1、- 1 -辽宁省地方标准牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程编制说明辽宁省畜牧业经济管理站二一八年二月十五日- 2 -牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程编制说明一、工作简介（一）任务来源2017年5月，为了推动牛细管冷冻精液制作与贮存技术提高，我站提出了制定牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程编制项目申请。2017年 7月，省质量技术监督局下达了标准制订计划(辽宁省质量技术监督局关于下达2017年第一批辽宁省地方标准制修订项目计划的通知（辽质监发201762号）)，项目编号20170710。（二）协作单位标准编制主持单位是辽宁省畜牧业经济管理站，协作单位是辽宁省牧经种牛繁育中心有限公司。（三）主要工作过
2、程1.提出标准编制任务，建立标准组织机构编制任务提出后，为加强组织管理，我站领导和科技办相关技术人员组成了规程制定领导小组和标准起草小组。领导小组承担规程制定的组织协调和方案审定工作；标准起草小组负责制定实施方案和起草规程等工作，从组织上保证了规程制定工作的顺利实施。2.查阅相关技术资料，确定规程框架接到编制任务后，标准起草小组（以下简称项目组）人员- 3 -开始收集、查阅相关技术资料，将涉及牛细管冷冻精液制作与贮存技术的相关标准 GB 4143-2008牛冷冻精液 、NY/T 1234-2006牛冷冻精液生产技术规程 、GB/T 303962013 牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输等多项标准
3、作为重要参考标准进行了认真研究，并进行了深入分析和总结，全面了解标准的内涵和编制方法，同时结合生产实际对收集的资料进行归纳、整理，为标准编制提供技术支撑。采取专家咨询，组织召开座谈会等形式，并结合公司几十年生产的实际情况，对拟制定的标准所涉及的内容、范围、适应性、前瞻性等进行了研讨，通过研讨明确了牛细管冷冻精液制作与贮存技术规范的主要内容和方法。其方法就是，鲜精活力、密度、采精量检测合格后，依据国家标准确定精液稀释倍数进行稀释，精液稀释后罐装、平衡，罐装、平衡后的精液上架、冷冻，检查冷冻后的精子活力，检查合格的冻精用包装袋包装，包装后的冻精放入液氮罐中贮存。3.总结经验，达成共识从 1991
4、年起，我站开始生产细管冷冻精液。项目小组人员，根据多年从事牛细管冷冻精液生产与贮存经验，在对标准内容进行充分调研、综合分析、试验验证的基础上达成一致意见，筛选出最佳工艺流程、操作方法、数据指标，用于制定牛细管冷冻精液制作与贮存技术规程。4.起草标准，征求意见，并经征求意见后修改完成标准送- 4 -审稿2018 年 2，项目组成员秉持严谨和科学的态度，对内容反复研讨，对细节几经推敲，历经多次修改后，起草完成了标准讨论稿。讨论稿又经过站内专家内审和修改后，形成了标准征求意见稿。2018 年 3 月，向农业部牛冷冻精液质量监督检验测试中心（北京） 、辽宁省畜牧兽医局、辽宁省畜牧技术推广站、辽宁省畜牧
5、科学研究院、沈阳农业大学、辽宁医科大学畜牧兽医学院、辽宁省牧经种牛繁育中心有限公司、大连金弘基牧业有限公司、黑山县畜牧技术推广站、昌图县畜牧技术推广站等15 家涵盖科研、高校、检验、管理、生产及使用单位的专家开展标准意见的征集工作。2018 年 4 月，对反馈意见进行整理、汇总、分析和处理，在充分调查、综合分析、试验验证的基础上，按照 GB/T 1.1标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写的要求，最终完成标准送审稿。（四）主要起草人及其所做的工作标准主要起草人：杨术环、邓福金、王化青、杜学海、崔楠。项目组人员分工：杨术环负责组织制定标准起草计划，检查标准计划的进展情况，督促项目组工作，
6、落实标准起草经费，为标准起草提供必要的工作条件；邓福金负责确定标准总体框架、范围和主要内容，编写“标准编制说明”、起草“标准征求意见稿” ，组织完成标准草案的征求意见、送审和报批等工作。王- 5 -化青负责编写冻精制作部分技术内容，崔楠负责编写冻精贮存部分技术内容；杜学海负责标准排版格式、文字处理、语言修改。二、标准编制原则和确定地方标准主要内容的依据（一）标准编制原则本着先进性、科学性、实用性相结合的原则，在参考国内外法规、标准和有关文献资料的基础上，结合我省牛细管冷冻精液生产实际，科学地确定标准体系框架，并对其内容进行准确、简捷、规范性描述，做到技术先进适用，方法切实可行。（二）确定地方标
7、准主要内容的依据标准主要内容包括范围、规范性引用文件、术语和定义、稀释液配制、主要器材、器材清洗和毒、精液品质检查、精液稀释、灌装与平衡、精液冷冻、冻精检验、冻精包装及冻精贮存 13 部分。1.范围本标准规定了牛细管冷冻精液（以下简称冻精）制作与贮存过程中的术语和定义、主要器具、器械清洗和消毒、稀释液配制、精液品质检查、精液稀释、灌装与平衡、精液冷冻、冻精检测、冻精包装和冻精贮存的技术内容。本标准适用于牛细管冻精的制作与贮存。2.规范性引用文件- 6 -条款内容下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有
8、的修改单）适用于本文件。GB 41432008 牛冷冻精液GB/T 303962013 牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输NY/T12342006 牛冷冻精液生产技术规程引用情况上述标准在标准条款中都有引用。GB 4143-2008 牛冷冻精液中引用的内容为：4.2 新鲜精液 色泽乳白色或淡黄色。精子活力65%，精子密度610 8个/mL。4.5 每剂量冻精解冻后4.5.1 精子活力35%（即0.35 ） 。4.5.2 前向运动精子数800万个。GB/T 303962013 牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输中引用的内容为：4 包装4.1.2 包装袋4.1.2.1 材料灭菌纱布或其他纺织品（轻、薄
9、、牢固、通透性良好） 。- 7 -4.1.2.2 缝制毛边内置、可穿系封口绳。纱布应双层裁制。其他纺织品根据材质可单层裁制。4.1.2.3 规格长度小于等于180mm；宽度小于等于75mm，可根据预定装入的贮精管数量（宜为4管或8 管）来决定。封口绳总长度不小于300mm ，直径不小于 2mm。NY/T 1234-2006 牛冷冻精液生产技术规程中引用的内容为：8.2.1 全自动冷冻仪冷冻仪是由电子计算机控制的全自动冷冻容器，可根据使用者的需要获取多条冷冻曲线。冷冻时，首先在电脑中设置好冷冻的最佳温度曲线，冷冻仪与低温柜应尽量靠近，开启液氮罐阀门把冷冻仪降温至 4预冷，关闭风扇电源，待风扇完全
10、停止后把已排满待冻细管架子迅速放入冷冻仪，盖严盖子，按预先设定好的程序自动完成冷冻。附 录 A（规范性附录）细管冷冻精液标记方法细管冷冻精液标记由十六位数四部分组成，排列 顺序如下：公牛站代码三位数 品种代号二位数 生产日期六位数 公牛号五位数 第一部分公牛站代码，以全国畜牧总站公布的公牛站代号为准（见附录） ；第二部分品种代- 8 -号以 GB/T 4143 为依据；第三部分冻精生产日期六位数按年、月、日次序排列，年、月、日各占二位数字，年度的后两位数组成年的二位数，月、日不够二位的，月、日前分别加“0”补充为二位数；第四部分公牛号取该牛身份证号码的后五位数。部分与部分之间空一个汉字（二个字
11、节），第一、第二部分用汉语拼音大写字母表示；第三、第四部分用阿拉伯数字表示。标记的字迹必须清晰易认。标记示例：211 为辽宁省牧经种牛繁育中心有限公司代号，XL 为夏洛来公牛的品种代号，170518 为2017 年 5 月 18 日的生产日期代号，O9505 为该公牛身份证号码 XL211O9505 的后五位数。附 录 C（资料性附录）牛精液稀释液配方第一液 蒸馏水 100mL,柠檬酸钠 2.97g，卵黄 10mL。第二液 取第一液 41.75mL，加入果糖 2.5g，甘油 7mL。上述稀释液，每100mL加入青霉素、链霉素各5万IU10万IU。3.术语和定义该条款介绍了标准中常见的术语和定义
12、。条款内容为：精液稀释 semen dilution 向精液中添加一定数量按特定配方配制的适宜于精子存活并保持受精能力的溶液。一次稀释法 one time dilution method- 9 -将采出的精液用含甘油的同温稀释液按比例要求一次加入。二次稀释法 two dilution method 常温下第一次添加无甘油稀释液，降温平衡后、冷冻前添加等温含甘油稀释液。降温平衡 cooling balance稀释后的精子在降温和在低温下的一个适应过程;也是稀释后精细胞重建离子平衡变化的过程，这个过程是必要的，不能省略的。注：降温和平衡是两个不同的过程。降温是在11.5h内，使稀释精液的温度（30
13、）逐渐降温到45；平衡是降温后，把稀释后的精液放置在45的环境中停留23h。上架 shelves用搓板把细管精液均匀地摆放在托架上。是细管精液冷冻前的必要准备工作。初冻温度 Initial freezing temperature精液冷冻前，冷冻容器中冷冻面（托架上细管所在层面）的温度。拇指管 goblet- 10 -一端封闭另一端开口的柱形贮存细管冻精的器材。管体要求厚薄均匀一致，在常温至超低温（196）环境下不变形、不破裂。4.主要器具该条款介绍了制作和贮存细管冻精的主要器材。条款内容为：相差显微镜。评定精子活力，放大倍数100600倍。恒温板。保证检查精子活力温度控制，一般为3738。密度仪。国外开发的测定精子密度的专用仪器，直接读取密度值，替代传统的分光光度计。低温柜。保证精液降温平衡、上架和罐装环境温度的设备，一般温度控制在45。罐装机。是一套在完成灌装与封口后即刻进行喷墨印字的一体化设备。冷冻仪。是由计算机控制的全自动冷冻容器，根据需要已设定多条降温、冷冻温度曲线，使用时可选择设置好的最佳冷冻温度曲线。简易冷冻箱。冷冻细管精液简易装置，一般使用隔热效果良好的泡沫箱，深度在50cm以上，单层摆放2个或3 个托架。
