结核分枝杆菌与实验室生物安全.docx

1、结 核 分 枝 杆 菌 与 实 验 室 生 物 安 全广 东 省 结 核 病 防 治 研 究 所钟 球 钱 明附 件广 东 省 结 核 病 防 治 研 究 所钟 球 钱 明 结 核 病 的 定 义 结 核 病 的 疫 情 结 核 病 病 原 学 结 核 病 的 流 行 结 核 病 实 验 室 生 物 安 全 结 核 病 实 验 室 安 全 防 护 结 核 病 实 验 室 废 物 处 理 结 核 病 职 业 暴 露 结 核 病 是 由 结 核 分 枝 杆 菌 （ 偶 尔 可 由 牛 型 或 非 洲 型 分 枝 杆 菌 ） 引 起 的一 种 细 菌 性 疾 病 。 结 核 病 可 累 及 全 身

2、各 个 器 官 ， 但 以 肺 结 核 最 为 常 见 。该 病 具 有 传 染 性 强 ， 散 播 面 广 ， 不 分 地 域 均 可 发 生 。 结 核 病 可 由 呼 吸 道 、消 化 道 、 皮 肤 等 途 径 感 染 ， 但 其 主 要 传 播 途 径 是 以 空 气 为 传 播 因 子 的 呼吸 道 传 染 ， 而 排 菌 的 肺 结 核 病 人 传 染 性 更 大 ， 是 传 播 感 染 的 主 要 传 染 源 。结 核 病 的 疫 情n 感 染 人 数 约 为 20 亿n 新 发 活 动 性 肺 结 核 病 人 890 万 (141/10 万 )n 新 发 涂 阳 肺 结 核

3、病 人 390 万 n 结 核 病 发 病 率 每 年 增 加 1%n 估 计 患 病 人 数 为 1550 万 例 （ 患 病 率 为 246/10 万 ） 其 中 包 括HIV+TB38 万 例n 死 于 结 核 病 为 180 万 例 ， 结 核 病 死 亡 率 为 29/10 万 ,其 中 包 括HIV+TB 死 亡 27 万 例 结 核 病 病 原 学 结 核 分 枝 杆 菌 是 引 起 人 类 结 核 病 的 主 要 病 原 体 。 1882 年 由 德 国医 生 Koch 发 现 。 在 微 生 物 分 类 中 ， 结 核 分 枝 杆 菌 属 于 厚 壁 门 、 裂 殖 菌纲 、

4、 放 线 菌 目 、 分 枝 杆 菌 科 、 分 枝 杆 菌 属 。 分 枝 杆 菌 复 合 群 共 包 括 人 型 、牛 型 、 非 洲 型 和 田 鼠 型 ， 而 人 型 结 核 分 枝 杆 菌 是 人 类 主 要 的 致 病 菌 。结 核 分 枝 杆 菌 的 形 态 结 核 分 枝 杆 菌 菌 体 具 有 多 形 态 特 征 ， 除 正 常 典 型 形 态 外 ， 受 不 良生 长 条 件 的 影 响 。 如 物 理 因 素 、 化 学 因 素 ， 特 别 是 药 物 因 素 ， 而 呈 现 异常 变 化 ， 其 各 种 形 态 可 归 纳 为 杆 菌 型 （ 基 本 形 态 ） 、 滤

5、 过 型 、 颗 粒 型 和球 菌 型 （ L 型 ） 4 种 类 型 。 1. 杆 菌 型 （ 基 本 形 态 ） 结 核 分 枝 杆 菌 正 常 典 型 的 形 态 是 直 或 稍 弯曲 、 两 端 钝 圆 的 杆 菌 。 菌 体 长 1 4m， 宽 0.3 0.6m， 无 芽胞 、 无 荚 膜 、 无 鞭 毛 ， 生 长 发 育 期 间 有 分 枝 生 长 倾 向 。 2. 滤 过 型 早 在 1901 年 ， Foutes 在 检 查 细 菌 滤 器 滤 过 的 结 核分 枝 杆 菌 培 养 滤 液 时 ， 在 电 子 显 微 镜 下 观 察 到 球 状 微 粒 体 。 1991年 ，

6、 Khomeko 在 豚 鼠 损 坏 性 肺 结 核 模 型 中 证 实 了 滤 过 型 的 存 在 。 此 球状 微 粒 体 可 通 过 细 菌 滤 膜 ， 称 为 滤 过 型 。 3. 颗 粒 型 1907 年 莫 赫 (Much)在 结 核 性 冷 性 脓 肿 、 浆 液 性 渗出 液 、 干 酪 性 淋 巴 结 等 脓 液 中 观 察 到 革 兰 染 色 阳 性 颗 粒 ， 称 为 莫 赫 颗 粒 。莫 赫 颗 粒 的 重 要 意 义 在 于 这 些 颗 粒 型 体 仍 有 生 机 与 活 力 ， 在 适 宜 的 营 养条 件 下 ， 可 重 新 获 得 增 殖 ， 发 育 生 长 出

7、 典 型 结 核 分 枝 杆 菌 。 4. 球 菌 型 （ L 型 ） 结 核 分 枝 杆 菌 在 体 内 外 受 物 理 、 化 学 、 免疫 等 因 素 的 影 响 ， 维 持 菌 体 固 有 形 态 的 细 胞 壁 缺 损 或 丧 失 ， 产 生 细 胞 壁缺 陷 型 。 细 胞 壁 缺 陷 型 细 菌 是 1935 年 Kilienberger 在 英 国 Lister医 学 研 究 院 研 究 念 珠 状 链 杆 菌 时 首 先 发 现 的 ， 故 以 Lister 医 学 研 究院 的 第 一 个 字 母 ， 将 细 胞 壁 缺 陷 型 细 菌 命 名 为 L 型 菌 。结 核 分

8、 枝 杆 菌 的 染 色 特 性 结 核 分 枝 杆 菌 本 身 无 颜 色 ， 观 察 结 核 分 枝 杆 菌 必 须 染 色 后 进 行 。结 核 分 枝 杆 菌 革 兰 染 色 阳 性 ， 但 革 兰 染 色 不 易 着 色 。 经 苯 胺 染 料 着色 后 ， 能 抵 抗 酸 和 酸 乙 醇 脱 色 ， 此 种 特 性 称 为 抗 酸 性 。 Z-N 染 色 法为 最 常 用 的 一 种 抗 酸 染 色 方 法 ， 经 此 法 染 色 后 ， 分 枝 杆 菌 ， 包 括 结 核 分枝 杆 菌 呈 红 色 ， 而 标 本 中 其 他 细 菌 、 细 胞 、 杂 质 等 均 呈 蓝 色结

9、核 分 枝 杆 菌 的 生 长 特 性 结 核 分 枝 杆 菌 生 长 缓 慢 ， 繁 殖 一 代 在 人 工 培 养 基 内 约 需 要15 20 小 时 ， 在 静 脉 感 染 未 经 免 疫 小 鼠 肺 中 约 需 要 15 小 时 ， 在 巨噬 细 胞 内 约 需 要 15 20 小 时 ， 在 家 兔 角 膜 中 约 需 要 20 22 小 时 。结 核 分 枝 杆 菌 的 抵 抗 力 结 核 分 枝 杆 菌 因 细 胞 壁 含 大 量 类 脂 质 ， 尤 其 是 腊 样 物 质 ， 具 有 疏 水性 ， 对 物 理 和 化 学 因 素 的 作 用 均 较 一 般 致 病 菌 抵 抗

10、 力 强 。 1. 物 理 因 素 影 响 结 核 分 枝 杆 菌 生 存 能 力 较 强 ， 在 温 室 和 阴 暗处 干 燥 痰 内 可 以 存 活 6 8 个 月 ， 粘 附 在 飞 扬 的 空 气 尘 埃 中 可 保 持 传染 性 8 10 天 。 结 核 分 枝 杆 菌 一 般 较 耐 低 温 ， 在 -6 8 能 存 活4 5 年 。 干 热 对 结 核 分 枝 杆 菌 杀 伤 力 弱 ， 痰 内 结 核 分 枝 杆 菌 在 100下 需 要 4 5 小 时 被 杀 灭 。 湿 热 对 结 核 分 枝 杆 菌 杀 伤 力 强 ， 在 6030 分 钟 、 70 10 分 钟 、 8

11、0 5 分 钟 和 90 1 分 钟 可 将 其 杀 死 ， 因 此煮 沸 与 高 压 蒸 气 消 毒 是 最 有 效 的 方 法 之 一 。 结 核 分 枝 杆 菌 对 光 线 和 射 线 敏 感 ， 在 太 阳 光 直 射 下 2 7 小 时死 亡 。 病 人 用 过 的 物 品 在 强 阳 光 下 直 晒 半 日 ， 基 本 可 达 到 消 毒 的 目 的 。10 1mg/ml 菌 悬 液 ， 液 层 厚 度 3mm， 用 10W 紫 外 线 灯 在 距 离 确 0.5m 处 持 续 照 射 3 分 钟 ， 在 距 离 1m 处 持 续 照 射 10 分 钟 ， 经 培 养无 细 菌 生

12、 长 。 但 紫 外 线 穿 透 力 弱 ， 难 以 透 入 固 体 物 质 内 部 和 液 体 深 层 ，因 此 紫 外 线 通 常 用 于 空 气 和 物 体 表 面 消 毒 。 2. 化 学 因 素 的 影 响 化 学 消 毒 剂 的 种 类 很 多 ， 其 杀 菌 的 机 制 因 化学 药 物 种 类 不 同 而 异 。 乙 醇 使 菌 细 胞 蛋 白 质 变 性 、 凝 固 而 产 生 杀 菌 作 用 。结 核 分 枝 杆 菌 直 接 接 触 70% 75%乙 醇 5 30 分 钟 可 被 杀 死 ， 因 此 可用 于 皮 肤 消 毒 。 但 由 于 乙 醇 能 凝 固 蛋 白 ，

13、使 痰 表 面 形 成 一 层 把 菌 体 包 裹起 来 的 膜 ， 短 时 间 内 不 能 杀 死 细 菌 ， 故 乙 醇 不 能 用 于 痰 的 消 毒 。 苯 酚 主 要 通 过 破 坏 菌 细 胞 膜 而 致 细 胞 质 内 容 物 漏 出 ， 使 菌 体 蛋 白质 变 性 、 凝 固 ， 抑 制 菌 体 脱 氢 酶 和 氧 化 酶 等 酶 系 统 杀 死 结 核 分 枝 杆 菌 。2%苯 酚 5 分 钟 、 5%苯 酚 1 分 钟 能 杀 死 结 核 分 枝 杆 菌 培 养 物 。 5%苯酚 与 痰 液 等 量 混 合 ， 24 小 时 才 能 杀 死 结 核 分 枝 杆 菌 。 煤

14、 酚 皂 溶 液 作 用机 制 与 苯 酚 相 似 ， 0.5%煤 酚 皂 60 分 钟 ， 1%煤 酚 皂 45 分 钟 ， 2%煤酚 皂 10 分 钟 ， 5%煤 酚 皂 5 分 钟 ， 即 能 杀 死 结 核 分 枝 杆 菌 培 养 物 。5% 10%煤 酚 皂 等 量 混 入 痰 标 本 ， 12 小 时 可 杀 灭 结 核 分 枝 杆 菌 。 甲 醛 使 菌 细 胞 蛋 白 质 变 性 凝 固 ， 丧 失 代 谢 功 能 致 细 菌 死 亡 。1%甲 醛 处 理 结 核 分 枝 杆 菌 5 分 钟 ， 可 使 细 菌 死 亡 。 5%甲 醛 和 痰 液 等量 混 合 ， 处 理 12

15、 小 时 以 上 才 能 达 到 杀 菌 作 用 。 “84”消 毒 液 是 以 氯 为 主 要 成 分 的 消 毒 剂 。 氯 是 一 种 氧 化 剂 ， 能 使 菌体 的 酶 失 活 ， 还 能 与 蛋 白 质 的 氨 基 结 合 ， 使 菌 体 蛋 白 氯 化 ， 代 谢 功 能 障碍 ， 细 菌 死 亡 。 0.5%“84”消 毒 液 15 分 钟 可 杀 死 结 核 分 枝 杆 菌 培 养 物 ，但 对 在 蛋 白 质 混 合 液 中 的 结 核 分 枝 杆 菌 几 乎 无 消 毒 效 果 。 结 核 分 枝 杆 菌 对 酸 、 碱 抵 抗 力 强 ， 在 4%NaOH， 3%HCL

16、 和6%H2SO4 中 30 分 钟 仍 能 存 活 。 临 床 应 用 酸 或 碱 加 入 病 人 标 本 ， 消 化 蛋白 质 及 杀 灭 杂 菌 ， 以 此 分 离 出 结 核 分 枝 杆 菌 。 结 核 分 枝 杆 菌 对 染 料 ， 如1 13000 孔 雀 绿 和 1 75000 甲 紫 有 抵 抗 力 ， 通 常 在 培 养 基 内 加 入 一定 量 的 孔 雀 绿 或 甲 紫 抑 制 其 他 杂 菌 生 长 。 对 普 通 细 菌 有 较 强 杀 菌 作 用 的新 洁 尔 灭 ， 对 结 核 分 枝 杆 菌 几 乎 无 消 毒 作 用 。 结 核 分 枝 杆 菌 的 致 病 性

17、 结 核 分 枝 杆 菌 不 产 生 内 、 外 毒 素 ， 也 无 侵 袭 性 酶 类 。 一 般 认 为 其致 病 作 用 可 能 与 菌 体 表 面 结 构 及 某 些 菌 体 成 分 ， 如 脂 质 、 某 些 菌 体 蛋 白 、多 糖 等 多 种 物 质 有 关 ， 主 要 是 有 毒 结 核 分 枝 杆 菌 菌 株 在 易 感 机 体 内 顽 强增 殖 和 与 机 体 相 互 作 用 的 结 果 。结 核 病 流 行 结 核 病 在 人 群 中 流 行 的 三 个 生 物 学 环 节 是 ：1、 传 染 源 ，2、 感 染 传 播 途 径 ；3、 易 感 人 群 。影 响 结 核

18、分 枝 杆 菌 传 播 的 主 要 因 素 1、 排 菌 量 痰 中 结 核 分 枝 杆 菌 越 多 ， 传 播 的 危 险 性 越 大 。 病 人 出 现痰 涂 片 阳 性 若 1ml 痰 液 中 含 菌 量 为 1 000 10 000， 其 痰 涂 片 阳性 率 为 40% 50%， 痰 液 中 含 菌 量 低 时 ， 痰 涂 片 阳 性 率 亦 低 （ 表l） 。 表 1 痰 涂 片 与 痰 标 本 中 结 核 分 枝 杆 菌 数 痰 涂 片 阳 性 （ 涂 阳 ） 病 人 的 排 菌 量 大 ， 其 密 切 接 触 者 的 结 核 感 染率 明 显 高 于 痰 涂 片 阴 性 （ 涂

19、 阴 ） 病 人 的 密 切 接 触 者 ， 英 国 报 告 涂 阴 培 阴病 人 的 家 庭 儿 童 密 切 接 触 者 结 核 感 染 率 为 17.6%； 涂 阴 培 阳 病 人 的接 触 者 结 核 感 染 率 为 26.8%； 涂 阳 培 阳 病 人 的 接 触 者 结 核 感 染 率 高 达65.0%（ 表 2） 。 表 2 不 同 传 染 源 对 15 岁 以 下 密 切 接 触 者 的 感 染 率 （ %） 2 排 出 飞 沫 的 大 小 传 染 源 排 出 的 飞 沫 受 压 力 和 粘 稠 度 的 影 响 而大 小 不 一 ， 飞 沬 核 直 径 1 10m 者 在 空 气

20、 中 漂 浮 时 间 长 ， 可 进 入 人体 末 梢 支 气 管 内 ； 飞 沫 核 直 径 较 大 者 ， 则 受 地 心 引 力 的 影 响 而 坠 落 。 3 患 者 病 变 与 症 状 病 变 广 泛 、 损 害 严 重 的 患 者 ， 尤 其 是 病 变 急剧 进 展 ， 干 酪 溶 解 形 成 空 洞 患 者 的 痰 中 含 有 大 量 结 核 分 枝 杆 菌 ， 是 主 要的 传 染 源 。 患 者 咳 嗽 、 喷 嚏 或 大 声 说 话 时 都 能 产 生 飞 沫 ， 有 报 道 ， 当 人咳 嗽 时 每 次 排 出 的 飞 沫 数 约 为 3500 个 ， 一 次 喷 嚏

21、则 可 排 出 飞 沫 达100 万 个 ； 平 常 说 话 5 分 钟 所 排 出 的 飞 沫 数 相 当 于 一 次 咳 嗽 ， 咳 嗽 是肺 结 核 病 人 产 生 飞 沫 的 主 要 方 式 。 表 3 记 录 了 病 人 每 晚 咳 嗽 次 数 ， 并 观 察 其 0 14 岁 家 庭 接 触 者的 结 核 感 染 率 每 晚 咳 嗽 48 次 以 上 患 者 的 家 庭 接 触 者 感 染 率 为 43.9%，而 咳 嗽 12 次 以 下 患 者 的 接 触 者 感 染 率 为 27.5 %。 表 3 传 染 源 咳 嗽 次 数 与 接 触 者 感 染 率 4 接 触 的 密 切

22、程 度 周 围 人 群 与 传 染 源 接 触 越 密 切 ， 受 感 染的 机 会 越 多 ， 涂 片 阳 性 病 人 的 密 切 接 触 者 感 染 率 明 显 高 于 偶 尔 接 触 者（ 表 4） 。 表 4 不 同 接 触 程 度 儿 童 感 染 率 5 环 境 因 素 与 传 染 源 病 人 同 处 于 空 气 不 流 通 的 室 内 的 密 切接 触 者 ， 受 结 核 感 染 的 可 能 性 增 大 。 第 二 次 世 界 大 战 时 期 曾 报 道 潜 艇 内官 兵 大 批 感 染 和 发 病 ， 也 有 民 航 客 机 上 结 核 病 传 染 源 使 同 机 乘 客 受 感

23、 染的 报 道 。传 播 途 径 呼 吸 道 感 染 （ respirator tract infection） 是 肺 结 核 的 主 要 传染 途 径 （ routes of infection） ， 飞 沬 传 染 （ droplet infection）为 最 常 见 的 方 式 。 传 染 源 主 要 是 排 菌 的 肺 结 核 患 者 （ 尤 其 是 痰 涂 片 阳 性未 经 治 疗 者 ） 。 飞 沬 核 （ droplet nuclei） 10m 时 可 被 吸 人 呼吸 道 ， 健 康 人 可 因 吸 入 患 者 咳 嗽 、 打 喷 嚏 时 喷 出 的 带 菌 飞 沫 而 受

24、 感 染 。 易 感 者 结 核 分 枝 杆 菌 进 人 人 体 ， 引 起 易 感 者 （ susceptible） 机 体 的复 杂 反 应 。 1 人 体 的 防 御 反 应 人 体 的 防 御 反 应 （ defense reaction） 有 物 理 、 化 学 和 生 物 学 反 应 。 进 人 呼 吸 道 的 结 核 分 枝 杆 菌 飞泳 核 可 被 鼻 、 咽 、 喉 、 气 管 和 支 气 管 的 粘 液 吸 着 、 被 酶 杀 灭 并 随 纤 毛 运动 经 咳 嗽 、 喷 嚏 和 咳 痰 等 动 作 排 出 体 外 ， 或 被 吞 噬 细 胞 吞 噬 杀 灭 。 当 防御

25、功 能 （ defense function） 低 下 时 ， 结 核 分 枝 杆 菌 进 人 下 呼 吸 道 ，引 起 机 体 反 应 。 2 人 体 的 易 感 性 未 受 结 核 感 染 的 人 是 结 核 病 的 易 感 人 群（ susceptible population） 一 旦 受 到 结 核 分 枝 杆 菌 传 播 ， 具 有 普 遍 的易 感 性 （ susceptibility） ， 进 入 人 体 的 结 核 分 枝 杆 菌 可 在 人 体 内 繁 殖 ，结 核 分 枝 杆 菌 的 繁 殖 周 期 约 为 10 20 小 时 ， 一 条 结 核 分 枝 杆 菌 在 体内

26、 繁 殖 1 周 可 达 128 条 菌 ， 繁 殖 20 天 将 超 过 100 万 条 菌 （ 表 5） ，体 内 的 大 量 结 核 分 枝 杆 菌 将 使 人 体 患 病 ， 引 起 机 体 的 免 疫 与 变 态 反 应 。 表 5 一 条 结 核 分 枝 杆 菌 在 体 内 的 繁 殖 情 况 3.免 疫 与 变 态 反 应 人 体 对 结 核 分 枝 杆 菌 的 自 然 免 疫 力（ natural immunity） （ 先 天 免 疫 力 ） 是 非 特 异 性 的 。 接 种 卡 介 苗（ bacilli calmette gurin， BCG） 或 受 结 核 分 枝 杆

27、 菌 感 染 后 所产 生 的 获 得 免 疫 力 （ acquired immunity） （ 后 天 性 免 疫 力 ） 则 具 有特 异 性 ， 能 将 入 侵 的 结 核 分 枝 杆 菌 杀 死 或 严 密 包 围 ， 制 止 其 扩 散 ， 使 病灶 愈 合 。 结 核 病 的 免 疫 主 要 是 细 胞 免 疫 ， 表 现 为 淋 巴 细 胞 的 致 敏 与 吞 噬细 胞 功 能 的 增 强 。化 疗 时 代 的 结 核 病 流 行 化 学 疗 法 的 流 行 病 学 效 果传 染 性 肺 结 核 病 人 接 受 抗 结 核 药 物 化 学 治 疗（ chemotherapy） 后

28、 ， 肺 部 病 灶 中 的 结 核 分 枝 杆 菌 被 杀 灭 ， 传 染 性 减小 以 至 消 失 ， 传 染 源 的 流 行 病 学 作 用 随 之 消 失 。 实 验 报 告 敏 感 菌 在 未 治疗 时 相 对 传 染 性 100%， 在 治 疗 中 只 有 25%， 耐 药 病 人 未 治 疗 时 相 对传 染 性 为 100%。 在 治 疗 时 则 只 有 27.3%。结 核 分 枝 杆 菌 检 查 一 、 结 核 分 枝 杆 菌 检 查 的 意 义结 核 病 是 由 结 核 分 枝 杆 菌 引 起 的 可 致 全 身 器 官 或 组 织 发 生 病 变 ， 而 以肺 部 病 变

29、 为 常 见 的 传 染 性 疾 病 。 因 此 ， 痰 结 核 菌 的 检 查 是 结 核 病 流 行 病学 、 结 核 病 诊 断 、 确 定 化 疗 方 案 以 及 评 价 治 疗 效 果 的 重 要 手 段 ， 在 现 代结 核 病 控 制 工 作 中 起 着 不 可 或 缺 的 重 要 作 用 。 结 核 分 枝 杆 菌 检 查 : 直 接 涂 片 ; 结 核 分 枝 杆 菌 的 分 离 培 养 和 结核 分 枝 杆 菌 的 药 物 敏 感 性 测 定结 核 病 实 验 室 生 物 安 全 一 、 生 物 安 全 的 概 念实 验 室 生 物 安 全 ， 是 指 在 以 微 生 物

30、为 对 象 的 实 验 工 作 中 ， 预防 生 物 危 害 ， 保 障 操 作 对 象 、 操 作 者 和 环 境 的 安 全 。 合 理 的 实 验 室 建 筑结 构 和 布 局 、 生 物 安 全 柜 的 正 确 使 用 ， 可 以 使 操 作 对 象 和 工 作 人 员 得 到有 效 的 保 护 ， 排 出 的 空 气 经 高 效 滤 器 滤 过 也 可 以 保 护 邻 近 人 员 及 环 境 的安 全 。 在 没 有 保 证 安 全 的 实 验 室 条 件 下 ， 处 理 传 染 性 强 的 实 验 材 料 时 ，防 护 服 、 预 防 免 疫 和 药 物 预 防 是 实 验 室 生

31、 物 安 全 的 必 要 保 证 。 二 、 术 语 与 定 义(一 ) 生 物 因 子 （ biological agents ） 一 切 微 生 物 和 生 物 活 性物 质 。 (二 ) 病 原 体 （ pathogens ） 可 使 人 、 动 物 或 植 物 致 病 的 生 物因 子 （ 包 括 微 生 物 、 寄 生 虫 等 ） 。(三 ) 危 害 废 弃 物 （ hazardous waste ） 有 潜 在 生 物 危 险 、 可燃 、 易 燃 、 腐 蚀 、 有 毒 、 放 射 和 起 破 坏 作 用 的 对 人 、 环 境 有 害 的 一 切 废弃 物 。 (四 ) 危 险

32、 （ risk ） 伤 害 发 生 的 概 率 及 其 严 重 性 的 综 合 。 (五 ) 气 溶 胶 （ aerosols ） 悬 浮 于 气 体 介 质 中 的 固 态 或 液 态 微 小粒 子 （ 粒 径 一 般 为 0.001-100m） 形 成 的 相 对 稳 定 的 分 散 体 系 。 (六 ) 高 效 空 气 过 滤 器 high efficiency particulate air filter（ HEPA ） 通 常 以 滤 除 0.3m 微 粒 为 目 的 ， 滤 除 效 率 符 合相 关 要 求 的 过 滤 器 。 (七 ) 安 全 罩 （ safety hood ）

33、置 于 实 验 室 工 作 台 或 仪 器 设 备 上 的负 压 排 风 罩 ， 以 减 少 实 验 室 工 作 者 的 暴 露 危 险 ， 排 风 经 高 效 过 滤 。 (八 ) 缓 冲 间 （ buffer room ） 设 置 在 清 洁 区 、 半 污 染 区 和 污 染区 相 临 两 区 之 间 的 缓 冲 密 闭 室 ， 具 有 通 风 系 统 ， 其 两 个 门 具 有 互 锁 功 能 ，且 不 能 同 时 处 于 开 启 状 态 。 (九 ) 实 验 室 分 区 （ laboratory area ） 按 照 生 物 因 子 污 染 概 率的 大 小 ， 实 验 室 可 进

34、行 合 理 的 分 区 。(十 ) 气 锁 （ air lock ） 气 压 可 调 节 的 气 密 室 ， 用 于 连 接 气 压 不 同的 两 个 相 邻 区 域 ， 其 两 个 门 具 有 互 锁 功 能 ， 不 能 同 时 处 于 开 启 状 态 。 在实 验 室 中 用 作 特 殊 通 道 。 (十 一 ) 定 向 气 流 （ directional airflow ） 在 气 压 低 于 外 环 境大 气 压 的 实 验 室 中 ， 从 污 染 概 率 小 且 相 对 压 力 高 处 向 污 染 概 率 高 且 相 对压 力 低 处 受 控 制 流 动 的 气 流 。 (十 二 )

35、 一 级 屏 障 （ primary barrier ） 是 操 作 者 和 被 操 作 对 象之 间 的 隔 离 ， 也 称 一 级 隔 离 。 如 生 物 安 全 柜 、 个 体 防 护 装 备 等 。(十 三 ) 二 级 屏 障 （ secondary barrier ） 是 生 物 安 全 实 验 室 和外 部 环 境 的 隔 离 ， 也 称 二 级 隔 离 。 (十 四 ) 生 物 安 全 实 验 室 （ biosafety laboratory ） 通 过 防 护 屏障 和 配 套 管 理 措 施 ， 达 到 生 物 安 全 要 求 的 生 物 实 验 室 和 动 物 实 验 室

36、。 三 、 微 生 物 危 害 程 度 分 级微 生 物 按 其 是 否 致 病 、 致 病 力 强 弱 、 危 害 人 体 的 严 重 性 、 传 染 性的 大 小 、 临 近 人 群 的 抵 抗 力 、 有 无 免 疫 制 剂 和 特 效 治 疗 药 物 等 综 合 评 价 ，可 分 为 四 个 不 同 的 危 害 等 级 。 结 核 分 枝 杆 菌 属 于 3 级 危 险 。 3 级 危 险 （ 对 个 体 具 有 极 大 危 害 ， 对 群 体 具 有 较 大 的 危 害 性 ） ： 指有 特 殊 危 险 的 致 病 菌 。 感 染 后 症 状 较 重 ， 并 可 能 危 及 生 命

37、， 或 者 缺 乏 有效 的 预 防 方 法 、 发 病 后 不 易 治 疗 的 微 生 物 。实 验 室 感 染 的 原 因 及 预 防 （ 一 ） 技 术 操 作 可 能 导 致 的 感 染 及 其 预 防 措 施 。1. 接 种 ： 应 使 用 无 弹 力 的 铂 丝 接 种 环 ， 结 核 菌 接 种 后 接 种 环 火焰 灭 菌 易 崩 散 ， 酒 精 灯 烧 灼 时 要 特 别 注 意 。2. 混 匀 ： 吸 管 吸 吹 菌 液 时 不 要 产 生 气 泡 ， 应 沿 容 器 壁 排 出 。3. 研 磨 ： 最 好 使 用 组 织 研 磨 器 ， 乳 钵 易 产 生 气 溶 胶 。

38、4. 移 液 ： 吸 管 上 端 的 棉 花 松 紧 要 适 度 ， 吸 液 时 要 从 管 底 吸 取 ， 吹 出 时要 轻 缓 ， 不 要 全 部 吹 净 ， 以 免 产 生 气 泡 ， 形 成 气 溶 胶 。5. 开 封 ： 要 避 免 压 力 和 气 流 的 急 剧 变 化 。6. 离 心 ： 离 心 管 套 底 垫 要 完 好 ， 使 用 匹 配 的 管 、 套 、 离 心 头 ， 加 盖 。7. 注 射 ： 做 好 个 人 防 护 ， 正 确 使 用 注 射 器 。8. 搬 运 ： 室 内 移 动 要 避 免 滑 落 ， 移 出 室 外 要 有 坚 实 密 闭 的 外 包 装 。

39、（ 二 ） 生 物 安 全 的 制 度 措 施1. 无 生 物 安 全 3 级 实 验 室 ， 进 行 病 原 的 实 验 操 作 ， 要 在 有 缓 冲 间的 无 菌 室 内 操 作 ， 并 使 用 生 物 安 全 柜 。2. 工 作 前 后 要 用 紫 外 灯 消 毒 。3. 操 作 台 面 要 铺 湿 消 毒 巾 。4. 按 操 作 病 原 的 危 险 等 级 和 感 染 途 径 做 好 个 人 防 护 。 5. 操 作 台 附 近 要 常 备 消 毒 液 ， 污 染 物 要 放 入 密 闭 容 器 及 时 灭 菌 。6. 实 验 室 内 要 严 防 虫 、 鼠 进 入 。7. 根 据

40、需 要 对 实 验 室 工 作 人 员 进 行 免 疫 接 种 和 药 物 预 防 。8. 有 皮 肤 破 损 和 疾 患 的 人 员 不 得 操 作 3、 4 级 危 险 性 病 原 。 生 物 安 全 保 障 （ 一 ） 建 筑 结 构 保 障 生 物 安 全 3 级 实 验 室1. 结 核 分 枝 杆 菌 属 于 生 物 危 害 3 级 的 微 生 物 ， 进 行 活 病 原 （ 培养 物 或 感 染 标 本 ） 操 作 时 ， 应 使 用 本 级 别 实 验 室 。2. 实 验 室 建 筑 设 备 要 求 ： 双 层 门 或 有 气 幕 的 出 入 口 ； 实 验 室 表 面可 洗 刷

41、 、 消 毒 ； 由 上 至 下 的 气 流 方 向 ； 排 气 经 高 效 滤 器 ； 窗 户 密 闭 、 工作 区 可 防 一 切 蚊 虫 进 入 。3. 工 作 制 度 要 求 ： 非 工 作 人 员 不 得 进 入 ； 使 用 实 验 室 专 用 工 作 服 、鞋 ； 排 水 经 无 害 化 处 理 ； 搬 出 物 品 要 求 要 灭 菌 或 密 闭 包 装 ； 实 验 室 内 禁止 进 食 饮 水 。 （ 二 ） 装 备 保 障1. 生 物 安 全 柜一 级 生 物 安 全 柜 ： 由 外 向 内 的 单 向 气 流 ， 只 保 护 人 体 ， 不 能 保 护实 验 材 料 。 可

42、用 于 痰 涂 片 操 作 。二 级 生 物 安 全 柜 ： 有 向 内 气 流 和 经 高 效 滤 器 的 垂 直 气 流 ， 可 保 护人 体 和 实 验 材 料 不 受 污 染 。 用 于 病 原 分 离 、 培 养 。2. 高 压 灭 菌 器 ： 运 行 状 态 良 好 。3. 消 毒 防 护 物 品 等 。 （ 三 ） 技 术 保 障1. 双 人 原 则 ， 不 允 许 单 人 操 作 1、 2 类 病 原 。2. 入 口 处 应 有 危 险 警 示 标 识 ， 并 标 明 所 操 作 的 微 生 物 的 种 类 。3. 培 训 考 核 上 岗 ， 掌 握 相 关 技 术 操 作 要

43、 领 ， 熟 悉 规 章 制 度 ， 适 应 工作 环 境 。4. 完 备 的 管 理 措 施 ， 技 术 操 作 规 范 。5. 良 好 的 工 作 行 为 可 降 低 生 物 危 害 风 险 。 六 、 实 验 室 生 物 安 全 水 平 分 级(一 ) 根 据 所 操 作 的 生 物 因 子 的 危 害 程 度 和 采 取 的 防 护 措 施 ， 将 实 验室 生 物 安 全 防 护 水 平 （ biosafety level， BSL） 分 为 4 级 ， 级 防 护水 平 最 低 ， 4 级 防 护 水 平 最 高 。(二 ) 以 BSL-1、 BSL-2、 BSL-3、 BSL-4

44、 表 示 实 验 室 的 相 应 生 物 安全 防 护 水 平 。(三 ) 以 ABSL-1、 ABSL-2、 ABSL-3、 ABSL-4 表 示 动 物 实 验 室 的 相应 生 物 安 全 防 护 水 平 。 七 、 实 验 室 管 理 制 度(一 ) 实 验 室 管 理 规 章 制 度 ： 包 括 培 训 制 度 、 准 入 制 度 、 健 康 监 测 报告 制 度 、 个 人 良 好 行 为 制 度 、 意 外 事 故 报 告 制 度 等 。(二 ) 标 准 操 作 程 序 ： 包 括 实 验 废 弃 物 处 置 标 准 操 作 程 序 、 进 出 实 验室 标 准 程 序 、 菌 毒 种 使 用 标 准 操 作 程 序 、 实 验 室 消 毒 标 准 操 作 程 序 、 意外 事 故 处 理 标 准 操 作 程 序 及 各 种 仪 器 设 备 和 实 验 标 准 操 作 程 序 等 。结 核 病 实 验 室 安 全 防 护 各 级 结 核 病 细 菌 学 实 验 室 必 须 对 工 作 人 员 给 予 充 分 保 护 ， 同 时 控制 对 环 境 造 成 的 污 染 。 在 实 验 室 从 事 试 验 或 工 作 的 人 员 ， 应 当 了 解 可 能