1、BETTER实验三 牛津杯法抑菌试验（杯碟法）u扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。 u由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实验室和基层单位所采用n 稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（生长情况，判断其最低抑菌浓度（ MIC）。n 扩散法扩散法 药敏试验n 抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑，测试抗菌药在体外
2、对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药治疗选药 n 药敏试验方法主要有两种，即扩散法和稀释法。药敏试验方法主要有两种，即扩散法和稀释法。其中扩散法属手工测试方法，通过测试药物纸片其中扩散法属手工测试方法，通过测试药物纸片或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小，判或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。断细菌对该种药物是否敏感。n 稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通过测试稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培养
3、基内的生长情况，判细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（断其最低抑菌浓度（ MIC）。）。 n 由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实验室和基层单位所采用。验室和基层单位所采用。n 扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。 u 将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，
4、离杯越远抗生素浓度越小。大，离杯越远抗生素浓度越小。u 在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。，形成透明的抑菌圈。u 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度（抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌试药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌试验）。验）。一、实验原理u抗生素浓度越高，抑菌圈越大。抗生素浓度越高，抑菌圈越大。u在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的
5、最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（ MIC） 。u抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关，即抑菌圈愈大，呈负相关，即抑菌圈愈大， MIC愈小。愈小。一、实验原理二、实验材料n 培养基：培养基： 牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基n 菌种：菌种： 大肠杆菌（大肠杆菌（ E.coli)金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus) 枯草芽孢杆菌（枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis)n 药品：阿莫西林、黄芪多糖、药品：阿莫西林、黄芪多糖、n 其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器其他：牛津杯、培
6、养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、移液枪、 1mL、 200uL 枪头、枪头、 恒温培养箱、恒温培养箱、 超净超净工作台、接种环工作台、接种环n “牛津杯牛津杯 ”是放被测抗生素的不锈钢小管，小是放被测抗生素的不锈钢小管，小管内径为管内径为 6mm，外径为，外径为 8mm，高，高 10mm的圆的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。筒形管子，管子的重量尽可能相等。 牛津杯三、实验操作1. 倒平板倒平板 ：将已灭菌的琼脂培养基加热到完：将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿约全融化，倒在培养皿内，每皿约 20ml，凝，凝固。固。2. 标记标记 ：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度浓度3. 制备菌悬液制备菌悬液 ：用生理盐水洗下试管内的菌：用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。苔并稀释。4. 菌液涂布菌液涂布 ：吸取：吸取 1mL 菌液入平板表面，用菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀涂布器涂布将菌液涂布均匀
