第六章 重组体的筛选与鉴定转化子: 在 DNA分子克隆中,通常将导入外源 DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子;重组子: 含有重组 DNA分子的转化子;期望重组子(目的重组子): 含有外源目的基因的重组子。*为什么要进行筛选和鉴定?( 1)不带任何外源 DNA插入片段,仅由线形载体分子自身连接形成的环状分子;( 2)由一个载体分子和数个外源 DNA片段组成的重组分子;( 3)单纯由数个外源 DNA片段连接而成的多聚 DNA分子; 转化后的克隆群体:转化后的克隆群体:*鉴定的方法有哪些?载体表型选择法根据插入序列的表型特征选择DNA电泳检测法核酸杂交检测法免疫化学检测法转译筛选法第一节、载体表型选择法根据载体所携带的标记基因的表型进行选择。一、抗药性标记插入失活选择法二、 -半乳糖苷酶显色反应选择法一、抗药性标记插入失活选择法插入效应 :外源 DNA片段与载体特定部位连接后,使载体的相关功能发生改变,为重组子的筛选提供信息。插入失活插入表达抗药性插入失活 指的是外源 DNA插入载体的抗药性筛选标记中,导致该基因结构破坏而失活,使细胞丧失对抗生素抗性的功能。 transfer of colonies+ampicillin + ampicillin+ tetracycline这些克隆是有重组质粒的细菌lacZAmN2H片段片段COOH片段片段二、 -半乳糖苷酶显色反应选择法