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浮游菌（Airborne Microbe）,讲解目录,,,,,,工作流程,备料单,,1,2,3,4,5,,6,,此处添加目录标题,,7,,菌落计数,洁净室污染源,浮游菌,表面菌,培养基成分,接受指令,结果观察、记录,填写记录
写报告,,,,,,,,采样,,菌落计数,恒温箱培养,,制作平板,灭菌,备料,制定计划,查阅依据,,,工作流程,备料单,平皿 2套
消毒剂(75%酒精)
采样仪
棉花
镊子
大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)15~20ml/皿X2,污染物种类,通常所指的空气污染物主要有以下三类
悬浮在空气中的固态、液态微粒
霉菌、致病菌等悬浮在空气中的微生物；
各种对人体或生产过程有害的气体。
由于空气净化的目的与对象不同，净化的内容、方法和衡量标准也不同。以洁净室为对象的空气净化的目的，就是最大可能地把空气介质中的悬浮微粒除掉，对于生物洁净室，还要控制有生命微粒。,2.2 污染物传播途径,危害生产工艺的主要污染源主要有：
①人员；②送风；③机器及其他生产设备；
④原材料与经过加工的原材料；⑤包装材料；
⑥生产工艺用各种介质及洁净用化学品；
⑦服装与其他设备中的纺织物；
⑧办公设备与办公材料；⑨参观人员；
⑩维修人员，特别是那些来自洁净区外部的人员。
与产品接触的污染物有两种来源
生产工艺之内产生；
从外部环境传入生产环境之中。,污染源,洁净室污染源
新风带入的尘粒和微生物；
作业人员发尘和散菌；
建筑围护结构、设施的产尘；
设备及产品生产过程的产尘。,室内空气的主要污染物质,人体各部位的带菌数,着无菌服时的人体散发细菌量,GB/T 16293－1996
洁净室（区）clean room (area) 对尘粒
及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区
域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对
该区域内污染源的介质、产生和滞留的功能。
洁净室的定义
洁净室是指空气洁净度达到规定级别的可供工作的空间。其功能是控制各种微粒（主要是尘埃粒子）的污染，来达到满足精密产品的生产与科学实验活动。洁净室绝不是仅限于“洁净”，不同的行业与部门对温度、湿度、照明、噪声、静电、微振都有相当要求，是集建筑装饰（与大气相对隔断的密闭装修）、净化空调、动力电、照明电、工艺管道等多种专业技术于一体的多功能的综合整体产物.,,浮游菌（Airborne Microbe）,悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。,本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中
浮游菌测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，
无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的浮游
菌的测定和环境的验证。,参考标准：,2.4 洁净室分类,2.4.1 按用途分类
工业洁净室；
生物洁净室
一般生物洁净室；生物安全洁净室。
2.4.2 按气流流型分类
单向气流洁净室；
非单向流洁净室；
混合流洁净室；
辐（矢）流洁净室。,,采样器原理
撞击法 impacting method
撞击式空气微生物采样器采样，
通过抽气动力作用，使空气通过狭缝
或小孔而产生高速气流，从而使悬浮
在空气中的带菌粒子撞击到琼脂平板
上，经 35 ℃ ，48 h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。,最小采样量,采样点的位置,采样点位置可以同悬浮粒子测试点。
工作区测点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。
送风口测点位置离开送风面30cm左右。
可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。
采样注意事项
对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。
布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上
采样时，测试人员应站在采样口的下风侧,并尽量少走动
采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。,,,,,,,,,采样点布置,,,,,,,,,,,,,,,,,,,台,台,台,,阴性对照,台,,采样超净台,每个测点的浮游菌平均浓度的计算,浮游菌平均浓度（个/m³）=菌落数/采样量
示例1：某测点采样量为400L,菌落数为1，则：
浮游菌平局浓度=1/0.4=2.5个/m³
示例2：某测点采样量为2m³，菌落数为3，则：
浮游菌平局浓度=3/2=1.5个/m³,测试规则,测试条件
在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供悬浮粒子的环境条件，例如：这种预先测试可包括：
温度和相对湿度的测试，洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时），温度在18℃~26℃，相对湿度在45%~65%为宜
室内送风量或风速的测试，或压差的测试
高效过滤器的泄漏测试,GB/T 16293－1996
单向流unidirectional air flow（曾称
为层流laminar flow）沿着平行流线，以
单一通路以一定流速向单一方向流动的
气流。,,GB/T 16293－1996
3.9 非单向流nonunidirectional air flow
（曾称为乱流turbulent flow） 具有多
个通路循环特性或气流方向不平行的，
不满足单向流定义的气流。,大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）,酪蛋白胰酶消化物 15g 提供氮源、维生素和生长因子
大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 提供氮源、维生素和生长因子
氯化钠 5g 调节渗透压
琼脂 15g 凝固剂
纯化水 1000mL,30℃~35℃,48h,测试步骤,测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。
采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。
用消毒剂擦净培养皿的外表面。
采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。
采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。
采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
狭缝式采样器的采样程序
仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。
关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。
置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。,沉降菌和浮游菌的区别是什么？
只是捕捉时的形态差异。
沉降菌指落在地面或物体表面的灰尘中携带的细菌；
浮游菌指在空气中漂浮的尘埃所携带的细菌 。
见相关国家标准
沉降菌 GB/T 16294-2010
浮游菌 GB/T 16293-2010,表面菌,附在人体表皮或设备表面的微生物,接受指令,结果观察、记录,填写记录
写报告,,,,,,,,采样与制作平板,,菌落计数,恒温箱培养,,实验准备,灭菌,备料,制定计划,查阅依据,,,工作流程,,,,,,查阅依据：,表面微生物,微 生 物 在表面附着的程度受表面特性、微生物自身和存在的其他材料(如润滑剂)的影响。污染源也会影响到附着程度。
为获取微生物，所进行的处理包括漂洗(同时施以物理力)或直接表面取样。表面活性剂可以用于提高回收，但应认识到，较高浓度的表面活性剂可能会抑制微生物
在 相 当 一部分材料中，有些微生物可能以生物膜的形式出现，在生物膜的结构中，微生物在牢固附着于材料表面上的被囊状包围。生物膜状微生物可能会表现更强的抗灭菌性,采样方法：
袋蠕动
超声洗脱
搅动(带或不带玻琅珠)
涡旋式混合
冲洗
搅切(碎解)
擦拭
一步到位型
接触板 、 琼脂覆盖,擦拭
含有可吸收取样材料的棉拭子通常被固定于杆或把手上。样品材料是不是可溶性的都行。
通常的使用方法是用缓冲液或液体培养基湿润棉拭，用棉拭擦拭界定好的取样表面。在有些情况下，可以先湿润样品表面，然后用干棉拭擦拭，这样可以提高回收效率。随后将棉拭放至缓冲溶液或液体培养基中，并搅动以从棉拭上取下微生物。另外，有时也可用可溶性棉拭，使棉拭溶解于缓冲液或液体培养基中。则用过滤、平板计数或其他方法分析所得到的悬液,擦拭 是 从不规则形状产品或相对难以接近的区域取样的有效方法，该方法对取样面积必须大时也有效
但 该 方 法因擦拭方式的不同而更易出错。而且，通过擦拭不太可能将样品上所有的微生物都收集到。有些微生物可能会被棉拭本身吸附，从而不会被测到。
棉 拭 中 不应有微生物杀灭剂或微生物抑制剂,在 生 物 负载估计过程中，洗脱液可用于从产品上取下微生物;传送培养基可用于将取下的微生物移去计数;稀释液可用于获得含有可计数微生物的悬液。
洗 脱 液 和稀释液的特性对所用方法的效率有显著影响。
在选择稀释液或洗提液时，应注意它们的成分(如组成、浓度、渗透性和pH) 这些成分不应使微生物增殖或失活
当 用 液 体从固体表面取下微生物时，可考虑使用表面活化剂。,洗脱液、稀释液和转送培养墓,洗脱液的稀释液示例,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,阴性对照,,生理盐水,生理盐水,擦拭采样,25cm2,10﹣1,10﹣2,10﹣3,30℃~35℃
72±2小时,,,,,用灭过菌的镊子沾湿棉球,,把棉球放入试管内，摇匀（洗脱）,1ml,1ml,,备料单,镊子 1个
平皿 7套
棉球 2个
试管 4支
刻度吸管 1ml 2支
大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)15~20ml/皿X7
0.9％生理盐水 10ml/支 x4,Thank You !,,
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