1、单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版副标题样式* 1标记免疫技术医学检验系临床微生物学及免疫学教研室二 OO四年三月免疫学及免疫学检验标记 免疫技术 =抗原抗体反应 示踪物标记灵敏性特异性标记免疫技术的主要特点：高特异性 、 高灵敏性免疫技术 +标记技术来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验标记免疫技术免疫测定技术免疫组化技术示踪物及标记技术放射免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术化学发光技术金免疫技术来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验第八章 放射免疫技术类型：l 放射免疫分析（ radioimmunoassay,RIA）l 免疫放射分析（ immunoradiometric
2、 assay,IRMA）广义放射免疫技术还包括放射受体分析（使用受体测量抗原）和放射配体结合分析（使用配体研究受体）。特点 :灵敏度高 (10-9-10-15g/L)、特异性强、重复性好等 来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验标记物 :常用的核素有两大类 射线： 131I、 125I、 57Cr和 60Co 射线： 14C、 3H和 32P。使用最广泛的是： 125I 性质活泼、易制备标记物 对被标记物的免疫活性影响小 测量方法简便、已推广 半衰期较长、核素丰度高来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验标记方法125I的标记原理：取代分子中酪氨酸或酪胺残基及组胺残基上的氢原子方
3、法：l 直接标记法氯胺 T法和乳过氧化物酶法l 间接标记法 联接标记法来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验适用分子 原理 特点 缺点直接标记 肽类、蛋白质、酶存在酪氨酸、组胺残基等基团操作简便、易标记、比放射性高不适于活性功能区的残基标记间接标记 甾类化合物、核苷酸等小分子化合物不存在酪氨酸、组胺残基等基团 ,需添加可避免氧化还原剂对被标记物活性的损伤等添加基团可能影响被标记物活性来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验标记物纯化对游离的 125I等试剂与标记物进行分离方法：分子筛凝胶过滤；离子交换层析；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE）；高效液相色谱（ HPLC）来自 中国最大
4、的资料库下载 免疫学及免疫学检验标记物鉴定l放射化学纯度 单位标记物中结合在被标记物上的放射性占总放射性的百分率。一般要求大于 95。l免疫活性 标记过程中，被标记物活性损伤程度。 B/T 80， B/T 抗原损伤 。l比放射性 单位化学量标记物中所含的放射性强度 . 常用 Ci/g、 mCi/mg、 Ci/mmol等单位表示。比放射性 方法更灵敏；过高 辐射自损伤大，对标记物免疫活性影响大，储存稳定性差 。来自 中国最大的资料库下载 免疫学及免疫学检验抗血清鉴定多克隆抗体的抗血清是放射免疫分析的主要试剂之一，其质量直接影响方法的特异性和灵敏度。l亲合力 选用亲和常数 K值大 (1091012 L/mol)抗血清l特异性 其程度可直接影响结果的准确性 l滴度 最大稀释度。在本技术方法中是指结合 50标记抗原时的抗血清的稀释度。来自 中国最大的资料库下载
