1、 ABO血型鉴定 实验原理 正定型 根据 IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合出现凝集反应的原理，用已知 IgM类特异性标准抗 A、抗 B血清室温下与被检红细胞在盐水中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有血型抗体相对应的抗原，来判断和鉴定被检者的血型。 反定型 用已知标准 A， B， O型红细胞分别与被检血清反应，若出现凝集，证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。根据血清中存在的血型抗体和Landsteiner定律判断和鉴定被检者血型。试剂器材 试剂 标准抗 A、抗 B血型定型试剂5%（体积比） A， B， 型标准红细胞生理盐水悬液。 生理盐水 器材 试管、试管架、记
2、号笔、吸管、离心机、玻片、显微镜 标本 5%被检红细胞生理盐水悬液，血清或血浆操作步骤 正定型试管法：1：标记试管 取试管两支，分别标记 抗 A，抗 B。2： 加定型试剂 将抗 A、抗 B试剂各 1滴分别加入抗 A，抗 B试管中。3：加入红细胞悬液 各加 5%被检者红细胞生理盐水悬液 1滴于试管中，混匀，以 1000r/min离心 1min。4： 观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。 5：判断结果 凝集判断标准：完全凝集者，上层液无色清亮，底部有红细胞凝块，呈花边状，轻弹试管
3、凝块不散开。完全不凝集的试管，上层液无色清亮，血细胞均匀沉积管底，边缘整齐，重悬细胞后成均匀的红色悬液。试管法 ：1：标记试管 取试管 3支，分别标记 A， B， O。2：加入样本血清或血浆 血样经 2500r/min离心 3min分离出血浆或血清，在 A， B， O试管中分别加 1滴血浆或血清，3：加标准红细胞悬液 再分别加入 5%A型、 B型、型标准红细胞生理盐水悬液各 1滴，混匀，以1000r/min离心 1min。4：观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。反定型红细胞的
4、 ABO正反定型结果判断正 向 定型 反向定型抗 A 抗 B 抗 A,B A细胞 B细胞 O细胞 - - - + + - O+ - + - + - A- + + + - - B+ + + - - - AB判断结果注意事项：1.严格标记，器材干燥洁净，防止溶血，避免交叉污染。2.试管法出现溶血现象，表明存在抗原 抗体反应并有补体激活。3.46个月以内婴儿反定型可能不凝集或凝集很弱，年老体弱者抗原较弱，最好用试管法鉴定血型。4.亚型红细胞抗原较弱，凝集较弱。5.防止冷凝集素的干扰。6.某些疾病可能使红细胞定型困难： 严重的肠道细菌感染出现类 B抗原； 血清中存在病理性冷凝集素； 部分高球蛋白与异常球蛋白症患者。毛细血管采血标准操作程序 操作步骤 1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜 ,6月以下婴幼儿通常选拇指内侧或足跟两侧采血。 2 轻轻按摩采血部位。 3 用棉签蘸取消毒液消毒局部皮肤、待干。 4 紧捏刺血部位 ,使其自然充血。 5 用无菌刺针穿刺 ,动作应迅速 ,深度 2 3mm,稍加挤压以血液流出为宜。 6 用干棉球擦去第一滴血。 7 按需要依次采血。 8 采血完毕 ,用干棉球压住伤口 ,止血 3min。
