1、主要内容,抗CD20单抗介绍,1,单抗起源和发展,1975年,生物学家克勒Kohler与米尔斯坦Milstein发明了用来制备单克隆抗体的杂交瘤技术，1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。从1986 年6 月，由Ortho 研发的用于治疗器官移植排斥反应的首个单克隆药物Muromonab-CD3 在美国上市；到2002 年，第一个全人源化单克隆抗体Humira 上市，人源化技术成熟后，进入临床试验的抗体药物增长率明显开始高于小分子药物。,2,美国FDA批准的单抗药物,3,2014年全球销售额最高的单抗药物,4,抗CD20单抗,CD20是B淋巴细胞的特异性表面标志，该抗原位于前B和成熟B淋巴细胞的
2、表面，而造血干细胞、原始B淋巴细胞、正常浆细胞或其它正常组织不表达CD20。该抗原表达于95%以上的B淋巴细胞型的非霍奇金氏淋巴瘤。,5,抗CD20单抗,在与抗体结合后，CD20不被内化或从细胞膜上脱落，CD20不以游离抗原形式在血浆中循环，因此，也就不会与抗体竞争性结合。抗CD20单抗与B淋巴细胞上的CD20结合，并引发B细胞溶解的免疫反应。细胞溶解的可能机制包括补体依赖性细胞毒性（CDC）和抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。,6,国外上市产品介绍,7,作用机制,8,抗CD20单抗的研究,本中心已经开展过5个抗CD20单抗的临床前安全性评价，适应症为B细胞性非霍奇金淋巴瘤。 将3个试验中
3、的数据进行总结，评价该类单抗对免疫系统的影响。,9,试验设计,静脉输注给药，给药速度为0.3-0.4mL/kg/min，每周给药1次，连续给药4周。,10,检测指标,临床观察白细胞及分类T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）B淋巴细胞亚群（CD20+、CD40+）抗药抗体（ELISA）细胞因子（TNF-、IFN-、IL-2、IL-4、IL-5和IL-6,流式）血清免疫球蛋白（IgG、IgM和IgA，ELISA）血清补体（C3、C4,ELISA）急性C反应蛋白（免疫荧光干式定量）循环免疫复合物（ELISA）骨髓涂片免疫器官脾脏、胸腺及淋巴结病理组织学检查,11,实验结
4、果,临床观察 试验期间，供试品10 mg/kg剂量组2只动物在第5次给药结束后出现死亡，美罗华30mg/kg对照组4只动物死亡，其中3只动物在第5次给药结束后死亡，1只动物在给药14天前后肢可见散在点状红斑，精神不振，被毛粗糙、俯卧、呼吸困难，在第20天发现死亡。,12,实验结果（续）,13,外周血淋巴细胞变化,实验结果（续）,(109/L),淋巴细胞计数的变化趋势,14,T淋巴细胞变化,实验结果（续）,(%),CD4+细胞的变化趋势,15,B淋巴细胞变化,实验结果（续）,(%),CD20+细胞的变化趋势,16,实验结果（续）,B淋巴细胞变化,(%),CD40+细胞的变化趋势,17,实验结果（
5、续）,B淋巴细胞变化,18,细胞因子 2个试验中安乐死动物的细胞因子未见到与给药相关的异常改变。,实验结果（续）,(pg/mL),IL-6的变化情况,19,抗药抗体产生情况,实验结果（续）,抗体具有中和药物活性的作用。,20,病理组织学变化 末次药后次日，供试品组和美罗华对照组安乐死动物可见脾脏白髓淋巴小结和/或边缘区、肠系膜/腹股沟等淋巴结的皮质淋巴小结中淋巴细胞数减少。,实验结果（续）,21,指标变化分析药理学作用： 给药后表现为外周血WBC、Lymph绝对计数降低； CD20+的B淋巴细胞耗竭，CD3+的淋巴细胞百分比增加脾脏白髓和/或边缘区、肠系膜和腹股沟淋巴结的皮质淋巴小结中淋巴细胞
6、数减少。,结果分析,22,结果分析（续）,动物死亡原因分析死亡时间：5/6动物集中在第5次 药后即刻或10-20分钟左右，可见口腔和鼻腔有暗红色泡沫状液体，1/6动物D14开始，前后肢可见散在点状红斑，在D20发现死亡。 药理学作用相关指标的变化：CD3,CD20,Lymph,免疫器官。 细胞因子：IL-6和TNF可见升高。 病理变化：4只动物可见肺脏出血水肿，1只动物见皮肤感染、脾脏坏死、胸腺萎缩、胃粘膜出血，1只动物未见致死性病变。,23,细胞因子变化,结果分析（续）,24,美罗华说明书显示，在临床试验中有超过50%的患者报道了输注相关反应的体征和症状，在输注24小时内发生。最常见的输注相
7、关反应包括细胞因子释放综合征、颜面潮红、咽喉刺激和震颤等，其他输注相关综合征还包括低血压、发热、呼吸困难、肺水肿、支气管痉挛、心肌梗死等等。在上市后的使用中，曾有报道致命的严重输注反应。利妥昔单抗引起的输注反应可能与细胞因子和/或其他化学介质的释放有关。,结果分析（续）,25,死亡原因分析 严重的输液反应，肺出血、水肿，与细胞因子释放有关。 严重的皮肤粘膜反应，皮肤破溃、感染，导致多脏器衰竭。 综合分析，动物死亡原因主要是与免疫反应有关。,结果分析（续）,26,结果分析（续）,供试品和市售对照美罗华的比较 各免疫指标变化如白细胞，淋巴细胞，CD3+，CD20 +，CD40+变化基本一致，且变化幅度基本一致。 病理组织学主要是免疫器官的萎缩，发生率基本一致。 免疫原性比较，抗体的发生率和抗体滴度基本一致。 其他免疫学相关的指标未见明显异常。 因此，两者的免疫原性和免疫毒性相似。,27,
