1、中草药添加剂在水产饲料中的研究进展水生生物学实验室第四期读书报告,报告人：王小娜指导老师：赵玉蓉,报告内容：,一、中草药添加剂在水产饲料中的研究进展二、实验安排及部分实验用中草药的功效简介三、目前的实验进展（已测定完成的指标）四、后续工作,一、中草药添加剂在水产饲料中的研究进展,Concept,Concept,中草药作为饲料添加剂中的绿色产品，具有天然、高效、毒副作用小，抗药性不显著、资源丰富以及性能多样性等特点。在提高动物生产性能和饲料利用率的同时，又能充分保证人体的健康，兼有药性和营养性双重作用，是化学合成饲料添加剂不可比拟的。因此，以中草药替代抗生素的添加剂将越来越受到人们的关注，它的应
2、用也会更加广泛。,中草药添加剂是由不同性味功能的中草药根据中兽医学和现代营养学理论配制而成，由于其种类繁多，结构复杂，成分多样，因此，不同的中草药添加剂其作用也不相同。有研究表明，中草药不但含有大量的生物碱、挥发油、苷类、有机酸、鞣质、多糖及多种免疫活性物质和一些未知的促生长活性物质，还含有一定量的蛋白质、氨基酸、糖类、矿物质、维生素、油脂、植物色素等营养物质。这些成分可以促进机体代谢和蛋白质及酶的合成，从而加速水产动物的生长发育，提高饵料转化率，增强体质，降低发病率和死亡率。,1、中草药添加剂的作用(1)提高生产性能，降低饵料系数水产动物同其它动物一样，对饵料的色，香、味等都有感官上的要求。
3、为了促进动物的采食，提高生产性能及饵料利用率、缩短养殖周期，有必要在饲料中添加一些这方面的物质。陈斐等于1991年在鲤鱼的饲料中添加2%的含有蒲公英，仓术、茴香等10多种中草药配伍的添加剂，但多种维生素的添加量小于常量，对鲤鱼的生长和产量没有影响，说明中草药含有比较丰富的维生素。,(2)增强体质，防治疾病由于中草药本身具有消除和抑制自由基的生成及提高自由基酶类活性的作用，并含有各种微量元素，因此对防治疾病有一定的效果。掘报道，有200多种中草药有杀菌、抑菌作用;有130多种中草药能抗菌;有50多种中草药对病毒有灭活或抑制作用。,(3)改善水产品的品质根据资料记载，鱼、虾长期摄食含有大蒜粉的饵料
4、，其肉质变得细嫩，肉味更香浓。日本大学药学部高桥教授用加入2.5%杜仲粉末(中国产)的混合饲料喂养鳝鱼，结果鳝鱼蛋白胶厚度得到改善，肉质烹调后味道可与野生鳝鱼媲美。冀献民用杜仲喂鳗鱼，发现鱼体肌肉细嫩、味番、脂肪含量适中，高级不饱和脂肪酸含量较多。,(4)其它一些作用中草药除具有上述作用外，还具有：诱食作用：童圣英等于1998年报道，山楂含有大量的有机酸，对皱纹盘鲍具有明显的诱食作用;实验证明，黄柏、绣球等对平均体长为8.Ocm的泥鳅有诱食作用;饲料中含0.25%陈皮的饲料对草鱼的诱食效率最高，草鱼咬饵次数和啄咬力分别为对照组的7.25倍和2.1倍。防毒防腐作用：草药中的香辛料及其精油中含有的
5、抗菌成分，有不同程度的抗菌效力，特别是与化学防腐剂合用，其效果更佳，且不会影响水产动物的摄食。,2、中草药在应用中存在的问题(1)科学配伍在进行中草药配方设计时要考虑：中草药的十八反、十九畏的条件性配伍，特别是维生素、微量元素、氨基酸等营养物质之间的协同与拮抗作用;根据动物不同生长阶段、养殖条件及季节，适时进行配方调整，以满足动物不同状态的需要;由于产地、季节、炮制方法等因素不同，同一种中草药其成品的性能也会有所差异，出现同样的配方却产生不同效果，故要注意稳定药材的质量。,(2)改进加工工艺加工方法。目前中草药添加剂大多以原料粉碎后搅拌而成，这对于用量较大而有效成分较低的根皮类等木质化程度较高
6、的中草药来说，要保证其药效，就必须大剂量的添加，这就增大了中草药在日粮中的含量，其结果：一方面导致鱼、虾在同等摄食量的情况下摄入的营养物质相对不足，另一方面也会破坏饲料的适口性，使水产动物的采食量减少，直接影响动物的正常生长。加工的粉末大小与其有效成分的释出及动物的吸收也有很大关系。为了提高中草药的效果，应采取先进的生产工艺(如浸提技术)，向微量化、专用型方向发展，这样既可保证其药效，又不影响日粮的营养水平。,3、中草药添加剂的发展前景我国中草药资源十分丰富，而且多生长于深山荒野，无农药污染，利用方便。由于中草药有较好的防治疾病及一定的营养作用，对提高动物的生产性能和改善产品品质均有很好的效果
7、，且对人类健康无危害，所以认为其性能优于化学添加剂。由于中草药的成分复杂，功效多样，因此要应用现代科学技术手段，加强单味中草药和配伍性能的研究，尤其是在进行中草药添加剂配伍时，既要考虑动物防病治病的作用，又要考虑其营养保健作用。制定规范的中草药添加剂的产品标准化，使相关的生产和研究有章可循。另外，做添加剂的中草药应选用不与人用的珍贵药材(如人参)竞争的廉价资源，否则就会增大成本，降低经济效益。,二、实验安排及部分实验用中草药的功效简介,“不同配伍的中草药对鲫鱼生产性能的影响”实验，设计了五个不同的中草药配伍，其作用有降脂、促生长、抗感染、提高免疫力等，旨在筛选出效果最好的一组配方，应用于以后的
8、生产研究。五个中草药配伍即为五个处理，每个处理设3个重复，水循环养殖系统养殖8周之后，取样对其生长、免疫等生理生化指标进行测定。,2010年7月11月 养殖实验2010年11月2011年1月 分析实验2011年1月3月 实验数据分析及文章的撰写,1、茯苓：增强机体免疫功能，茯苓多糖有明显的抗肿瘤及保肝脏作用。2、熟地：对骨髓造血系统、免疫系统均有一定的影响。3、牡丹皮：抗炎、抑菌及免疫增强等作用。4、山茱萸：对体液免疫有促进作用，可加速血清抗体IgG、IgM形成。另外，还具有抗炎、抗菌、抗应激、抗氧化等功效。5、泽泻：降血脂、保护肝脏。6、山药：具有促进干扰素生成和增加T 细胞数的作用。,7、
9、车前草：具有抗病原微生物作用，对甲醛及右旋糖酐引起的炎性水肿, 有明显的抑制作用。8、苎麻叶：散瘀消肿；解毒 。9、忍冬藤：抗菌、抗炎。10、黄芪：增强机体免疫功能、增强造血功能，改善物质代谢、增强性腺功能、抗应激、延缓衰老等作用。黄芪还具有保肝、抗溃疡等作用。黄芪多糖和黄芪皂苷是其主要有效成分。11、党参：调整消化系统功能、抗溃疡。增强机体免疫功能、增强造血功能、抗应激、抑制血小板聚集等作用。,12、首乌：促进造血功能、增强免疫功能、降低血脂、保肝、调节内分泌、对消化系统也具有一定的调节作用。13、夏枯草：对痢疾杆菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌和葡萄球菌、链球菌有抑制作
10、用，抗菌谱较广。14、冬瓜皮：富含蛋白质、糖类、维生素C。,15、决明子：抗菌、降血脂、抗血小板凝集。16、车前子：降低胆固醇含量。17、山楂：降血脂。18、麦芽：助消化、降血糖、抗真菌。19、麦冬：提高动物的耐缺氧能力，调节消化系统功能。20、绿茶：降脂助消化、抗菌解毒。21、荷叶：荷叶中的生物碱有降血脂作用，,三、目前的实验进展（已测定的指标）,1、免疫器官的重量1.1 头肾体指数头肾体指数= (头肾重量/体重) 100%测算方法: 先称量鱼体重, 然后断尾放血摘取头肾, 生理盐水稍加冲洗, 吸水纸吸干表面水分,立即称重, 根据记录数据上式计算。1.2 脾脏体指数脾脏体指数= (脾脏重量/
11、体重) 100%测算方法与同头肾体指数相同。,2、免疫细胞的活性检测2.1 红、白细胞计数红、白细胞的数量能够反映机体的免疫水平。红细胞稀释液：NaCl 0.5gNa2SO4 2.5gHgCl2 0.25蒸馏水加至100ml计数红细胞时，10微升的抗凝血用红细胞稀释液稀释200倍后计数。红细胞数5个中方格的中细胞数的和50稀释倍数（个/mm3）,白细胞稀释液： 冰醋酸 1.5ml 1%龙胆紫 1ml蒸馏水加至100ml计数白细胞时，稀释400倍后计数（具体稀释倍数要根据预实验的经验来确定）。白细胞数4个大方格数中细胞数的和2.5稀释倍数（个/mm3）,2.2 白细胞吞噬指数和吞噬百分比白细胞的
12、吞噬活性与机体免疫状况密切相关, 为非特异性免疫重要指标。白细胞吞噬指数( PI) = 100个多核型白细胞中含菌总数/100吞噬百分比( PP) = 100个吞噬细胞中参与吞噬的细胞数/100) （1）吞噬源的制备将酵母菌接种在YPD液体培养基中，2830震荡培养48小时，离心集菌后，高温灭活（加热至80以上），最后将其浓度调整至1.0108cells/ml（麦氏比浊法），备用。,（2）吞噬活性的测定0.2ml抗凝血中加入0.1ml吞噬源，摇匀，在28的恒温水浴锅中孵育45min，每隔10min摇动一次。取一滴全血-酵母菌混合液于洁净的载玻片上，推成薄血片，每个样品3张，自然晾干后，加瑞氏-
13、姬姆萨染液的A液400微升，染色1min，然后滴加B液800微升，让其覆盖于A液之上，后用洗耳球将A、B两液吹匀，染色815分钟，用蒸馏水洗去玻片上的染色液，自然晾干，用油镜观察记录结果。,2.3 白细胞分类计数 有颗粒细胞白细胞 无颗粒细胞,淋巴细胞,嗜中性粒细胞,单核细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,1、 血液、体液免疫成分检测除了免疫细胞的活性之外，鱼体内其他一些指标的变化也能够反映其免疫状况。如血清中的抗体效价，血清溶菌酶（LSZ）的活性、碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性、超氧化物歧化酶（SOD）、酚氧化酶（MPO）、血清补体活性等等都可以作为评价鱼体免疫功能的指标。,四
14、、后续工作,其中，溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。,高等动物的酸性磷酸酶（ACP）作为体内巨噬细胞溶酶体的标志酶, 在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢, 主要存在于各脏器、血细胞和骨髓中。在鱼类免疫研究中, 也测定组织器官或血清中的磷酸酶活性。磷酸苯二钠法测定组织或血
15、清中AKP或ACP活力, 定义为1 g组织蛋白或100mL血清在37 e 与底物作用15 min产生1mg酚为单位。,超氧化物歧化酶（SOD）活性与机体免疫水平密切相关, 对于增强巨噬细胞的防御功能和整个机体的免疫机能有重要作用, 常作为机体非特异免疫功能指标。SOD活力定义为: 1 mL 反应液中SOD抑制率达50% 时所对应的SOD的量为1个亚硝酸盐单位。根据试验需要, 可以分别检测总SOD(T2SOD)、铜锌SOD ( ZnCu2SOD)和锰SOD(Mn2SOD）等。,补体是一类存在于人和脊椎动物血清中协助免疫反应的一组血清蛋白质。可被抗原-抗体复合物或微生物所激活，导致病原微生物裂解或被吞噬。 C3是补体系统的主要成分之一, 可以通过经典或旁路途径激活。在盛有0. 5 mL 致敏羊红细胞( SRBC)的试管中, 加入0. 5 mL 鱼血清(空白对照组加入0. 85% 的NaCl溶液, 全溶对照组加入0. 04%氨溶液), 使血清的终浓度为3% ; 置于培养箱中38 e 孵育60 min, 然后经2 000 r/ m in离心10 min, 取上清液, 用紫外可见分光光度计在541 nm下测光密度值(A)。,Thank you for your attention!,
