1、20192019年送检牛羊病材分离之细菌性病原Isolationof,Abstract,A total of 83 bovine and caprine specimens were submitted. A total of 16 isolates including Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus bovis II, Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica and Klebsiella pneumonia from 26 cases with pneumonia. Six strains o
2、f Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from 24 cases with diarrhea. Two strains of A. pyogenes from 22 cases with abortion or reproductive disorder.,Two strains of A. pyogenes and 1 strain of Fusobacterium necrophorum from 11 cases with hepatic lesions. Two strains of A. pyogenes and 1 strain
3、 of Corynebacterium pseudotuberculosis from 2 cases with lymphotitis. One strain of C. pseudotuberculosis from 1 case with spleen abscess. One strain of A. pyogenes from 1 case with peritonitis. One strain of A. pyogenes from 1 case with muscular abscess.,材料與方法,材料來源：各地防治所委託送檢之病材。細菌分離：一般臟器表面殺菌處理後，以無菌
4、剪刀剪開釣取內部細菌，假设確定為無菌操作取得之病材，可省去殺菌步驟。假设自糞材中分離特定細菌則須多加數種抗生素及操作手續，以抑制雜菌生長。細菌純化：選取單一菌落純化，以利後續鑑定步驟。,4. 細菌鑑定：包括使用傳統生化反應鑑定法，市售很多商品化套組可供使用，花費時間1-2天；另有依據細菌對於各種碳源利用能力而分類的鑑定方法；並以PCR增幅16S rDNA區域，與基因資料庫進行比對，可當作輔助鑑定方法。,結果,2006年4月到2017年5月間取得牛羊病例83例，其中包括肺炎症狀26例(31.3%)、下痢症狀24例(28.9%)、流死產及生殖道病變22例(26.5%)、肝臟病變11例(13.2%)
5、 、衰弱消瘦症狀4例(4.8%)、淋巴結炎3例(3.6%)、腎臟病變3例(3.6%)、神經症狀2例(2.4%)、關節炎2例(2.4%)、脾膿瘍1例(1.2%)、腹膜炎1例(1.2%)、肌肉化膿灶1例(1.2%)。,肺炎症狀26例中分離得16株病原菌包括Arcanobacterium pyogenes 7株(43.7%)、Streptococcus bovis II 4株(25%)、Pasteurella multocida 3株(18.7%)、Mannheimia haemolytica 1株(6.2%)、Klebsiella pneumonia 1株(6.2%)。下痢症狀24例中分離得Myc
6、obacterium avium subsp. paratuberculosis 6株。流死產及生殖道病變22例中分離得A. pyogenes 2株。,肝病變11例中分離得3株病原菌包括A. pyogenes 2株(66.7%)、Fusobacterium necrophorum 1株(33.3%)。其他包括淋巴結炎3例中分離得3株病原菌包括A. pyogenes 2株(66.7%)、Corynebacterium pseudotuberculosis 1株(33.3%)。脾膿瘍1例中分離得C. pseudotuberculosis 1株。腹膜炎1例中分離得A. pyogenes 1株。肌肉化
7、膿灶1例中分離得A. pyogenes 1株。,2006年到2007年間取得恆春畜產試驗所分所牛羊病例82例，以呼吸道症狀與其周邊淋巴結炎、以及多發性化膿病灶為主，共分離得病原菌41株，包括Str. bovis II 15株(36.6%)、Burkholderia pseudomallei 12株(29.3%)、C. pseudotuberculosis 7株(17%)、P. multocida 4株(9.7%)、M. haemolytica 2株(4.9%)、A. pyogenes 1株(2.4%)。,病原菌簡介,Arcanobacterium pyogenes舊名Corynebacteri
8、um pyogenes, Actinomyces pyogenes等等。 革蘭氏陽性短桿菌，細小溶血性菌落，無氧狀態生長比有氧狀態佳，需培養48小時才有足夠菌量做生化試驗。感染途徑要紧為傷口感染，可感染多種動物，造成多臟器多發性化膿病變。抗生素治療效果不佳。,Streptococcus bovis IID族鏈球菌，革蘭氏陽性球桿或是短桿菌，兼性厭氧，普遍存在反芻動物之呼吸道黏膜表面，為機緣性細菌。可引起人類心內膜炎。,Pasteurella multocida革蘭氏陰性桿菌，兩極濃染為特徵，氧化酶陽性，巴斯德桿菌在生化反應測試上幾乎不利用醣類。培養基上生長成白灰色菌落。呼吸道常在菌，為重要之肺
9、炎病原菌。感染禽類及各種哺乳動物，在哺乳動物的症狀特徵是爆發性出血性敗血症。,Mannheimia haemolytica舊稱Pasteurella haemolytica，革蘭氏陰性桿菌，特性與巴斯德桿菌類似。培養基上生長成白色溶血性菌落。在寒冷或運輸等緊迫因子下產生致害，要紧症狀為纖維素性肺炎，為重要之反芻動物肺炎病原菌。,Klebsiella pneumonia屬腸內菌科，革蘭氏陰性桿菌。培養基上生長成黏性透明菌落。機緣性細菌，會造成動物之肺炎，在人則是院內感染及傷口感染常見之細菌。,Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis分支桿菌屬，現分類
10、於鳥型分支桿菌內，可引起Johnes disease。使用添加Mycobactin J之蛋黃培養基分離，生長需2個月或更久。感染途徑為由口食入，引起慢性消耗性肉芽腫性腸炎，有冰山效應。可能與人類之Crohns disease相關。,Fusobacterium necrophorum絕對厭氧菌，革蘭氏陰性長絲狀菌。會造成牛羊的喉炎氣管炎(仔牛白喉)、腐蹄及壞死性肝炎，感染部位膿腫惡臭。也可能感染其他哺乳動物，常為二次性感染。,Corynebacterium pseudotuberculosis革蘭氏陽性桿菌，觸媒反應陽性，乾躁菌落型態，需48小時培養。羊隻由皮膚傷口、剪毛等傷口感染，引起局部乾酪
11、性淋巴腺炎、膿血症或全身性多發性膿疱。,討論,無法從樣本分離到病原菌之最大缘故為雜菌汙染(尤其是變形菌汙染)，當污染嚴重時，便無法分離到正確之病原菌，汙染缘故包括保存運送錯誤造成樣本腐壞、各臟器混雜保存、採樣時候污染等。其他影響分離因素包括採集之樣本品過小、樣本未採取到病灶處及分離時候操作錯誤等等。此外，養殖戶私用各種抗生素治療也對病原菌之分離有很大之影響。,目前鑑定之方法仍以傳統之生化反應為主，可是市售套組常常無法正確鑑定出菌別，因此常會配合碳源利用法及16S序列比對之方式輔助鑑定。所有送檢病例中(不包含恆春試驗所)前三名症狀為肺炎症狀26例(31.3%)、下痢症狀24例(28.9%)、流死
12、產及生殖道病變22例(26.5%)。,所有細菌分離結果中以造成化膿病灶之A. pyogenes比例最高(15/33, 45.5%)，缘故可能包括引起之病灶明顯，因此採樣及細菌分離時目標明確；並且此菌可長於厭養環境及耐抗生素特性，當樣本污染及私用抗生素下，仍可利用厭氧將之分離出來。據其他國家報告，反芻動物肺炎前3名應為M. haemolytica、P. multocida、Histophilus somni。,反芻動物下痢依分離結果，以副結核分支桿菌最主，依照此菌特性，必然養殖場中有很大比例之次臨床期動物未被發現。可能引起流產之細菌性病原包括布氏桿菌、彎曲菌等，本次結果中皆未分離到。恆春試驗所牛羊的分離結果，除去常在菌Str. bovis II 後，前3名為B. pseudomallei 、C. pseudotuberculosis、P. multocida，可提供正確細菌性病原之參考資料。,
