1、实验十三 卵磷脂的提取及其 组成鉴定,一、实验目的学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。 巩固抽滤等基本操作。主讲教师：,二、基本原理,卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约8。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水解液中检查出这些组分。其分离提取的流程如下：,卵磷脂彻底水解的产物是什么？,甘油,脂肪酸,磷酸,胆碱,答：,三、仪器和药品,仪器：研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花药品：熟鸡蛋黄 20NaOH溶液 10Pb(AC)2 1CuSO4溶液 硫酸 95乙醇 氯仿 丙酮 碘化铋钾溶液,四、实验步骤,
2、1卵磷脂的提取 （1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml 95乙醇研磨，再加入10ml 95乙醇充分研磨，减压过滤(应盖满漏斗)，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加10ml 95乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。（2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。（3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。（4）在搅拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出， 搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）。,2卵磷脂的水解及其组成鉴定,（1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入5ml 20氢氧
3、化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下面检查用。（2）检查脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加1滴20氢氧化钠溶液与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液，以硝酸酸化后加入10醋酸铅2滴，观察溶液的变化甘油的检查：取试管一支，加入1硫酸铜溶液1ml(二十滴)，2滴20氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液振摇，观察所得结果。胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成。,注释,1. 第一次减压过滤，因刚析出的
4、醇中不溶物很细以及有少许水份， 滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏 漏 斗（不换滤纸）反复滤清。2. 蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。3. 黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中，否则会带入杂质。4. 搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒上，成团状。5. 加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。6. 加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生成，浑浊进一步增强。7. 生成的氢氧化铜沉淀因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜，沉淀逐步溶解。8. 克劳特试剂为含有KIBiI3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀。,思考题：,1蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？2卵磷脂可以皂化，从结构分析应作 何解释？3卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？4为什么实验中要进行减压过滤？ 操作时应注意哪些地方？,12 *3,R1 常为饱和脂肪酸如C16，C18,R2 常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸,Question 5 卵磷脂彻底水解的产物是什么？,H OH-,由于甘油磷脂分子中磷酸部分还有一个可以电离的H+，而胆碱或胆胺部分又有碱性基团，故甘油磷脂以偶极离子的形式存在。,磷脂分子中同时具有疏水基和亲水基。正是由于这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要的生理作用。,-,极性端疏油端，亲水端,
