1、外周血造血干细胞动员采集 138 例临床分析邓琳，王红祥武汉市中心医院，血液科，武汉，430014摘 要:目的 研究影响外周血干细胞动员以及采集因素。方法 30 例血液病患者予以化疗+粒细胞集落刺激因子 (G-CSF)动员，12 例健康供者以及 96 例糖尿病周围血管病患者予以 G-CSF 动员。使用 Cobe Spectra 血细胞分离机( 美国 Cobe 公司) 进行外周造血干细胞采集，对不同疾病、一般特征及供者的动员采集效果进行分析。结果 所有患者均成功动员采集，健康供者采集所获得 CD34+细胞数优于糖尿病周围血管病患者，具有统计学差异。供者性别，年龄对 MNC 数以及 CD34+细胞
2、数无影响，BMI 、G-CSF 的剂量与 MNC 数成正相关，TG、HbA 1C以及 LDL-C 与 CD 34+细胞数呈负相关。无论是健康供者、糖尿病周围血管病患者以及恶性血液病患者，动员采集过程中不良反应较小。结论 根据不同的疾病、性别、年龄、采用不同的动员采集方案，一般可以成功采集。关键词：造血干细胞采集；糖尿病周血管病；采集中图分类号：R457.1，R457.7 文献标志码：AClinical analysis on mobilization and collection of peripheral hematopoietic stem cellsDeng lin,Wang hong
3、xiangDepartment of Hematology, Wuhan Central Hospital,wuhan 430014,chinaAbatract :Objective To investigate the factors impacting on effect of mobilization and collection of peripheral hematopoietic stem cells. Methods The records of 138 persons (30 patients of malignant hemopathy and 12 heathy donor
4、s and 96 patients of diabetic peripheral vascular disease)were retro spectively reviewed. CD34+ cell mobilization was done with chemotherapy +granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in the patients of malignant hemopathy and G-CSF alone in the heathy donors and the patients of diabetic periphe
5、ral vascular disease. Peripheral blood stem cells were harvested with Cobe Spectra. The result of mobilizatin and collection for different diseases , age , sex and donor was analyzed. Results All cases were successful in mobilization and collection. The result of CD34+ cell collection of the heathy
6、donors was better than that of the patients of diabetic peripheral vascular disease, there was significant difference between the patients of diabetic peripheral vascular disease and the heathy donors. Sex and age of donor had no effect on,MNC and CD 34+ cells collection .BMI and G-CSF dose was posi
7、tively correlated with the MNC cell collection, TG and HbA1C and LDL-C was negatively correlated with CD 34 + cells collection.Adverse effect was little in the course.Conclusion It can successfully collect peripheral hematopoietic stem cells with different protocol according to different dieases , s
8、ex and age.Key words:peripheral blood stem cell transplantation ( PBSCT) ；collection ；mobilization ；transplantation0 引言近年来，外周血造血干细胞移植发展迅速并广泛应用于临床，是治疗多种血液病和实体瘤的有效方法，也越来越广泛应用于糖尿病下肢缺血性病变治疗中。外周血干细胞移植治疗糖尿病周围血管病变中发挥作用的是血管内皮祖细胞（endothlial progenitor cell，EPC ） 1-2，抗原 CD34 是 EPC 特征性表面标志 3。由于干细胞移植能够促使糖尿病足患者新
9、生血管的形成，改善肢体缺血，减少截肢率，提高患者的生活质量，因此具有广泛的应用前景。本文分析了我院自 2005 年 6 月至 2009 年 12 月 96 名糖尿病周围血管病患者、12 例健康供者以及 30 例血液病患者造血干细胞的动员和采集的资料，探讨外周血造血干细胞动员采集效率、安全性及部分影响因素，现报道如下。1 对象与方法1.1 对象 选取 2005 年 6 月-2009 年 12 月在我科进行外周血造血干细胞采集的患者，分为三组：血液病患者组：30 例血液病成人患者，其中急性髓细胞性白血病 8 例，急性淋巴细胞白血病 6 例，非何杰金淋巴瘤 7 例，多发性骨髓瘤患者 5 例，慢性粒细
10、胞白血病患者 4 例，年龄 1761 岁，平均年龄 (31.53 11.07)岁；正常供者 (donor)组（志愿者和患者同胞）12 例，年龄 23-53 岁，平均年龄 (31.53 11.07)岁；糖尿病周围血管病变患者组 96 例，年龄 44-89 岁，平均年龄 (68.5413.07)岁。1.2 PBSC 动员 血液病患者组于骨髓细胞学完全缓解后接受化疗+粒细胞集落刺激因子外周血干细胞动员，化疗后第 6 天起予以皮下注射 G-CSF510gkg -1d-1 动员。正常供者组以及糖尿病周围血管病患者组，无外周血造血干细胞动员反指征条件下皮下注射G-CSF510gkg -1d-1 动员。1.
11、3 PBSC 采集 采用 Cobe Spectra 血细胞分离机（美国 Cobe 公司）的 Auto-PBSC 程序单采，处理血量为总血容量的 23 倍，每次循环血量 8000 - 14000ml，流速为 3565ml/ min，以 ACD 液为抗凝剂，流速与血流比为(1013) 1，单次采集物容积在 50120ml 之间。口服 5 %葡萄糖酸钙液及静脉推注 10 %葡萄糖酸钙，以预防枸橼酸钠中毒，密切观察不良反应。取混匀后的采集物少量悬液计数单个核细胞数 (MNC )、CD34 +细胞数，并计算每次产物 MNC 和 CD 34+细胞的采集总量。1.4 比较不同年龄、疾病、性别、体重、BMI、
12、动员方案、糖化血红蛋白、尿酸以及甘油三酯、LDL-C 对患者 PBSC 动员采集效果的影响，同时观察动员和采集过程中的不良反应。1.5 统计学处理 计量资料以均值 标准差 ( X SD )进行描述,计数资料以百分比进行描述。单因素分析采用相关分析、 方差分析、 Kruskal-Wallis 检验或卡方检验。因变量为计量资料的多因素分析采用多元线性回归分析，为二分类资料的多因素分析采用 Logistic回归模型。使用 SPSS13 . 0 软件进行分析，以 p 0. 05) ；健康供者在采集所获得的 MNC 和 CD34+细胞数均优于糖尿病周围血管病患者，前者比较差异无统计学意义( P 0. 0
13、5)，见表 1。表 1 不同供者组采集效果n采集物 MNC (108/kg)采集物 CD34+ (106/kg)血液病患者 30 5.963.27 4.402.45健康供者 12 6.682.12 5.102.18*糖尿病周围血管病患者 96 5.193.58 2.123.26*与 *比较，P0.05。2.2 影响外周血干细胞采集的相关因素分析 我们分别对供者性别、 年龄、 体重、BM I、动员剂剂量、糖化血红蛋白、TG、UA 、LDL-C、采集前白细胞计数等因素与第 1 次单采产物的 MNC 数和 CD34+细胞数的影响进行了相关性分析，结果显示供者性别、年龄对 MNC 数以及 CD34+细
14、胞数无影响 (p = 0 .436 及 0 .228)。G-CSF 的剂量对 MNC 数成正相关， G-CSF 剂量越大，采集产物中 MNC 量越多 ( p = 0 . 001)。TG、LDL-C 对 MNC 数成负相关 ( p = 0 . 232 及 0 . 228)。供者体重、BM I、每日皮下注射 G-CSF 的剂量对 CD34+细胞数均成正相关,糖化血红蛋白、TG、UA 、LDL-C 对 CD34+细胞数均成负相关 (p 0 . 05) (表 2)。表 2 CD34+细胞数单变量相关因素分析相关因素 r p性别 -0.153 0.058年龄 -0.058 0.061体重 0.223 0
15、.002BMI 0.287 0.0012G-CSF 0.159 0.001LDL-C -0.587 0.031HbA1C -0.687 0.0035UA -0.056 0.054TG -0.524 0.032采集前 WBC 计数 0.46 0.0039BMI=体重/身高 2为同时分析多个因素对 MNC 数及 CD 34+细胞数的影响，经过变量筛选后 (取 p = 0 . 05显著性水平 ) 进行了多因素分析。结果显示，供者 BM I、TG 对采集的 MNC 总数有影响，p 值为 0.002 和 0.028 ，回归系数分别为 0.159 和 -0.639。这两个因素也是对采集的 CD34+细胞数
16、的影响因素 (p 值分别 0.0007 和 0.0012) (回归系数 0.245 和 0 .689)。HbA 1C以及 LDL-C 与 CD34+细胞数呈负相关。经多因素分析筛选变量，动员剂的剂量、采集前白细胞计数与单采产物 MNC 总数和 CD34+细胞数关系不密切 (前者 p=0.69 和 0.54；后者 p =0.32 和 0.146)，(表 3)。表 3 CD34+细胞数多元回归分析多元因素 pBMI 0.245 0.007G-CSF 0.171 0.32TG -0.689 0.012HbA1C -0.549 0.001采集前 WBC 计数 0.236 0.146LDL-C -0.4
17、87 0.022BMI=体重/身高 22.3 PBSC 动员过程中的不良反应 26 例出现骨骼疼痛，6 例出现发热，最高体温 38.5 ，6 例恶心，32 例头胀; 1 例出现鼻塞、流涕、头痛的流感样症状。2.4 PBSC 采集过程中的不良反应 76 例出现口周、 指尖麻木；3 例出现胸闷、 心慌；2 例出现轻度呕吐。3 讨 论外周血干细胞移植治疗恶性血液病以及糖尿病周围血管病已经广泛运用于临床，能否采集到足够的外周血干细胞是移植成功的前提和关键。目前对干细胞的动员采集的研究较多，但这些主要是针对单一因素进行研究或分析。本文对不同疾病、 年龄、 性别及供者的体重、BMI、TG、HbA 1C、
18、LDL-C 以及采集前白细胞计数与 MNC 细胞计数和 CD 34+细胞数动员采集效果进行分析。糖尿病患者常出现长期的血糖和血脂代谢紊乱，易导致血管内皮细胞和基底膜损害，形成糖尿病血管并发症。赵湜等 4的研究证实 EPC 数量与糖化血红蛋白水品呈负相关；袁红等 5报道高糖可减少 EPC 数量、抑制其功能，并呈浓度和时间依赖性。本研究显示糖化血红蛋白与 CD34+细胞数呈负相关，其原因考虑为长期高血糖使糖基化终末常务产生增加，增强氧化应激，促进炎症的发生，促进血凝，从而促进动脉粥样硬化，造成血管内皮细胞损伤，增加 EPC 消耗，动脉粥样硬化导致 EPC 功能减退、增殖受抑制。本研究也显示TG、L
19、DL-C 与 CD34+细胞数呈负相关，即 TG、LDL-C 越高则采集物 CD34+细胞计数越低。朱军慧等 6研究证实，高胆固醇血症患者外周血内皮祖细胞数量减少，其增殖、迁移和粘附功能明显受损。Imanishi 等 7研究发现 LDL-C 的中间代谢产物氧化 LDL-C 可以通过氧化应激损伤直接导致 EPC 细胞凋亡，并引起细胞功能减退。 2 型糖尿病合并周围血管病患者HbA1C水平明显增高、合并脂代谢紊乱可导致自体外周血干细胞采集物 CD34+ 细胞数低于健康供者。我们通过多因素分析，筛选出 BMI 与采集产物中 MNC 细胞数及 CD 34+细胞数有关，供者 BMI 越高，动员后所收获细
20、胞数越多，但供者体重与细胞数关系不大。国外文献有报道,超重供者经 G-CSF 动员后可以获得更多的外周血造血干细胞 8-10，其机制不明。Waples等 10 认为可能与超重供者对 G-CSF 的代谢与非超重人群不同有关。供者 BMI 与采集效果的关系尚需进一步研究。外周血造血干细胞采集不良反应主要表现为枸橼酸盐中毒 (口角、四肢麻木等 )、心慌、气短、眩晕、呕吐、呼吸困难及穿刺处血肿、感染等，本组通过缓解供者紧张心理及规范操作，采集前常规静脉注射葡萄糖酸钙，采集中视供者状况口服葡萄糖酸钙，均未出现枸橼酸中毒及其他不良反应。由此可见外周血造血干细胞的采集安全性较高，而且使不能进行骨髓采集的患者
21、也可从外周血采集造血干细胞，扩大了干细胞治疗范围。总之，外周血干细胞的动员采集受多种因素影响 13，14 ，只要我们根据不同的疾病、 性别、 年龄，采用不同的动员采集方案及处理措施，一般可以成功采集，希望藉此对造血干细胞动员采集相关因素分析，提高采集物 CD34+细胞计数，增大移植成功的几率。4 参考文献：1 Hunting CB，Noort WA，Zwaginga JJ.Circulating endothelial (progenitor) cells reflect the state of the endothelium:vascular injury,repair and neova
22、scularizationJ.Vox Sang,2005,88(1):1-9.2 赵湜，王红祥，毛红，等。内皮祖细胞和单个核细胞移植对糖尿病大鼠血管病变的比较J.中国糖尿病杂志，2007 ，15（4）：243-245.3 Gehling UM，Ergun S,Schumacher U,et al.In vitro differentiation of endothelial cells from AC133-positive progenitor cellsJ.Blood，2000，95（10）：3106-3112.4 赵湜，王红祥，李宾公，等.糖尿病周围血管病血管内皮祖细胞数量和功能的改变及
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24、sfunctionJ.Clin Exp Pharmacol Physiol,2004,31(7)：407-413.8 Engelhardt M,，Bertz H,，Wasch R，et al.Analysis of stem cell apheresis p roducts using intermediate-dose filgrastim plus large volume apheresis for allogeneic transp lantationJ.Ann Hematol，2001，80（8）：201 208.9 Beelen DW，Ottinger H，Kolbe K，et a
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