1、布病检验技术及研究玉门市疾控中心 世卫组织建议的检测包括： 虎红平板试验 (RBT) 血清凝集试验 (SAT) Coombs试验 补体结合试验 (CFT) ELISA 荧光偏振 布氏菌培养 PCR 世卫组织 未 具体确定流程、取舍值和检测特征（诊断灵敏性和特异性） 没有明确的阳性和阴性预测值（ PPV & NPV）结论 取舍值（及灵敏性 /特异性）因抗原来源和流程差异而不同，有待优化 PPV和 NPV取决于疾病的流行程度，有待确立建议 开展检测前，应在设计适当的环境中确定诊断功效（灵敏性、特异性、 PPV和 NPV等）实验室检查方法实验室检查方法（一） 外周血象u白细胞 计数正常或偏低。u淋巴
2、细胞 相对或绝对增加，可出现少数异型淋巴细胞。u血沉 在急性期加快，慢性期则正常或偏高，持续增速提示有活动性。（二） 病原学检查u取血液、骨髓、组织、脑脊液等做 细菌培养 ，急性期培养阳性率高。（三） 免疫学检查u平板凝集试验 虎红平板 （ RBPT）或平板凝集试验（ PAT）结果为阳性，用于 初筛 。u试管凝集试验（ SAT） 用于确诊。u补体结合试验（ CFT） 滴度 1： 10 +及以上。u布鲁氏菌病抗 -人免疫球蛋白试验（ Coombs） 滴度 1： 400 +及以上。一、虎红平板凝集试验（一、虎红平板凝集试验（ RBPT）原理 ：虎红平板凝集试验 (RBPT)中所用的抗原是酸化性（
3、PH=3.6-3.9）带色抗原，与被检血清作用时能抑制血清中 IgM类抗体凝集活性，检查出的抗体是 IgG类。目的、对布病的诊断意义排除某些非特异性凝集及某些其它细菌共同抗原与抗布氏菌血清出现的交叉反应，是一种快速、简便而有效的实验。该法多用于 大规模筛选 。样品（标本）采集要求及采样量用灭菌注射器无菌操作采取静脉血 5ml置于无菌一次性采血管内 (不加任何抗凝剂的空管采血 3-5ml)，置斜面，分离血清。所需试剂、仪器设备、试验环境条件清洁脱脂玻片或凹形孔的玻片、 1ml吸管或微量加样器、微型玻璃搅棒（可用牙签替代）、虎红平板凝集抗原、被检血清。操作步骤在玻片上加 0.04ml被检血清，然后
4、加入虎红平板抗原 0.04ml，摇匀或用玻璃搅棒混匀，在 5min内判定结果。质量控制所用器材洁净，试剂标准，并在有效期内使用，所加剂量必须准确。血清标本不得发生溶血结果判定 在 5min内出现可见的凝集现象为阳性反应无凝集现象出现为阴性。工作时限要求个案病例，送检材料 2日内完成，大批量样本不得超过 7日。如全血不能及时分离血清，可冷藏 4C 保存，但保存期不得超过 3日。血清可冷冻保存，保存期不得超过 2月。优点：简便、快速、易掌握，敏感性较好；可作为筛查试验；经济、方便。注意事项： 1）观察结果在自然光状态下。2）混合液体面积尽量大，使得抗原和 血清中抗体充分反应。二、试管凝集试验（二、
5、试管凝集试验（ SAT）原理： SAT是一种特异、较敏感、稳定的检测方法，可以检测人、畜血清中的抗布鲁氏菌 IgG、 IgM、 IgA 3类免疫球蛋白，且 SAT检测 IgM的敏感性较高，因此可作为布鲁氏菌病的早期诊断，同时又可用于布鲁氏菌病疫苗免疫后血清抗体的检测。应用： 试管凝集试验（ SAT）的应用已有近百年历史，国内外成功地应用到人、畜间布鲁氏菌病的诊断上。实践证明该试验时一种简便异形，有一定 特异性和敏感性 的布病诊断方法。 SAT试验 操作简便，判定容易 ，因此有广阔的应用前景。检测 IgM的敏感性较高。（布病主要产生 IgM、 IgG两种抗体）样品（标本）采集要求及采样量 用灭菌注射器无菌操作抽取静脉血 5ml、 3000转 /分离心 15min分离血清备检。试剂及器材试管凝集抗原、被检血清、阳性血清、稀释液（ 0.9%生理盐水） ； 1ml、 10ml 吸管、试管架、 37 温箱、离心机等抗原稀释 标准比浊管配置SAT阳性对照被检血清操作步骤
