起全世界对CKD防治的关注。因此，研究如何防止或延缓CKD进展，降低ESRD的发生率不仅是当前医学界面临的挑战，也是保护我国有限医疗资源，关乎社会经济发展的重要课题。,24,项目的创新点：本项目提出的“蛋白质氧化修饰产物潴留促进肾细胞应激和损伤，是促进CKD进展的重要机制”是一新的假说。迄今为止，尚未对蛋白质氧化修饰产物在肾脏病变自身发展中的作用和机制进行深入研究，本项目是对这一
16、未知领域进行的新探索。蛋白质氧化修饰产物见于多种人类重要疾病，项目将为深入了解氧化应激导致细胞和组织损伤的机制提供新信息，为防治redox相关的其他重要疾病提供新途径。为干预蛋白质氧化修饰产物的致病作用开拓一条新途径,25,科研基金标书的写作,要有一个好的故事 一个内容新颖、有意义的故事 一个完整的故事 一个能够实现的故事要写好这个故事 要让别人对这个故事感兴趣 要让别人读懂这个故事 要让别人相信这个故事,26,自然科学基金写作的注意事项,用浅显的语言去描述深奥的问题像剥洋葱一样，一层层地说明问题不要硬抄连自己也不明白的东西,27,技术路线必须清晰、可行,AOPP-白蛋白,AOPP-白蛋白干预
17、剂,正常白蛋白,单纯培养基,足细胞,微血管内皮细胞,观察,1. 应激功能表型：凋亡速率裂隙膜蛋白合成分布细胞骨架分布顶端决定簇表达2. 受体和信号途径,系膜细胞,肾小管上皮细胞,1. 应激功能表型：细胞氧应激O2生成酶活性2. 受体和信号途径,1. 应激功能表型：细胞增殖表达细胞外基质分泌生长、细胞因子2. 受体和信号途径,1. 应激功能表型：表达促炎症、促纤维化因子转分化2. 受体和信号途径,观察,观察,观察,共同培养,主要研究方案（体外研究）,28,研究内容的体量要合理,研究内容要突出重点要能在规定的时间内完成,29,科研基金标书的写作,要有一个好的故事 一个内容新颖、有意义的故事 一个完
18、整的故事 一个能够实现的故事要写好这个故事 要让别人对这个故事感兴趣 要让别人读懂这个故事 要让别人相信这个故事,30,自然科学基金写作的注意事项,扬长避短，不要试图申请你和你的团队没有任何基础的项目用证据说明项目是有可能实现的用证据说明你的团队有能力完成这个项目（详细提供以往的工作基础和发表的论文）,31,近年发表的与本项目有关的论著（下划线者为通讯作者）国外期刊已发表的论文Li HY, Hou FF, Zhang X, Chen PY, Liu SX, Feng JX, Liu ZQ, Shan YX, Wang GB, Zhou ZM, Tian JW, Xie D. Advanced
19、oxidation protein products accelerate fibrosis in a remnant kidney model. J Am Soc Nephrol, 2007；18 (2): 528538 (IF 7.371 2006年)Hou FF, Xie D, Zhang X, Chen PY, Zhang WR, Liang M, Guo ZJ, Jiang JP，Renoprotection of optimal antiproteinuric doses (ROAD) study: a randomized controlled study of benazepr
20、il and losartan in chronic renal insufficiency，J Am Soc Nephrol， 2007；18 (6)：18891898 (IF 7.371 2006年)Feng JX, Hou FF, Liang M, Wang GB, Zhang X, Li HY, Xie D, Tian JW, Liu ZQ. Restricted intake of dietary advanced glycation end products retards renal progression in the remnant kidney model. Kidney
21、Int, 2007；71 (9) : 901911 (IF 4.773 2006年)Li JT, Hou FF, Guo ZJ, Shan YX, Zhang X, Liu ZQ. Advanced glycation end products upregulate C-reactive protein synthesis by human hepatocytes through stimulation of monocyte IL-6 and IL-1 production. Scand J Immunol, 2007； 66（5）: 555562 (IF 2.092006年),32,谢谢！,
