1、栝楼增殖培养基筛选,学 生： 张 力 年 级： 2007级 指导教师： 刘红美博士 实习单位：贵阳医学院医学生物 技术教研室,目 录,1、前 言 2、材料与方法 2.1材料 2.2 方法 2.2.1最佳材料筛选 2.2.2不定芽诱导 2.2.3不定芽增殖3、结果与分析 3.1最佳材料筛3.2不定芽诱导3.3不定芽增殖4、讨论与结论5、致 谢,1.前言,栝楼（TrichosantheskirilowiiMaxim）， 亦称瓜蒌、天瓜、野葫芦、吊瓜， 为葫芦科栝楼属( Trichosanthes L. )雌雄异株、宿根、攀援草质藤本植物。栝楼为我国传统常用中药材，宋代本草图经、明代本草纲目均有记载
2、。主要分布于山东、河南、山西、河北、北京、浙江、安徽等15 个省市，现代医学研究发现，天花粉蛋白能够抑制肿瘤的生长和多种病毒繁殖， 特别是对HIV病毒复制有较强的抑制作用1。栝楼子营养丰富，果实中含有三菇皂甙、有机酸及盐类、树醋、糖、色素、脂肪等；叶含山奈甙，其提取液具抗癌作用，对高血压、高血脂、高胆固醇有辅助疗效。栝楼为常用大宗中草药之一，全身都是宝，栝楼子能提高肌体免疫功能，并有瘦身、美容功效。,药用括楼多为人工栽培, 而种子培养的雌性栝楼种苗只有总量的10%15%。因此, 对括楼雌性植株进行快速繁殖为扩大种植面积提供优质种苗的研究进行愈伤组织诱导并大规模细胞培养进而中提取有效成分研究的研
3、究有着重要的意义。,植物组织培养快速繁殖技术，具有繁殖周期短、繁殖系数大、材料来源广、遗传稳定、不受季节与环境限制等优点。利用组培技术建立栝楼快速繁殖体系，能在短期内培育出大量遗传稳定、经济性状表现一致的优质种苗，有利于迅速实现优良品种的大面积推广。,2.材料与方法,2.1材料 栝楼雌性植株母本瓶芽（来自江西农科站）2.2 方法 2.2.1 最佳材料筛选消毒好的栝楼叶片和茎段分别接于诱导培养基（1）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;(2)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;（3）MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L; (均含有0.8%琼脂和3%蔗
4、糖)。PH=5.8-6.0，25持续光照培养,以确定增殖的最佳材料。,2.2.2不定芽诱导将栝楼茎段接于培养基（4）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L; （5）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;（6）MS+6-BA0.5mg/ L +NAA0.15mg/L；（7） MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;(8)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L（培养基内均含蔗糖3+琼脂0.8%）25，持续光照培养，以获得栝楼,不定芽。,2.2.3不定芽增殖 将栝楼不定苗接于培养基（9）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;（10）M
5、S+6-BA0.5 mg/L+NAA0.15mg/L;（11)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;(12)MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.15mg/L;(13)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L;(14)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.15mg/L;(15)MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;(16)MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.15mg/L(均含有0.8%琼脂和3%蔗糖)。PH=5.8-6.0，25持续光照培养，以获得栝楼茁壮苗。,3.结果分析,3.1 最佳材料筛选,表1：不同培养基中栝楼茎段、叶片的生长情况,A1,
6、A2,A3,图A1与图A2：均为20天后栝楼茎段在培养基中的反应情况，图A3：40天后栝楼叶片在培养基中的反应情况,3.2 不定芽的诱导,表2：不同培养基中栝楼茎段的不定芽诱导情况,B1,B2,B3,B4,图B1：20天后4号培养基中栝楼茎段的变化；图B2：20天后6号培养基中栝楼茎段的变化；图B3：20天后7号培养基中栝楼茎段的变化；图B4：20天后8号培养基中栝楼茎段的变化。,3.3不定芽增殖,表3：不同培养基中栝楼茎段的增值及生长情况,C1,C2,C3,C4,图C1是9号培养基中栝楼茎段生长情况，图C2是10号培养基中栝楼茎段生长情况，图C3是11号培养基中栝楼茎段生长情况，图C4是12
7、号培养基中栝楼茎段生长情况,C6,C5,C7,C8,图C5是13号培养基中栝楼茎段生长情况，图C6是14号培养基中栝楼茎段的生长情况，图C7是15号培养基中栝楼茎段生长情况，图C8是16培养基中栝楼茎段生长情况。,4.讨论与结论,兰伟等学者将分化的丛生芽在相同的培养基(含4. 0 mg/L 6 - BA和0. 2 mg/L NAA的MS培养基)上继代培养, 20 d后,植株高达约3. 0 cm,形成无根试管苗。平均丛芽数为4.3，与本次试验不同的是激素浓度上出现很大差异，这可能是不同地域生长的栝楼体内所含的激素不同，实验发现,以茎切段为外植体诱导栝楼愈伤组织的效果较好,转接后能迅速形成丛生芽;用叶片的培养的不仅效果不明显而且周期十分长。另外，本次试验发现，高浓度的NAA可导致生根现象。,由于时间关系，此次试验只得到栝楼培养的最佳材料为茎段，最佳增殖培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.8%，增殖倍数4-6倍，周期为20天，本次试验提供了不同浓度NAA与6-BA对栝楼增殖培养的影响，并有具体数据，对于生根以及炼苗还需进一步的研究。另外，本次试验仅比较了6-BA与NAA两种外源激素在栝楼组织培养中的作用，而其他激素(如KT、IAA等)在栝楼组织培养中的作用则有待进一步地研究。,谢谢!,
