1、CLSI血培养的原则和操作程序推荐（Approved）指南,Proposed Guideline 2006年10月出版：M47-PApproved Guideline 2007年5月出版: M47-A,2005-09-08出版：BSOP 37 第5版http:/www.hpa-standards.org.uk/pdf_sops.asp参编单位：医学微生物协会, 临床微生物协会 苏格兰微生物协会, IBMS, Welsh微生物协会统一由卫生防护署 （Health Protection Agency）领导,英国HPA 的血培养的研究及操作程序,Question,血培养的适应症是什么?,发热( 38
2、C) 体温过低 ( 10.000/l)粒细胞减少( 1.000/l)低血压局部感染：肺炎、尿路感染、脑膜炎、 突发精神萎靡的儿童或老年人虚弱、精神状态错乱、体重突然下降的老年人肾功能不全、无法解释的白细胞增多及精神状态改变免疫功能低下的患者,Answer（血培养适应症）,CUMITECH Blood Cultures IV, ASM Press 2005Mylotte and Tayara EJCMID 2000,Qestion,血培养最佳的采血时机?,Answer,最佳采血时机尽可能在抗菌药物使用前尽可能在寒颤和发热初起时,0,30,60,Time (min),Temp体温,Chills寒战
3、,Blood Cultures血培养,BACTEREMIALEVEL菌血症的水平,Question,血培养瓶的种类?,我院常用血培养瓶,采集标本前：于室温保存，切勿冷冻。如冷藏需恢复至室温使用。采集标本后：尽快送微生物室，如无法及时送检，应置于室温，不能置 于冰箱或温箱，以免影响检出。,Question,血培养应该采几套?每套包括几个瓶子?,Answer,CLSI要求每次采集2-3套标本,每套应包括一个需氧培养瓶,一个厌氧培养瓶成年病人不能只采1瓶血培养标本，采血量不足和只做1套血培养所得得结果是很难正确解释的,采血套数,Cockerill, CID 2004,血培养套数与阳性检出率（）,65
4、,80,96,99,采血套数,Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many BloodCultures Are Needed J Clin Microbiol. 2007; 45:3546-3548,广东省人民医院34月ICU1/2/13区血培共分离出50株可疑致病菌株（不含CNS） 菌株检出与采血套数的关系：,CNS:凝固酶阴性葡萄球菌,Question,一套血培养为何选择1个需氧+1个厌氧的组合?,Answer,研究表明：用需氧瓶加厌氧瓶的组合检测出的葡萄球菌，肠杆菌科菌中某些菌和苛氧菌比一
5、对需氧瓶多。,2001年Khanna数据,7072份血培养，640份阳性，阳性率为9,Eur J Clin Microbiol Infect DDis, 2001,20:217-219,储从家数据（2000年）,591份血培养，81份阳性，阳性率为13.17,中华检验医学杂志，2000，23：285,ODonnel试验,8620份血培养，704株,Clin Infect Dis, 1999,29:1309-1311,报告时间提前,出现阳性时间： 需氧瓶有9%比厌氧瓶早1天报告结果 厌氧瓶有5%比需氧瓶早1天报告结果因此,只做需氧菌不做厌氧菌培养,将有19%的菌株不能发现,另有5%的血培养延迟1
6、天报告阳性结果 Khanna P, Collignon P. Anaerobic bottles are still important in blood culture sets. Eur J ClinMicrobiol InfectDis, 2001, 20: 217-219,结论,如果血培养只做需氧瓶培养，漏检的不仅是严格厌氧菌,也会影响兼性厌氧菌的分离率及报告阳性结果的时间,Qestion,如何采集第二套血培养?,Answer,一个静脉穿刺点只能采集1套血培养，采集第2套血培养应该选择第2个静脉穿刺点,Qestion,患者应采集多少血液?,Answer,即寒战升温之间采血20ml，分装
7、两个瓶内，各分配10ml,当采血量不足20ml,应先注入需氧瓶,这样首先满足需氧瓶的采血量可以更好地分离出真菌、绿脓杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。,Qestion,儿童的血培养应如何采集?(用何种类的瓶子,采集多少血液,需要采几套),Answer,儿童厌氧菌感染极少 ，建议只采用儿童瓶厌氧培养只考虑针对特殊的高危儿童对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1 1 月: 0.5 mL 1 月 36月: 1.0 mL 36 月: 4.0 mLConnell TG. Pediatrics 2007;119(5):891.,新生儿败血症,最低的采血量不确定，通常0.75-1.0ml的血量是推荐的。 文献证实
8、只采一套血培养大约1015的败血症不能检出 即使血培养阴性，根据临床症状败血症仍然可以被怀疑,Long:Principles and Practice of Pediatric infectious Diseases,2nd ed.,2003,儿童专用培养瓶： 领取时注意：粉红色标签 专门为儿童设计，采血量仅为1-3 ml 添加特殊促进细菌生长因子，采用树脂专利技术 低SPS浓度可提高儿童特征性病原菌（如耐瑟氏菌） 的检出率,树脂颗粒能中和抗生素,Qestion,皮肤和血培养瓶的消毒方法?,Answer,美国CLSI推荐皮肤的消毒方法为： 首先确定静脉穿刺点，首选70异丙醇消毒并待干，然后用主
9、要消毒剂（洗必泰、碘酊、碘伏）消毒并待干，使之作用足够的时间，整个过程要求严格无菌操作血培养瓶的消毒方法： 弃去瓶顶塑料帽，用75乙醇消毒瓶顶橡皮塞，待干60秒,Qestion,每次采集血培养的间隔时间？,Answer,每份血培养间隔应不超过30分钟，因为网状内皮系统对于一过性菌血症和间歇性菌血症在1530分钟内可清除（CLSI规定每份血培养应同时获得，或尽可能短的时间内）,关于采血的一些问题：,1、血培养采血建议从外周静脉采，不建议采动脉血，为什么？ 对检出结果无明显差异，但动脉穿刺危险性较大2、常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血，为什么？ 污染菌或定植菌的可能性较大，除非怀疑CRB
10、SI3、如果需要从导管处取血，初段血或导管内的补液是否需要弃去？为什么？ 不能弃去，以便于判断污染菌、定植菌或病原菌4、如果用注射器采血，采好后注入血培养瓶之前是否需要更换针头？为什么？ 无需更换，对提升阳性率无统计差异，增加了针刺伤的几率,Qestion,已接受抗菌药物治疗的患者，使用含树脂培养瓶是否有助于提高检出率？,BD BACTECTM Resin树脂技术,阳离子交换树脂,多价吸附树脂,树脂包含有非离子树脂和阳离子交换树脂，能患者在（预）治疗过程中，可能存在的中和各种抗菌药物和其它可能的抑制细菌生长的物质。有助于溶解血细胞，以便释放被吞噬的细菌，使其更为快速生长为细菌生长提供生长中心（
11、growth-centres），以提高生长速度，提高检出率（高达40%多）。一个BACTEC血培养瓶的树脂作用表面相当于5个标准足球场的面积.革兰氏染色镜检不受干扰,Gram stain readingsCharcoal based systems,Meta-分析BACTEC树脂培养瓶的性能,43份临床评估19821996评估130503份血培养树脂对非树脂结果总计：提高18.3%治疗患者：提高35.4%,Qestion,怀疑导管相关的血流感染(CRBSI)时应如何送检?,CLSI对非隧道式和隧道式的中心静脉导管和输液港(Venous Access Ports, VAP) 推荐的培养方法,目标
12、人群: 携带深静脉导管超过48小时,出现原因不明的发热、低血压的患者，儿童患者出现低体温者送检方法： 首先判断导管是否有保留的必要性，按导管保留与否分别采取不同的送检方法,送检方法：保留情况,采取至少2套血培养，其中至少1套来自外周静脉，并做好标志，另外的1套则从导管中心或硅酮隔膜无菌采获，两个来源的采血时间必须接近（5min），各自做好标记。,送检方法：不保留情况,从独立的外周静脉无菌采集2套血培养无菌状态下取出导管并剪下5cm导管尖端或近心端交付实验室进行Maki半定量平板滚动培养或者定量培养,提问与回答,培养瓶未使用时，是否需要冷藏或冷冻？,答案：不需冷藏，更不能冷冻。保存在1525的室
13、温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。,加入标本后的培养瓶未能及时送到检验科，是否需要冷藏或放入35 的温箱 ？,答案：保存在室温即可，不能冷藏也不能放入35 的温箱 。 过夜不会对检测造成影响，但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细菌进入生长对数期，从而错过检测的最佳时期。,提问与回答：,两套血培养可否从一个静脉穿刺点一次采集？,答案：不可以，第二套需从第二个穿刺点采集，这样能帮助判断污染。,患者静脉中插有导管，可否直接从导管采血 ？,答案：不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染
14、，请参照导管相关性血流感染的采血方法。,提问与回答：,标签是否可用随意张贴于培养瓶上？,答案：标签应竖贴于瓶身上，同时不得遮盖瓶身原有标签，以免影响扫描。,如用注射器采血后，是否需要更换针头再向培养瓶内注入标本？,答案：不需要，对检出率无提升，会增加针刺伤的几率。但采集第二套血培养需更换针头进行穿刺。,正 确 错 误,提问与回答：,何时采集血培养标本最佳？,答案：寒战后或发热初期时，抗生素治疗前或下一次给药前。,怀疑血流感染，一般应采集几套血培养？,答案：成人应一次采集23套血培养。儿童只需采集需氧培养，除新生儿外需采集2个儿童瓶。儿童厌氧培养特殊情况时才考虑。,提问与回答：,采集血培养的间隔
15、时间是多少？,答案：同时或短时间内采集23份血培养，因为体内巨细胞吞噬系统会在1530min内清除掉进入人体内的细菌。,每套血培养的采血量为多少？,答案：成人一份标本使用2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶810ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血量下，一般为13ml。,提问与回答：,如怀疑导管相关性血流感染，该如何采集血培养？,答案：根据导管是否需要保留采取不同的采集方法。 无需保留的：从独立的外周静脉无菌采集2套血培养，无菌状 态下取出导管，并剪下5cm导管尖端或近心端于无菌试管内 送实验室进行Maki半定量平板滚动培养或者定量培养。 需要保留的：采取至少2套血培养，其中至少1套来自外周静 脉，并做好标志，另外的1套则从导管中心或硅酮隔膜无菌采 获，两个来源的采血时间必须接近（5min），各自做好标 记。,
