1、凯普技术支持中心2016.09,凯普耳聋产品操作培训,成人男性和女性及新生儿（或患儿）外周血及血斑 抗凝外周血全血(不可用肝素抗凝)。抗凝血在2-8存放7天以内；在-20或 -80；保存时间可至两年以上，但要避免反复冻融。滤纸干血斑样本：制备完成的采集卡常温、干燥、避光最多可保存3周， 28可保存一个月， -20可保存三个月。羊水 羊水穿刺检查宜在孕1621周进行。28保存不超过24h，-20或 -80其保存时间可至半年以上。建议先将羊水离心收集细胞后，倒掉上清再冷冻保存，以免细胞裂解，核酸释放到液体中，影响DNA产量。绒毛膜 早孕绒毛采样检查宜在孕811周进行。28保存不超过24h，-20或
2、 -80其保存时间可至半年以上,适用样本及保存时间,抗凝血全血样本DNA提取方法,血液取样前应混合均匀,裂解过程中最好颠倒几次，有利于裂解充分,加4度冰冻的无水乙醇可提高DNA回收效率,TE洗脱液可稍微加热，并将洗脱液加至硅胶膜上静置再进行离心洗脱，有利于提高DNA的回收率。,羊水样本DNA提取方法,1）取5-10ml羊水样本，放入合适的离心管中，4000rpm离心10min2）去上清，在离心管中加入400ml的生理盐水或溶液P，混匀3）取步骤2中的溶液200ul，下同血液DNA提取方法。剩余标本保存，以备复查使用,血斑样本DNA提取方法,以下步骤同血液DNA提取相同,注意：1，解冻完全的MI
3、X试剂和-20保存的Taq酶取出后需点动离心（必须！），二者按相应的比例混合后，轻力混匀，点动离心。Taq酶不能在室温放置时间过久2，因MIX和酶在混合后分装过程中会有损失，建议在配试剂时A、B组按28l进行计算3，若DNA质量不佳，在加模板时可适当加大模板量0.5-1L4, MIX应避免反复冻融,扩增体系的配置,耳聋易感基因扩增为多重PCR扩增，对PCR仪质量要求较高，建议选用进口PCR仪(推荐使用ABI)，博日TC-96A PCR仪亦可。A组耳聋和B组耳聋的PCR扩增程序一样，可同时在同一台PCR仪上进行扩增。最好选用进口PCR管，PCR管避免长时间在紫外线下照射，在上机前应确保PCR管底
4、无气泡PCR扩增完成后可在4暂存，如需过夜放置，需将PCR产物放置在-20,扩增注意事项,杂交过程及其注意事项,同一样本的A，B扩增产物加在一个反应室内,WB1清洗时一定要用低速排液,杂交过程及其注意事项,杂交过程中实时问题处理参见21分型产品,结果判读,耳聋结果判读需谨慎对待！,耳聋基因检测结果由于无其他相关数据可供核对验证，因此对结果的判读应当尤为谨慎。对于新生儿筛查等标本量较大的项目，阳性率相对较低，可以通过对阳性标本进行测序以确认最终的实验结果。对杂交信号不强、背景不好的试验结果，需谨慎对待；特别是对于线粒体DNA的相关位点如1494M、1555M，如无法确定是否有杂交信号需重做。对于
5、双重杂合或纯合子，最好能够安排再次重检，以再次确认实验结果。,结果判读,耳聋检测结果判读需谨慎对待！,免费测序范围,1 、正常对照点和突变点均未出的样本，已经过两次或以上的复查，结果仍是如此的；2、正常对照点显色正常，而突变位点的显色较浅的样本，已经过两次或以上的复查，结果仍是如此的；3、 检测结果与其它产品不一致4、 试验结果与理论不符,测序服务,标本邮寄地址：广州市黄埔区中新知识城凤凰三横路71号收件人：姚婕：15880292285 。需测序标本在寄送前需告知负责该家医院的市场或技术人员以便后期跟进。因快递公司不接受血液样品的邮寄工作，建议医院将血液包装过后邮寄，并附带样本基本情况的说明。,试剂盒范围内测序服务,试剂盒范围外测序服务,试剂盒范围外的特殊样本从医院正式开展之日起一年内提供免费服务，之后按200元/例的标准收费。如临床样本中发现稀有型别，合作的学术成果，包括文章，专利等，公司和医院共享。,测序服务,1 广东省内：送测之日起8至12个工作日。2 广东省外：送测之日起20个工作日。（因血液制品需走陆运，故省外样本的测序时间较长）3 临床上少见的样本需根据情况确定验证方法，所需时间需根据具体,测序结果反馈时间,Attention,耳聋易感基因突变具有遗传性，请您以严谨的科学态度对待！,创新专业追求卓越,
