1、目录,一.摘要 二.引言 三.材料 四.方法 五.结果 六.讨论,一、摘要奶牛子宫内膜炎是奶牛常见病和多发病，给奶牛饲养业带来了巨大的经济损失。本试验对张家口八个地区奶牛场中奶牛进行流行病学调查研究发现:张家口地区奶牛子宫内膜炎的平均发生率为21.25%。再对奶牛临床型或无临床型子宫内膜炎奶牛的病原菌进行分离、鉴定。试验从42份样品中分离出7种共计141株细菌。对所有分离株进行9种药物的敏感性试验。结果表明：病原菌对万古霉素、氟苯尼考、环丙沙星、卡那霉素和新霉素敏感。关键词：奶牛子宫内膜炎；流行病学；病原菌；防治,二、引言 奶牛子宫内膜炎是奶牛最为常见的产科疾病，其发病很高，经济损失较大，是当
2、前影响奶牛繁殖和降低奶产量的最主要的疾病之一。奶牛子宫内膜炎大多数是在分娩时或产后期间，由于子宫内膜的损伤和外界微生物入侵而引起的子宫内膜的炎症过程，故有产后子宫内膜炎之称。 国外许多资料报道，奶牛子宫内膜炎的发病率在20%-40%左右。 本实验通过对张家口地区奶牛场的调查研究，了解张家口地区的奶牛子宫内膜炎的发病规律、病原分布、病原耐药性，找出抑制子宫内膜炎致病菌的有效药物。,三、材料3.1实验动物：待检奶牛来自张家口的8个地区（万全奶牛小区、宣化县奶牛小区、察北管理区奶牛小区、怀来奶牛小区、怀安奶牛小区、塞北管理区奶牛小区、阳原奶牛小区、涿鹿奶牛小区）不同性质和规模的奶牛养殖场。3.2仪器
3、及药品:超净工作台：型号FLC-3（由哈尔滨市东联公司提供）、手提式不锈钢蒸汽消毒器：型号YX280B(由上海三申医疗器械有限公司提供)、电热恒温鼓风干燥箱：型号HG-9140（由上海精宏实验设备有限公司提供）、电热恒温培养箱：型号DNP-9082(由上海精宏实验设备有限公司提供)、离心机：型号LXJ64-01（由河北省吴桥电机厂提供）。 一次性输精管套，输精枪、70%酒精棉球、0. 1%百毒杀等 (由河北北方学院提供)，50m1, 20m1, 5m1, lml一次性无菌注射器(购于张家口佰汇医药有限公司)。,3.3药敏试纸 药敏试纸购于杭州天和微生物试剂有限公司，批号：201007233.4
4、细菌分离培养基 添加3%小牛血清的牛心肉汤 营养琼脂平板(观察菌落形态) 麦康凯培养基:分离大肠杆菌用 沙保氏弱培养基:分离真菌用伊红美蓝琼脂培养基：分离沙门氏菌用普通琼脂培养基 3.5药敏试验培养基 MH(Mueller Hinton)液体培养基和MH琼脂(MHA)(杭州天河微生物试剂有限公司)，其中进行链球菌药敏试验时，在MHA中加5%的小牛血。 生化鉴定培养基（生化微量鉴定管均购自杭州天和微生物试剂有限公司）。,四、方法4.1病料采集 先将患有子宫内膜炎的奶牛阴门清洗千净，再用百毒杀消毒。将经过高温消毒的输精专用金属管插入一次性无菌塑料输精管套中，将管套插入子宫内，用灭菌注射器在金属管另
5、一端吸几下，取出输精管套，立即将金属管头部的一段分泌物注入无菌小瓶中，10分钟内送实验室进行细菌分离培养。同时取子宫分泌物涂片染色镜检。4.2细菌分离将子宫洗出液接种于血液琼脂及普通琼脂平板上，置37培养24-48小时。细菌太多无法分离时，进行倍比稀释后再涂布平板分离。对生长的可疑菌落，结合菌落特征、涂片染色镜检特征，标记菌株号，并挑取单个菌落进行纯化，再涂片，染色镜检。若镜检无杂菌，再接种于牛心肉汤，置于37恒温箱培养18-24小时，观察细菌在肉汤中的生长情况，并进行涂片、染色、镜检，作好记录和标记，作为鉴定菌种，同时保存备份菌种。,4.3细菌鉴定根据细菌的培养特征、染色形态特征，排列等进行
6、初步归类，确定其生化反应和其它鉴定项目。4.4药敏试验采用世界卫生组织推荐的、目前各实验室广泛采用的纸片琼脂扩散法(discagardiffusion)。接种和培养等参照赵红琼2005年报道的方法进行。 判断标准:抑菌圈直径(包含纸片的直径)用游标卡尺测量。抗菌效果判定:青霉素和氨苄西林对葡萄球菌的抑菌圈直径29mm为敏感，抑菌圈直径18为不敏感，其余为中敏;对链球菌抑菌圈直径28mm为敏感，抑菌圈直径19mm为不敏感，其余为中敏;其它药物抑菌圈直径20mm为高敏;15mm-20mm为中敏;抑菌圈直径15为不敏感。根据被测定药物按常用剂量给药时在体内能达到的血药浓度而将敏感性标准分为3级:敏感
7、(*)、中敏(*)和抗药(-) 。,五.结果5.1流行病学调查结果表1. 八个小区近半年内奶牛子宫内膜炎发生情况统计结果 奶牛来源 调查数量 子宫内膜炎发生数 发生率 （头） （头） （%） 万全奶牛小区 643 141 21.93 宣化县奶牛小区 578 135 23.36 察北管理区奶牛小区 764 142 18.59 怀来奶牛小区 392 85 21.68 怀安奶牛小区 447 90 20.13 塞北管理区奶牛小区 318 87 27.36 阳原奶牛小区 605 106 17.52 涿鹿奶牛小区 445 105 23.60 总计 4192 891 21.25 根据流行病学调查结果显示：张
8、家口地区奶牛子宫内膜炎的发病率为21.25%。,5.2细菌分离鉴定结果 从42头奶牛中，共分离出7种共计141株细菌5.2.1子宫内膜炎奶牛子宫内细菌分离种类及部分特性见下表2分离菌株种类 菌株数 百分比（%） 菌体的形状 革兰 氏染色大肠杆菌 37 26.24 直杆状中等大小 -金黄葡萄球菌 30 21.28 小球圆形 +表皮葡萄球菌 24 17.02 球状圆形 +沙门氏菌 7 0.05 杆状 -分泌属化脓菌 29 20.58 棒状 -链球菌 8 0.06 球状长链 +消化链球菌 6 0.04 小球圆形长链 +或-,5.2.2子宫内膜炎奶牛子宫内细菌检出率见下表3 细菌种类 分离出奶牛头数
9、百分比 （%）大肠杆菌 33/42 78.57 分泌属化脓菌 30/42 71.43 金黄葡萄球菌 15/42 35.71 表皮葡萄球菌 17/42 40.48 链球菌 6/42 14.29 沙门氏菌 7/42 16.67 消化链球菌 5/42 11.9,根据上表鉴定结果显示：在样品中分离出6共计141株菌株。其中大肠杆菌37株，占分离菌的26.24%；金黄葡萄球菌30株，占分离菌的21.28%；表皮葡萄球菌24株，占分离菌的17.02%；沙门氏菌7株，占分离菌的0.05%；分泌属化脓菌29株，占分离菌的20.58%；链球菌8株，占分离菌的0.06；消化链球菌6株，占分离菌的0.04%。因此，
10、患有子宫内膜炎的奶牛子宫内只要致病菌为大肠杆菌，金黄葡萄球菌，表皮葡萄球菌和分泌属化脓菌。,5.3药敏试验结果抗微生物药物对致病菌的抑菌结果（mm）表4 药品 大 金 表 沙 分 消 肠 黄 皮 门 秘 链 化 杆 葡 葡 氏 属 球 链 菌 萄 萄 菌 化 菌 球 球 球 球 菌 菌 菌 菌 青霉素 11.0- 11.0- 23.0* 6.0- 14.5* 23.0* 256-庆大霉素 28.8* 22.0* 29.7* 30.6* 20.3* 6.8- 4.0*氨苄西林钠 6.0- 6.0- 10.1- 8.5 12.5- 7.0- 2.0*克林霉素 15.0* 6.0- 6.0- 6.0
11、- 27.0* 6.0- 128-氟苯尼考 20.0* 24.5* 24.0* 28.1* 22.0* 11.0- 4.0*万古霉素 32.1* 31.0* 28.0* 27.0* 26.0* 29.0* 1.0*新霉素 24.4* 15.4* 10.5* 23.6* 27.8* 29.0* 2.0*环丙沙星 30.0* 24.0* 31.0* 29.0* 39.0* 25.0* 3.0*卡那霉素 19.0* 13.0* 21.0* 15.0* 15.0* 15.0* 8.0-,根据药敏试验结果显示：庆大霉素、氟苯尼考、万古霉素、新霉素、环丙沙星、卡那霉素均对大肠杆菌抑菌效果较好。均呈现敏感现
12、象；庆大霉素、氟苯尼考、万古霉素、新霉素、环丙沙星均对分泌属化脓菌敏感；庆大霉素、万古霉素、环丙沙星对两种葡萄球菌敏感；链霉素、氨苄西林、庆大霉素、氟苯尼考、对消化链球菌敏感。综上所述：最理想的治疗奶牛子宫内膜炎西药为万古霉素、氟苯尼考、环丙沙星、卡那霉素和新霉素，均出现高敏现象。青霉素，氨苄西林钠，克林霉素效果不佳，可能与其长期使用这些药物而产生耐药性有关。,六讨论6.1 据报道，引起奶牛子宫内膜炎的病原菌比较复杂，不同地区不同情况下分离到的细菌种类和比例也有差异，这与当地的环境、奶牛的体况、用药情况等有关。张荣臻等认为，引起奶牛子宫内膜炎的主要细菌有化脓性杆菌、葡萄球菌和链球菌，占全部子宫
13、内膜炎病原菌70-75%，其次是大肠杆菌、坏死杆菌和恶性水肿梭菌。结核杆菌、布氏杆菌和马副伤寒流产杆菌亦常引起子宫内膜炎。,兰州中兽医研究所，对治疗前186头，治疗后132头母牛子宫内病原微生物分离鉴定，查清了兰州地区引起子宫内膜炎的细菌区系，在被检的病料中，分离出细菌176株.其中链球菌92株(占52. 27%)、大肠杆菌41株(占23. 2%).葡萄球菌24株(占13. 64%)、棒状杆菌9株(占5. 11%)、变形杆菌7株(占3. 96 % )、绿脓杆菌3株(占1. 7%)。与本实验结果有所差异，说明各个地区奶牛子宫内膜炎的致病菌各自不同。所以因地制宜，对治疗奶牛子宫内膜炎至关重要。,6
14、.2 从病原菌分离鉴定结果可以看出，张家口地区单纯由某1种病原菌引起的奶牛子宫内膜炎较少，多数子宫内膜炎由2-3种甚至3种以上病原菌引起，即混合感染的情况比较严重。,6.3 抗生素药敏试验结果表明，万古霉素、氟苯尼考、环丙沙星、卡那霉素和新霉素五种抗生素对张家口地区奶牛子宫内膜炎病原菌的抑菌效果较好，而在临床上常用的青霉素，氨苄西林钠，克林霉素药物，病原菌对其均表现出不同程度的耐药性。产生耐药性的原因可能是：(1)地区差异。不同的地区在治疗子宫内膜炎时，使用的药物不同；（2)用药次数的差异。使用抗生素治疗子宫内膜炎时，常常侧重于治疗临床型子宫内膜炎，从而分离株出现耐药的几率增大； (3)用药剂量使用不当。治疗疗程不合理。因此在防治奶牛子宫内膜炎的过程中，应加强奶牛场药物使用管理，使用多种不同成分药物，防止细菌产生耐药性。,6.4 此次试验指导我们在以后的临床治疗过程中可以选择几种比较敏感的药物合用或交替使用，以减少单个药物的使用剂量或使用时间，减缓耐药菌株的产生。 另外，传染性致病菌和环境性致病菌对同一类药物的敏感性也存在一定的差异，实践中应引起注意。随着抗菌药物的广泛使用和耐药菌株的数量增多，对人类安全威胁也越大，因此我们应尽量少用或不用各类抗菌药物，开辟其他的用药新途径如使用纯中药制剂或应用疫苗等防治奶牛子宫内膜炎。,敬请各位老师提出宝贵意见！,谢谢大家！,
