1、第二节 光学分析v 一、原子吸收光谱v 二、紫外 可见分光光度法v 三、红外分光光度法v 四、 荧光分光光度法v 五、有机质谱法五、荧光分子光度法v （一）基本原理v （二）荧光分光光度计v （三）特点、方法与应用荧光（ fluorescence）现象的第一次记录：1575年，西班牙内科医生和植物学家 N. Monardes，观察到 Lignum Nephriticum木头切片的水溶液呈现天蓝色。第一次被提议用于分析：1864年， Stokes第一次用于分析：1867年， Goppelsrder根据 Al-桑色素配合物的荧光，建立了 Al3+的荧光测定方法。v 当物质分子吸收了一定波长的紫外光
2、能之后，基态电子跃迁到第一激发态，处于激发态的电子首先以无辐射的方式下降到第一激发态的低能级，而后再回到基态时，所发射出的光称为荧光。v 荧光是一种以光能为激发源的发射光，且波长比激发态波长更长，所以，利用物质的荧光现象而建立的分析方法称为荧光分光光度法。（一）基本原理荧光定量分析原理v 荧光是由物质在吸收光能之后产生的发射光，其荧光强度与物质吸收光能的程度和产生荧光的物质有关。v 荧光效率 反映荧光强度的重要参数v 荧光强度 If 应与荧光物质的吸光强度 ( I0 I )和荧光效率成正比，即 If = ( I0 I )v 根据朗伯 比尔定律，和有关的运算，在一定的条件下，得： If = 2.
3、3 I0cl = Kc （二）荧光分析光度计光源激发单色器样品池 发射单色器 检测器信号处理显示I0IfI荧光分光光度计部件1 光源： 钨灯、汞灯、氙灯、激光激发光源应具有稳定性好、强度大、适用波长范围宽等特点。其中稳定性：影响测定的重现性和精密度；强度：影响测定的灵敏度。2 单色器： 滤光片、光栅激发单色器和发射单色器3 检测器PMT PhotomultiplierCCD Charge Coupled Device CID Charge Injected Device 4 信号处理Jobin Yvon Fluorolog-3 荧光光谱仪1. 稳态： S/N min 4000:1(光子计数和全反射光路 )2. 10us-10s 以上 (磷光寿命 ) 10ps-10us(荧光寿命 )3. 波长范围： 200-900nm (UV-VIS-NIR)4. 扫描速度： 150nm/sv 灵敏度高： 比紫外 -可见分光光度法高 2 4个数量级； 检测下限： 0.1 0.1 g/cm-3相对灵敏度： 0.05-0.005ppb（ 0.05M H2SO4)v 选择性高v 重现性好v 取样量少v 仪器不复杂 （三）荧光分析方法的特点、方法及应用 1特点
