1、实验十七 偶氮胂 法测血钙 血浆中约含钙 2.1mmol/(8.4 10.2mg/dl)，以三种形式存在： 非扩散钙 (non-difusional calcium)：是指与血浆蛋白相结合的钙，占血浆总钙的 45%； 离子钙 (ion calcium)：是具有生理活性的部分，约占血浆总钙的 50%； 络合钙 (chelating calcium)：主要指与枸橼酸结合的钙，是体内钙的一种运输方式，约占血浆总钙的 5%左右。钙离子和络合钙都能透过毛细血管壁，故统称为扩散钙。血钙的测定方法很多，一般可分为总钙测定和离子钙测定法。前者包括同位素稀释质谱法(isotope diluting mass s
2、pectrometry)、原子吸收光谱法 (atomic absorption spectroscopy， AAS)、分光光度法 (spectrophotography)和络合滴定法 (chelating titration)等。 AAS是最常用的准确测定血浆总钙含量的参考方法，但费用昂贵，不适于常规工作；分光光度法中以甲基百里香酚蓝比色法（ methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂 比色法（ Arsenazo colorimetry）最常用。络合滴定法简便易行，但判断终点受主观因素影响，有被淘汰趋势，但不少基层实验室仍延用。离子选择电极法测定离子钙已在临床广泛应
3、用。分光光度法已被广泛用自动生化分析议分析。【 实验原理 】在碱性条件下，样品中钙与偶氮胂 作用生成蓝色复合物，其颜色深浅与钙浓度成正比，通过在 660nm波长处测定吸光度的变化值，与经过同样处理的钙校准液进行比较，即可计算出样品中钙含量。【 操作步骤 】 测定管（ U） 标准管（ S） 空白管（ B） 试剂（ ml） 2.0 2.0 2.0 37 恒温 5分钟 蒸馏水（ ml） - - 0.02 标准液（ ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混匀， 37恒温 2分钟， 660nm波长，以空白管调零，测定各管吸光度。 【 计算 】 样品钙含量（ mmol/L） = 2.50 【
4、参考范围 】 血清钙： 2.1 2.6mmol/L 【 临床意义 】 （ 1）低钙血症见于 摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻塞性黄疸； 需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女； 吸收减少：佝偻病、甲状旁腺功能减退症； 肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合征、肾小管性酸中毒； 坏死性胰腺炎。 （ 2）高钙血症见于 摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶等； 原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高； 服用维生素 D过多，钙吸收作用增强； 骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多发性骨髓瘤等，骨溶解增加； 具有异位内分泌作用的肿瘤； 长期制动引起骨骼脱钙。 【 评价 】 1. 线性范围： 0.00 6.00
5、mmol/L， 0.99。2. 精密度：批内、批间平均 CV分别 5.0%3. 准确度：不准确度 10%4. 试剂空白吸光度值 0.35。 【 注意事项 】 1. 样品中钙含量超过 5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定 2小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有钙污染。6. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。7. 试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。8. 使用肝素作为抗凝剂时浓度不能太高，每毫升血液中肝素浓度应小于
6、50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、 EDTA等作抗凝剂。实验十七 钙镁试剂比色法测血镁 【 目的要求 】 1.掌握比色法测血镁 2.熟悉血镁测定的其他方法 【 实验原理 】 血清中的镁在碱性条件下，与金属色原染料钙镁试剂（calmagite)反应生成紫红色络合物。颜色深浅与美的浓度成正比，与同样处理的标准品比较，可以求得镁的含量。【 操作步骤 】 测定管（ U） 标准管（ S） 空白管（ B） 试剂（ ml） 2.0 2.0 2.0 37 恒温 5分钟 蒸馏水（ ml） - - 0.02 标准液（ ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混匀， 37恒温 2分钟， 540nm波长，
7、以空白管调零，测定各管吸光度。【 计算 】样品镁含量（ mmol/L） = 1.0【 参考范围 】 血清镁： 0.67 1.04mmol/L【 评价 】 1. 线性范围： 2.0mmol/L10%。2. 精密度：批内、批间平均 CV分别 5.0%3. 准确度：不准确度 10%4. 试剂空白吸光度值 1.10。 【 注意事项 】 1. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定 1小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有镁污染。6. 所用试剂具有毒性和腐蚀性，请勿用口吸吸管，如有污染，应立刻用大量流水冲洗。
