生物安全柜的选择、使用及维护.ppt

生物安全柜的选择、使用及维护,李 仁 清 博士 北京市疾病预防控制中心,依 据,GB 19489—2007《实验室生物安全通用要求》 《实验室生物安全手册》（第三版，2004） ISO 15190—2003《医学实验室—安全要求》 YY0569-2005 生物安全柜（2005.7.18） JG170-2005 生物安全柜（2005.3.25） 实验室生物安全指南（第三版，2004） 生物危害一级防护：生物安全柜的选择、安装和使用（第二版，2000.9） 微生物和生物医学实验室生物安全手册（第四版，1999.4）,目 的,掌握生物安全柜的选择、放置、使用和维护 熟悉生物安全柜的检测方法,需要解决的六个问题,为什么选择生物安全柜？ 选择什么样的生物安全柜？ 怎样放置生物安全柜？ 怎样使用生物安全柜？ 怎样维护生物安全柜？ 怎样检测生物安全柜？,选择生物安全柜的理由,工作对象具有生物危害 原代培养物、菌毒种以及诊断性标本等 -------具有潜在感染性的实验材料 属于《人间传染的病原微生物名录》中第一、二、三和四类微生物,人间传染的病原微生物名录,,类与级对应表,------GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》,第一类,第二类,第三类,第四类,,,,,选择生物安全柜的理由,容易产生气溶胶的工作行为 对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时， 将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时， 在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶， 采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中， 对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡， 对感染性液体进行离心， 进行动物操作时。,选择生物安全柜的理由,生物安全柜能够阻止工作中所产生的气溶胶对外环境或者操作者本身产生危害，还可以减少样本之间由于气溶胶产生的交叉污染。,生物安全柜基本工作原理,定向气流： 风幕 HEPA滤器： 一种一次性使用， 框架内有多重褶迭 的干性过滤材料的过滤器，对0.3微米气溶胶的过滤效 能达到99.97%。 保证排出气体和内循环气体的无菌状态。,生物安全柜的选择,要素： 样品的生物危害 第一、二、三和四类病原微生物 保护样品 I级生物安全柜不保护样品 其他 是否涉及到挥发性、放射性核素或化学品,生物安全柜的选择（一）,生物安全柜的选择（二）,II级A2型生物安全柜,生物安全柜的选择（三）,生物安全柜的宽度：工作需要；空间 费用：安全柜本身；运输费用；附件费用（支架，紫外灯，椅子等）；排风和送风系统： 风机和管道（II级B2） 认证： NSF 49 美国 EN12469 欧洲 YY0569－2005 中国,生物安全柜放置,五个远离点（气流） 门 风扇 空调 开着的窗户 人员活动频繁的区域 摆放要求 稳固的平台或支架 两侧、后面和上端留30cm,视频,反面,教材,生物安全柜的使用要求,个人防护要求 柜内物品的摆放 紫外灯 明火 工作前准备 工作中操作及溢出处理 工作结束后处理,生物安全柜的使用,个人防护要求： 在使用生物安全柜时必须穿个人防护服，戴手套（手套应套在隔离衣的外面） 最好带口罩和帽子，根据需要带防护眼罩或者面罩。,视频,生物安全柜的使用,生物安全柜内物品摆放原则 按照从洁净区到污染区的方向摆放 所有物品尽可能放在工作台后部 将废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品放在柜内某一侧 前进气格栅不能被纸、仪器设备或者其他物品阻挡,生物安全柜的使用,生物安全柜的使用,对紫外灯的三点要求： 每周进行清洁，除去可能影响杀菌效果的灰尘和污垢 每次生物安全柜的认证，要检查紫外线强度，以确保有适当的光发射量 房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害,生物安全柜的使用,避免使用明火，原因有三： 明火可造成生物安全柜的气流紊乱，干扰气流模式 可损坏HEPA过滤器 处理挥发性物品和易燃物品时易造成危险,生物安全柜的使用,工作前需要准备的内容： 首先紫外灯照射30分钟 关紫外灯，打开安全柜的日光灯和风机，用消毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭 将实验中需要用到的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上（切记勿阻挡风口！） 等待5min，净化工作区的空气污染物,视频,生物安全柜的使用,工作时操作规范： 双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。 所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。 废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中,视频,生物安全柜的使用,操作时注意事项： 避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出。 尽量避免污染的物品进入洁净区。 在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字工作。 尽量减少操作者身后的人员活动。,视频,生物安全柜的使用,溢出处理： GB19489—2007《实验室生物安全通用要求》中生物安全柜内溢出时的处理方法 滴状溢出或体积不足1 mL 的，可简单地用消毒剂擦洗。,生物安全柜的使用,大量溢出，则要做特殊的处理： 1、 使生物安全柜保持开启状态。 2、 在溢出物上覆盖浸有消毒剂的吸水材料，作用大约10分钟以发挥消毒作用。 3、 在安全柜内对污染的手套消毒后，脱下手套。如果衣服已经污染，也要先脱下消毒。穿戴干净的手套和衣服作如下进一步的清洁工作。,生物安全柜的使用,4、 用消毒剂喷洒或擦拭安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧。作用20 min后，擦干消毒剂并将擦拭物置于生物危害袋中。 5、 如果溢出情况需要浸泡接液槽，则不得现场清理接液槽。应报告实验室主管后采用适当的气体消毒方式。,生物安全柜的使用,6、 将所有清理用物品以及防护服进行高压消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮肤。 7、 立即通知实验室主管。如果溢出物流入安全柜内，可能需要对安全柜进行更为广泛的消毒处理。,视频,生物安全柜的使用,工作结束后的要求： 将安全柜继续运行至少3min来完成“净化”过程。 将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭 每天实验结束后，对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭。 等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射30分钟。,视频,生物安全柜的维护,保持生物安全柜表面清洁和无污染状态 用70%酒精或者合适的消毒剂擦拭内壁和工作台面； 如果使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后，需要用无菌水再次进行擦拭除去残余的消毒剂； 定期抬起工作台面对其下面的区域进行清洁； 消毒后，用玻璃清洁器对前窗玻璃和紫外灯进行清洁。,生物安全柜的维护,定期保养： 用湿布擦拭内壁和工作台面； 每年按需要更换紫外灯和日光灯； 每年至少认证一次 ——《医学实验室—安全要求》 ——YY0569-2005 生物安全柜 ——《实验室生物安全手册》（第三版，2004）,视频,生物安全柜的维护,生物安全柜的污染清除 甲醛、过氧化氢熏蒸等方法 应由有资质的专业人员来进行 在以下情况下需要进行熏蒸： ①在检查和维修之前 ②在更换HEPA滤器之前 ③在移动安全柜之前 ④安全柜被严重地污染 ⑤变换使用目的 ⑥长时间未用 ⑦需要熏蒸的其它时间,生物安全柜的维护,甲醛熏蒸步骤之一----准备 电炉两个；福尔马林；氨水；100mL烧杯4个；胶带；透明塑料薄膜、75%酒精等。 使用75%酒精对生物安全柜内、外表面进行消毒清洁； 将生物安全柜和放置在同一房间内的冰箱、CO2培养箱等仪器用胶带纸进行密封处理。,视频,生物安全柜的使用,甲醛熏蒸步骤之二----熏蒸 将电炉放在生物安全柜中，连接电源 用两个烧杯分取福尔马林20mL、水50mL，置电炉上 关闭视窗，用胶带封严窗门 开启电源，水和福尔马林同时被加热，待福尔马林挥发完毕时，关闭电源, 保持密闭状态，过夜,视频,生物安全柜的使用,甲醛熏蒸步骤之三----中和 取氨水36mL、水50mL，分放于2个烧杯中，置电炉上 再次将生物安全柜门密封 开启电源，待氨水挥发完后，关闭电源 密闭过夜,视频,生物安全柜的熏蒸,生物安全柜的熏蒸,,,生物安全柜的检测,什么情况下需要检测？ 应该由什么人来进行检测？ 需要进行哪些内容的检测？,生物安全柜的检测,生物安全柜的检测的情况发生在： 最初的购买安装完毕 年检 移动 修理,生物安全柜的检测,生物安全柜的检测应由有资质的单位检测 在美国必须有美国NSF授权的单位；没有NSF授权，也得有以下经历的： 有过检测经验；参加过技术课程或者厂商培训会；参加过象CETA水平的商业会议；检测设备拥有的校准证书 在我国有检测资质的单位： 国家食品药品监督管理局 医疗器械质量监督检验中心和军事医学科学院,生物安全柜的检测,安全柜防护效果的评估涉及到以下内容： ①安全柜的完整性 ②人员、产品及交叉污染保护 ③HEPA过滤器的泄漏 ④向下气流的速度 ⑤正面气流的速度 ⑥负压／换气次数 ⑦气流的烟雾模式 ⑧警报和互锁系统 ⑨电气安全 ⑩光照度,还包括紫外线强度、噪声水平、震动性、集液槽泄漏、柜体稳定性（包括柜体抗翻倒、柜体抗变形、工作台面抗变形、柜体抗向前倾倒）、温升、电机与风机等性能的测试。,生物安全柜的检测,①人员、产品和交叉污染保护测试 ②下降气流流速测试 ③流入气流流速测试 ④工作舒适度有关标准：噪音、照度和震动测试 ⑤高效过滤器完整性测试 ⑥柜体泄漏的测试 ⑦气流烟雾模式测试 ⑧排溢槽泄露 ⑨柜体稳定性 ⑩其他各类测试 ：电机和风机性能测试、工作区温升测试、压差测试。,生物安全柜的检测,出厂检验 型式检验 安装检验： 安全柜安装完成、位置移动后 常规维护检验：至少每年一次 更换过滤器和内部部件维修后,生物安全柜的检测,安装检验和常规维护检验至少以下内容： 外观 高效过滤器完整性 下降气流流速 流入气流流速 气流模式 负压,烟雾试验,风速检测,,Thanks！,