1、 第七章 色谱法色谱法：利用物理或化学的方法将混合物组分分开然后进行鉴别和定量的方法 原理 :相对运动的两相 利用混合物中各组分与两相亲和力不同而分开。 用途：用作药物的鉴别、含量测定、杂质检查等方面特点：高灵敏度，高选择性 高效率、应用范围广流动相 固定相 分类：根据操作条件的不同分类柱色谱法纸色谱法薄层谱法气相色谱法高效液相色谱法第一节 柱色谱 一、柱色谱的组成及分离原理1、组成：玻璃管：高径比 2030： 1固定相： Al2O3 或硅胶（ sio2XH2O ）流动相：各种极性的有机溶剂（洗脱剂）2、分离原理：混合物 色谱柱 分别收集 A(极性大 )B(极性中 )C(极性小 )洗脱剂 影响
2、分离因素： （ 1）各组分极性 （ 2） 洗脱剂极性 （ 3）吸附剂的活性A(最后出柱 )B(第二出柱 )C(首先出柱 )显色荧光分段3、吸附剂和洗脱剂的选择（ 1） 吸附剂碱性： PH=910用于烷烃、胺、生物碱氧化铝 中性： PH=7.5 用于醛、酮、醌、酯 色谱专用 粘度： 100-150目酸性： PH=4-4.5 用于有机酸的分离（ 2）溶剂和洗脱剂溶剂的要求： 不与吸附剂起化学反应 极性小，用量体积小可溶解样品。洗脱剂：极性适中使各组分分开极性：石油醚（烷烃）苯乙醚氯仿丙酮醇水酸，必要时采用混合溶剂或梯度洗脱。二、实验步骤：1、装柱 干法 湿法 （ 1）柱均匀不能有气泡裂缝（ 2）上
3、层盖脱脂棉、滤纸（ 3）上端保持一段溶剂（ 4）吸附剂高度为混合物 注意事项2、加样及洗脱 分段收集洗脱液 纯品 注意事项：（ 1）连续加入吸脱剂防止干涸；（ 2）采用等分收集洗脱液；（ 3）控制洗脱剂流出速度色谱分离过程三、应用实例： 1、维生素 K1注射液的含量测定（Ch.P2000）维生素 K1用植物油配成油溶性注射液，都有紫外吸收，采用柱分离。 维生素 K 植物油 其它 戊烷 提取 V K1 植物油 中性 A1203色谱柱 乙醚戊烷 (1:49) 洗脱 lml/min收集洗脱液 紫外吸收 计算含量 (入 249处 =420)2、阿斯匹林制剂中 ASP含量，测定及水杨酸杂质检查（ USP
4、.23）采用柱色谱紫外分光度法。第二节 薄层色谱 一、薄层色谱的构成及原理1、组成：（ 1）玻璃板： 510cm等（ 2）吸附剂： A1203 或硅胶 极性强的展开剂与吸附剂作用强其洗脱力强极性弱的展开剂与吸附剂作用弱其洗脱力弱（ 4） 层析缸应密闭用蒸汽饱和混合溶剂 （ 3）流 动相 展开剂 单一溶剂 薄层色谱2、分离原理 （ 1）将 A、 B两种混合物点样在薄层板的一端，在密闭层析缸中用流动相（展开剂）展开， A、 B不断地被吸附剂吸附，又被展开剂溶解，由于 A、 B结构不同，与吸附剂作用大小不同，因此 A、 B迁移速度不同，因此 A与 B分开。纸层析（ 2）比移值 (Rf)组分的迁移距离与展开剂的迁移距离之比称为比移值 (Rf)Rf 的最佳范围 0.3-0.5 Rf的可用范围 0.2-0.8 条件一定情况下 Rf为常数Rf是定性的依据 对比文献手册法对照品法 讨论：（ 1）组分极性强 Rf？（ 2）吸附剂吸附强（级别可选择） Rf？（ 3）展开剂的性质：展开剂极性强 Rf？结论：为了使 Rf符合要求 应兼顾组分极性，吸附剂活性、展开剂极性。（ 3）分离度：两相邻斑点的中心距离与两斑点平均宽度的比值又称分离度（分辨率）R= d、两点中心距离W1、斑点 1的宽度W2、斑点 2的宽度R 1 5时符合要求，可完全分离
