1、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与肿瘤治疗,顾康生,主要内容,1.CIK发展概况,2.CIK基础介绍,3.CIK的临床应用,4.CIK治疗存在的问题,5.CIK治疗前景,schmidt R报道CIK细胞的存在,Negrin R S报道CIK细胞治疗恶性肿瘤动物实验结果,国内北京大学人民医院首先报道CIK细胞治疗白血病,国内有148篇CIK研究报道，但以基础研究为主，临床应用报道较少。,1986年,1994年,1996年,2006年止,CIK发展概况,CIK发展概况,到目前为止，国内有21个省和直辖市均有关于CIK的文献报道，但安徽省是空白。而国外还处于科研阶段，中国是世界上唯一批准CIK细胞治
2、疗用于临床的国家。,CIK发展概况,美国“国际肿瘤生物/免疫治疗及基因治疗”2000年年会总结报告中指出：“生物治疗是目前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗的时代”。因而人们从没有放弃对生物治疗的探索。,CIK细胞基础介绍,CIK最初是指在正常人体外周血中只占15%的CD3+CD56+的T淋巴细胞目前国内外制备的用于过继免疫治疗的CIK细胞,实际上是体外扩增出的以CD3+CD56+CD3+CD8+为主的异质性细胞群,来源于人外周血单个核细胞，并在体外经CD3McAb和IFN-r、IL-2等多种细胞因子共培养后获得,主要效应细胞的表面标志为CD3+CD56+,具有
3、广泛的非MHC限制的极强的溶瘤活性,对多重耐药肿瘤细胞同样敏感,CIK作用特点,抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡,CIK作用特点,CIK细胞虽然以CD3CD56+细胞为主要效应细胞，但却没有T淋巴细胞杀伤时的MHC限制性。对于多种肿瘤细胞系（NK敏感的K562和NK不敏感的Hela、HL60、人T细胞急淋白血病细胞系CCRF-CEM，人淋巴瘤细胞系OCI-LY8/TAM53，人结肠癌细胞系HT-29、CR75、人肾癌细胞系A704）和新鲜肿瘤组织均表现出强大的杀伤活性。,1抗瘤谱广,CIK细胞在培养过程中加入IFN-r 、IL-la、抗CD3 McAb、IL-2等因子后, 细胞增
4、殖速度迅速加快，远超过LAK细胞 。在培养第22天增殖曲线达顶峰，约增加100倍，其中CD3CD56细胞不仅绝对数量增加 1000倍以上且所占百分比也大幅上升，至培养28-30天时达平台期，细胞毒活性亦达峰值，而LAK细胞培养前后数量没有明显增加。,2增殖速度快,CIK作用特点,3杀瘤活性高,CIK细胞是以CD3CD56 T细胞为主的异质细胞群，大量体内外实验证实CIK细胞较LAK细胞具备更强大的杀瘤活性，而且其体内杀瘤细胞毒性的维持不必依赖大剂量外源性IL-2的持续给予。体外实验中，等数量的CIK细胞比LAK细胞对肿瘤细胞系的杀伤能力稍高或相近，但因CIK细胞在培养过程中CD 3CD56+效
5、应细胞增长迅速，故CIK细胞的总杀伤单位为LAK细胞的73倍甚至更高，其杀伤效率显著高于LAK细胞,CIK作用特点,WOLF用阿霉素和长春新碱诱导多重耐药细胞系K562DOX和CCRF-CEM-VBI 发现CIK细胞对化疗药物敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性，两者比较无差别。,4,对多重耐药肿瘤细胞同样敏感,CIK作用特点,5,对正常骨髓造血前体细胞毒性小,Scheffold 通过CFU-GM形成实验检测CIK细胞对骨髓造血前体细胞的影响发现CIK细胞对K562细胞的杀伤强度高达3级，但对GM-CFU仅有不足1级的抑制。HoIye也证实CIK细胞对正常髓系克隆生成几乎没有影
6、响，只是对红系的生成显示出轻度抑制。,CIK作用特点,已证明过继免疫治疗失败的一个重要原因是肿瘤细胞表面表达的某些蛋白(主要是Fasl)能诱导过继效应细胞凋亡，而CIK细胞虽然在Fas被占据后会引起少量细胞凋亡，但对其杀瘤细胞毒性没有明显影响 。,6,抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡,CIK作用特点,LAK细胞基础介绍,来源于由IL-2激活的淋巴细胞，活性必须IL-2维持，而大剂量IL-2有严重的不良反应,其表型标志尚未确定，但存在异质性，即有几种表型。,其识别和杀伤作用是非特异性和MHC非限制性，对自体肿瘤细胞、同种或异种肿瘤细胞均有杀伤作用。,体外扩增较困难，临床应用有效性不
7、高，适应范围较窄。,TIL细胞基础介绍,来源于肿瘤组织中分离出的淋巴细胞，并在体外经IL-2诱导培养扩增，体外抗肿瘤的活性是LAK的50100倍。,TIL表达CD3CD8或CD3 CD4标志,肿瘤杀伤活性为MHC限制性，即为自体肿瘤特异性杀伤细胞。,TIL的制备困难，要制备出临床治疗量的细胞数必须获取患者的肿瘤组织，并需要在体外培养36周，而扩增治疗所需细胞数有限，且离体TIL易发生活性改变。,CIKCell,TILCell,LAK Cell,来源,制备,抗瘤活性,副作用,外周血单个核细胞+抗CD3单抗+IL-2、IFN,外周血单个核细胞+IL-2,肿瘤组织内淋巴细胞+IL-2,可大量扩增,不
8、易大量扩增,细胞来源困难、不易扩增,最强、广谱,最差，狭窄,次之，特异性,低,低,较大,CIK、LAK、TIL比较,第一天,第二天,每八天,抽患者外周血3050mL,分离收集单个核细胞，加入培养液及1 000Uml IFN-r, 100Uml IL-1 20L,加入1 000Uml IL-2L、50ngml的CD3单抗30L。置37C 5的C02条件下培养,补加IL-2的同时再补加CD3单抗15ul/ml,CIK制备方法,CIK制备回输,培养两周后开始收集CIK细胞，生理盐水洗涤3次，加入10%人血白蛋白、300U IL-2，用生理盐水配成100ml后静脉回输，隔天回输1次，分3次输完，每次回
9、输109细胞以上，回输前均作菌检及细菌培养。,第0天、第七天、及第十四天取细胞用台盼蓝拒染法记数，第15天收获细胞用FCM测定CD3+CD56+细胞百分数,CIK制备回输,CIK可来源自体、异体和脐血。,分泌多种细胞因子。不仅抑制肿瘤生长；同时通过调节免疫系统间接杀伤肿瘤细胞,释放颗粒酶、穿孔素而裂解靶细胞,诱导肿瘤细胞凋亡及坏死,杀伤肿瘤细胞,CIK作用机制,CIK作用机制,适应症,禁忌症,放化疗诱导缓解后的肿瘤患者 多药耐药的肿瘤细胞骨髓移植后免疫治疗晚期肿瘤病人,CIK细胞对化疗药物敏感，不能与化疗同时应用IL-2过敏患者，不能用CIK细胞治疗。,临床应用CIK治疗的适应症与禁忌症,放化
10、疗诱导缓解后的肿瘤患者,01,CIK细胞可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下，直接杀伤肿瘤细胞，调节和增强机体的免疫功能，因而成为肿瘤手术、放疗、化疗的重要辅助手段。在放疗、化疗后间隔24周，机体免疫力有所恢复时，输入CIK细胞，可提高肿瘤患者的缓解率 。在清除微小残留病灶方面，CIK细胞也发挥着重要作用。,临床应用CIK治疗的适应症,02,对多药耐药肿瘤细胞的影响,肿瘤细胞对药物的耐受性是许多恶性肿瘤治疗的主要障碍Schmidt Wolf等 研究证实对柔红霉素耐药的K562细胞对CIK细胞较敏感，这表明CIK细胞对恶性克隆形成的抑制作用与多药耐药基因的表达无关，这一发现为克服化疗诱导的
11、药物耐药提供了一个有效的治疗前景。,临床应用CIK治疗的适应症,03,骨髓移植后免疫治疗,骨髓移植可以使白血病患者得到根治，但无论是异体移植或自体骨髓移植，都存在一定的复发率。CIK细胞从白血病患者体内取出培养后，在体内外有很强的杀伤K562细胞、裂解急性髓系白血病细胞的作用，可提高自体移植后免疫治疗作用，降低复发率。,临床应用CIK治疗的适应症,04,晚期肿瘤病人,传统的手术，放、化疗无法耐受，应用CIK细胞治疗可以改善生活质量，延长生存期。,临床应用CIK治疗的适应症,目的：观察放化疗后的肿瘤患者回输CIK细胞后生活质量及细胞免疫功能变化，探讨CIK细胞回输对放化疗后的肿瘤患者的治疗作用。
12、,临床应用,实验组抽取CIK细胞回输治疗，检测外周血细胞免疫指标并比较CIK细胞回输治疗后生活质量改善情况,放化疗治疗后的肿瘤患者31例为实验组，正常人14例作对照组,CIK细胞的临床应用,上述指标较治疗前相比有改善(P0.05),与正常人相比差异有统计学意义(P0.05),生活质量评分均较治疗前明显改善(P0.05),结论：放化疗后的肿瘤患者免疫功能下降，而CIK细胞回输治疗安全可靠，可以改善放化疗后肿瘤患者近期免疫功能及生活质量，可作为放化疗后肿瘤患者辅助治疗的一种选择。,Image Info www.wizdata.co.kr - Note to customers : This ima
13、ge has been licensed to be used within this PowerPoint template only. You may not extract the image for any other use.,结果：放化疗后的肿瘤患者外周血CD3+、CD4+细胞百分率下降，CD8+细胞百分率上升；CD4+CD8+比值下调，CD16+CD56+细胞减少,CIK细胞的临床应用,选择110例晚期实体瘤患者，分离外周血单个核细胞（ DCs ），制备CIK细胞,方法,结果,结论,42例可评价病灶的患者中，2例完全缓解(CR)、9例部分缓解(PR)、15例疾病稳定(SD)。37
14、例不可评价病灶的患者中，25例患者有效。与治疗前相比，治疗后免疫功能及肿瘤标志物有一定程度改善,DCsCIK细胞联合治疗晚期恶性实体瘤安全有效，具有一定的临床应用前景,目的：研究树突状细胞和CIK联合治疗晚期实体瘤的临床疗效,CIK细胞的临床应用,有研究对9名肾透明细胞癌患者进行cik治疗并随访4年发现患者体内T细胞亚群比例由治疗前的抑制状态恢复到正常水平,一定程度地提高了患者机体对抗肿瘤的能力，所有患者均未见复发与转移,CIK细胞的临床应用,观察和分析cik细胞过继免疫疗法对多种中晚期恶性肿瘤的临床疗效,目的,结果,结论,256例接受cik细胞治疗患者中总缓解率为80.86%,1年生存期为9
15、6.09%,2年生存期为92.96%3年生存期为88.28%,cik细胞过继免疫疗法能明显地提高患者免疫功能,减轻临床症状,提高生活质量,延长生存期,CIK细胞的临床应用,鲍锋等实验结果,发热38 左右,体温超过39,体温在38左右，多数可自行缓解，也可给予解热镇痛药退热,如果患者在输注过程中体温超过39，应立即停止治疗，寻找原因并及时处理,发热处理,目前认为生物治疗中患者中度发热是机体免疫功能正常反应的结果，该反应对治疗有益其它少见的副作用有胸闷和恶心，尚未出现如过敏,肝肾衰竭等其他不良反应,CIK治疗最常见的副作用是发热,CIK治疗的副作用,每次输注CIK细胞数量、输注次数,制备需要一定条件,制备标准化及质量控制标准尚未制定,治疗疗效的观察指标,治疗疗效观察时间,CIK治疗存在的问题,理论上CIK可用于各种期别的恶性肿瘤，但术后用于抗复发治疗还是晚期病人效果更好不清楚,如何与其他治疗手段配合使用,目前CIK临床研究均没有进行随机对照，样本量小,理论上CIK可用于多种恶性肿瘤，但实际上其适应瘤谱不清楚,CIK治疗存在的问题,Thank You!,顾康生,
