细胞信号通路检测(一)总蛋白提取,病理生理学教研室,背景知识,背景知识,蛋白质表达水平和细胞内定位研究,信号蛋白分子表达水平及分子量检测Western Blot analysis信号蛋白分子在细胞内定位研究IMMUNOHISTOCHEMISTRY/IMMUNOCYTOCHEMISRYIMMUNOFLUORESCENCE (IF)GREEN FLUORESCENT PROTEIN (GFP, LIVE CELLS),实验方法、流程,细胞培养细胞总蛋白提取（本次实验内容）WB 检测信号通路相关蛋白表达,实验材料,HepG2肝癌细胞，细胞培养皿，细胞刮，RIPA裂解液，PBS，低温离心机，冰盒，EP管，移液器,操作步骤,弃去细胞培养基，4预冷的PBS清洗细胞1次留适量PBS（一般为1ml，大皿可酌情增加）刮取细胞，12000rpm 4离心2min，去除上清液。向细胞沉淀中加入适量RIPA蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂）轻吹充分混匀，放置冰上裂解30min（每隔5min涡旋混匀一次）4 14000rpm离心10min，收集上清至新的EP管中即为蛋白样品紫外-可见光分光光度计检测蛋白浓度-20 保存,讨论,为了更好的观测信号通路的活化，蛋白操作过程中应注意哪些问题？为何使用WB方法可以检测信号通路的活化？,
