1、细菌内毒素检查法 中国药典 2010年版培训班 山东省药品检验所2010.10主 要 内 容n 细菌内毒素检查相关理论及概念n 中国药典 2010年版增修订情况n 细菌内毒素检查法及注意事项细菌内毒素检查相关理论及概念细菌内毒素鲎试剂鲎试剂与内毒素的反应机理细菌内毒素检查名词解释细菌内毒素检查法 （ Bacterial Endotoxins test）热原检查法（ Pyrogen test）LAL (Limulus amebocyte lysate) TestTAL (Tachypleus amebocyte lysate) TestLimulus Test细菌内毒素的发现细菌内毒素这个概念在
2、 1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引成的， 1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到 1940年时候， Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了 1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。Boivin：Morgan：内毒素是由多糖、脂质和蛋白质组成的复合体。脂多糖又由化学和生物性质不同的 特异 O 抗原 、 核心多糖 和 类脂 A（脂质 A） 组成。内毒素的多糖结构细菌内毒素参考
3、品的建立n 不同细菌的内毒素对于鲎试剂的反应活性不同，为保证鲎实验法的平行性和重复性，要建立一种内毒素的标准物质作为实验中的控制标准。n 由于大肠杆菌内毒素在天然内毒素中的致热活性比较高，在各种细菌内毒素对鲎试剂反应的灵敏性上处于中值的位置，且其稳定、可溶，因此一般都采用大肠杆菌的内毒素作为标准内毒素参考品。标准内毒素与环境内毒素标准内毒素： 指经人工提取精制并经生物效价测定的细菌内毒素，作为细菌内毒素检查的参考品。国际标准品（ IS）参考标准品（ RSE） 国家标准品（ NS/RSE）标准内毒素工作标准品（ CSE） 80年代以前以重量作为内毒素的单位 1982年 USP20引入以生物效价为量值的内毒素单位 （ EU， Endotoxin Unit）细菌内毒素的量值CP2010年版规定内毒素标准品溶解后要在旋涡混合器上混合 15分钟，以后的每一步稀释前要至少混合 30秒，其他国家药典也有类似要求；具有两极活性的内毒素分子在水中呈现不均匀分布 不按要求进行旋涡混合会使所稀释的内毒素效价偏低，造成灵敏度标示偏高、阳性对照不凝等不正确的实验结果细菌内毒素标准品的稀释
