1、柱色谱Column chromatography,一、实验要求与目的,1、掌握色谱法的基本原理,2、学会利用柱色谱分离提纯 有机化合物的规范操作,二、实验原理,流动相,1、基本原理： 利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他亲和作用的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。,固定相,2、分类： 柱色谱 纸色谱 根据操作条件分为 薄层色谱 气相色谱 液相色谱,3、柱色谱（柱层析）（1）在薄层色谱的基础上，进行混合物的分离（2）分类：吸附型（Al2O3、硅胶G等作吸附剂） 分配型（硅藻土、纤维素等作支持剂）（3）吸附柱色谱 1）
2、吸附剂：一般采用表面积很大，经过活化的多孔 性或粉状的固体 氧化铝（酸性、中性、碱性） a、用前应纯化并在105-110活化0.5h，于烘 箱中自然冷却 b、采用勃劳克曼（Brockmann）标准测定法进行 吸附剂活性等级的测定 c、吸附剂用量 被分离样品：吸附剂量=1：30-40或100倍,2）混合溶液1-2ml偶氮苯和苏丹 的混合液3）洗脱剂：a、溶剂的结构与吸附能力的关系 化合物的吸附性与它们的极性成正比即极性大 吸附力强，后洗脱 b、洗脱剂的选择 第一，先极性小的，再极性大的 可以是单一溶剂，也可是混合溶剂 第二，溶剂纯度要高并经干燥过的4）色谱柱的装填分为： 干法和湿法两种 柱高和柱
3、直径之比=7.5 ：1,三、装置图,装柱,洗脱,四、主要试剂及其物理常数,偶氮苯,苏丹,中性三氧化二铝,苯,乙酸乙酯,五、实验操作步骤,1、装柱：干法装填，边加边轻敲柱子，注意松紧度2、混合液的加入：用滴管或量筒沿壁加入3、洗脱：先用极性小的溶剂洗脱吸附性小的物质，再用极性大的 溶剂洗脱吸附性强的物质。始终保持吸附剂顶部有少量 溶剂，加溶剂时勿将吸附剂冲起4、产品收集：分别收集不同颜色的产物及洗脱剂， 并量取和记录各自的体积,干法装柱、湿法加样、梯度洗脱,六、注意,1、吸附剂的选择和活化2、洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗 脱，再用极性大的溶剂洗脱3、装柱的技术：松紧度4、吸附剂的用量：5、柱高：柱子太高洗脱慢,问题：,1、 色谱法的基本原理?2 、柱色谱与薄层色谱之间有怎样的区别与联系3 、如何选择洗脱溶剂？4 、干法装柱与湿法装柱时，应该注意哪些问题？5、 色谱柱如何清洗和干燥?6、 色谱柱一般的直径和高度比例是多少?7 、柱色谱分为几类?分别用什么作吸附剂?8、 常用的三氧化二铝吸附剂分为几种?9、 吸附剂在使用前必须如何处理?10、 测定吸附剂活性等级的方法叫什么?11、 被分离样品的量与吸附剂用量之比是多少?12、 洗脱时要注意些什么?,
