1、医学微生物学医学微生物学（ 细菌感染的实验室诊断及消毒灭菌细菌感染的实验室诊断及消毒灭菌 ）严杰，教授医学博士Department of Medical Microbiology and ParasitologyZhejiang University School of MedicineHangzhou, P.R. China 标本的采集与送检：（ 1）采集标本应注意 无菌操作 ，尽量避免杂菌污染。（ 2）根据患者病程、细菌在体内分布及从人体排出途径的不同，采集相应的标本。一般情况下，应在病变最明显部位采集标本。（ 3）使用抗生素之前采集标本，否则应在分离培养时加入药物拮抗剂。采集标本时不可用
2、消毒剂，必要时可用生理盐水冲洗，擦干后取材。（ 4） 标本必须新鲜，采集后及早送检。在送检过程中，除少数不耐寒的脑膜炎球菌等细菌需保温外，多数菌的标本均需冷藏送运。（ 5）检测特异性抗体时尽量采取急性期与恢复期 双份血清 。第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后 2 3周采取。血清标本放 4 或 -20 保存，试验前血清标本 56 处理 30分钟以灭活补体。细菌感染的实验室诊断 标本染料、荧光染色后 直接显微镜检查 。 细菌的分离培养与鉴定：菌落 (colony)： 采用分离划线接种法将细菌临床标本接种于固体培养基上，经过培养后出现肉眼可见、单个细菌分裂繁殖形成的细菌集落 (纯种细菌 )
3、。不同细菌大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐或不整齐、溶血情况等均可能有所不同， 有助于鉴定细菌 。染色镜检、 生化试验、血清学试验 (已知抗体测抗原 ) 药物敏感试验： 选择敏感抗生素。 细菌标本常规病原学检查 多聚酶链反应 (polymerase chain reaction， PCR)：提取细菌临床标本总 DNA或 RNA，采用 16 S RNA编码基因或其他靶基因特异性引物对进行 PCR或 RT-PCR扩增，反应产物用溴乙锭染色的琼脂糖凝胶电泳观察，目前多采用封闭式实时荧光定量 PCR或 RT-PCR检测。 PCR优点与缺点： 优点是快速、敏感、特异，
4、缺点是不能获得活菌。 细菌标本分子生物学检查： PCR/RT-PCR 血清学检查 (serological examination)： 病原菌侵入人体可刺激机体免疫系统产生特异性血清抗体，抗体水平可随细菌感染过程逐渐升高价升高。用已知的抗原检测病人体液（主要为血清）中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为某些感染性疾病的诊断或辅助诊断。 多数血清学诊断通常采取患者双份血清，一份在疾病的急性期，另一份在恢复期（一般为 2 6周后），当第二份抗体效价较第一份 升高 4倍及以上 才有诊断价值。 单份血清 检查结果根据该病 效价判断标准 进行判定。 IgM出现早、消失快，可用于血清学早期诊断。 方法：
5、 ELISA、直接或间接凝集试验、中和试验等。血清学检查或诊断 人工主动免疫： 接种疫苗，是预防传染病常用方法，免疫力出现慢但维持时间长 。 疫苗种类： 目前使用的有全菌死疫苗、减毒活疫苗 、基因工程疫苗、类毒素疫苗。 人工被动免疫： 主要是抗毒素 (外毒素中和抗体 )。免疫力出现快但维持时间短。抗毒素是动物血清，使用前做皮试防止发生过敏反应。 抗生素治疗： 青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类。 细菌对抗生素可产生耐药性，临床使用抗生素时应遵守如下原则： 选择敏感抗生素； 剂量合适； 长期使用时交替用药； 联合用药。 细菌感染的防治原则 灭菌 (sterilization)：
6、杀灭所有微生物的方法，包括病原微生物、非病原微生物及芽胞。 消毒 (disinfection)：杀灭病原微生物的方法，但不一定能杀死非病原微生物，一般不能杀灭芽胞。消毒剂。 抑菌 (bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌生长繁殖的方法。如抗生素。 防腐 (antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。防腐剂。 无菌 (asepsis) ：不存在活的微生物。 无菌操作： 防止微生物进入人体或物品的操作技术。 消毒与灭菌 干烤 ：用干烤箱 160 加热 2 h可达到灭菌效果，适用于耐高温的玻璃器皿等物品。 高压蒸汽灭菌法： 使用高压蒸汽灭菌器 121 加热
7、15 20 min可达到灭菌效果。 煮沸法： 细菌繁殖体在沸水中 5 min可被杀死。 巴氏消毒法： 61.1-62.8 加热 30 min和 72 加热 15 s，目前主要用于酒类、疫苗的消毒。 常用消毒与灭菌法 紫外线消毒法： 以 265 266 nm紫外线能使 DNA一条链中相邻的两个胸腺嘧啶形成二聚体，干扰了 DNA复制与转录而导致细菌死亡。 紫外线穿透力弱，仅用于空气和物体表面消毒。 常用消毒与灭菌法 电离辐射 ： 常用 60Co对一次性医用塑料制品进行灭菌，也可用于食品、药品和生物制品的灭菌（工业用）。 滤过除菌法 ： 0.22 m孔径 滤器可除去细菌， 0.10 m孔径可除去支原体。 低温抑菌法： 抑菌不杀菌。 真空冷冻干燥法 ： 细菌悬液冻结，负压使水分升华后干燥，可长期保存菌种。 化学消毒剂： 75% 乙醇 ，其他浓度高、时间长、效果好。 常用消毒与灭菌法
