1、高中生物选修 3 答案与提示专题 1 基因工程1.1 DNA 重组技术的基本工具一、学习目标1.简述 DNA 重组技术所需三种基本工具的作用。2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。二、学习重点和难点1.学习重点：DNA 重组技术所需的三种基本工具的作用。2.学习难点：基因工程载体需要具备的条件。三、答案与提示（一）思考与探究2.联系你已有的知识，想一想，为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的 DNA？提示：迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断 DNA 上特定的碱基序列。细菌中限制酶之所以不切断自身 DNA，是因为微生物在长期的
2、进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的 DNA 可以降解掉。生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其 DNA 分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的 DNA 被切断，并且可以防止外源 DNA 的入侵（本题不要求学生回答的完全，教师可参考教师用书中的提示，根据学生的具体情况，给予指导。上述原则也应适用于其他章节中有关问题的回答。 ） 。3.天然的 DNA 分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？提示：基因工程中作为载体使用的 DNA 分子很多都是质粒（plasm
3、id） ，即独立于细菌拟核处染色体 DNA 之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的 DNA 分子。是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？其实不然，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件。（1 ） 载体 DNA 必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。（2 ） 载体 DNA 必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体 DNA 上随染色体 DNA 的复制而同步复制。（3 ） 载体 DNA 必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。（4 ） 载体
4、DNA 必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。（5 ） 载体 DNA 分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒 DNA 分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。4.网上查询：DNA 连接酶有连接单链 DNA 的本领吗？提示：迄今为止，所发现的 DNA 连接酶都不具有连接单链 DNA 的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链 DNA 的酶。（二）寻根问底1.根据你所掌握的知识，你能分析出限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？提示：原核生物容易受到自然界外源 DNA 的入侵，
5、但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源 DNA 侵入时，会利用限制酶将外源 DNA 切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源 DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。2. DNA 连接酶与 DNA 聚合酶是一回事吗？为什么？答：不是一回事。基因工程中所用的连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为 Ecoli 连接酶。另一种是从 T4 噬菌体中分离得到，称为 T4 连接酶。这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链 DNA 的缺口（nick） ，而不能连接单链 DNA。DNA 连接
6、酶和 DNA 聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的 3 位碳原子上的羟基与 5 位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成） ，那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？（1 ） DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的 3末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而 DNA 连接酶是在两个 DNA 片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与 DNA片段之间形成磷酸二酯键。（2 ） DNA 聚合酶是以一条 DNA 链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的 DNA 链；而 DNA 连接酶是将 DNA 双链上的两个缺口同时连接起来。因此 DNA 连接酶不需要模板。此外，二者虽然都是由蛋白
7、质构成的酶，但组成和性质各不相同。（三）模拟制作讨论题1. 你模拟插入的 DNA 片段能称得上一个基因吗？提示：不能。因为一般基因有上千个碱基对。2. 如果你操作失误，碱基不能配对。可能是什么原因造成的？提示：可能是剪切位点或连接位点选得不对（也可能是其他原因） 。（四）旁栏思考题想一想，具备什么条件才能充当“分子运输车”？提示：能自我复制、有一个或多个切割位点、有标记基因位点及对受体细胞无害等。四、知识拓展1.限制酶所识别的序列有什么特点？限制酶所识别的序列，无论是 6 个碱基还是 4 个碱基，都可以找到一条中心轴线（图 1-1） ，中轴线两侧的双链 DNA 上的碱基是反向对称重复排列的。图
8、 1-1 限制酶识别序列的中心轴线2.限制酶在 DNA 的任何部位都能将 DNA 切开吗？任何一种限制酶都只识别和切断特定的核苷酸序列，这是由限制酶的性质所决定的。3.DNA 连接酶连接的是什么部位？DNA 连接酶是将一段 DNA 片段 3端的羟基与另一 DNA 片段 5端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。1.2 基因工程的基本操作程序一、学习目标1.简述基因工程原理及基本操作程序。2.尝试设计某一转基因生物的研制过程。二、 学习重点和难点1. 学习重点：基因工程基本操作程序的四个步骤。2. 学习难点：（1 ）从基因文库中获取目的基因。（2 ）利用 PCR 技术扩
9、增目的基因。三、 答案和提示（一）思考与探究1.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因即可完成任务吗？为什么？答：不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是：（1 ） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；（2 ） 通过 cDNA 文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录；（3 ） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记；（4 ） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等；（5 ） 有时需要确定目的基因表达的产
10、物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因） ，如绿色荧光蛋白基因等。2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？若想将一个抗病基因导入单子叶植物，如小麦，从理论上说，你应该如何做？提示：农杆菌可分为根瘤农杆菌和发根农杆菌，在植物基因工程中以根瘤农杆菌的 Ti 质粒介导的遗传转化最多。根瘤农杆菌广泛存在于双子叶植物中。据不完全统计，约有 93 属643 种双子叶植物对根瘤农杆菌敏感。裸子植物对该菌也敏感。当这些植物被该菌侵染后会诱发肿瘤。近年来，也有报道该菌对单子叶植物也有侵染能力。根瘤
11、农杆菌侵染植物是一个非常复杂的过程。根瘤农杆菌具有趋化性，即植物的受伤组织会产生一些糖类和酚类物质吸引根瘤农杆菌向受伤组织集中。研究证明，主要酚类诱导物为乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，这些物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常不存在于单子叶植物中，这也是单子叶植物不易被根瘤农杆菌侵染的原因。近年来还发现一些中性糖，如 L-阿拉伯糖、D-木糖等也有诱导作用。酚类物质和糖类物质既可以作为根瘤农杆菌的趋化物，又可以作为农杆菌中 Ti 质粒上 Vir 区（毒性区）基因的诱导物，使 Vir 区基因活化，导致 T-DNA 的加工和转移，从而侵染植物细胞。需要注意的是农杆菌中不同的菌株，侵染能力有差别，在基因
12、工程中需要加以选择使用。利用农杆菌侵染单子叶植物进行遗传转化时，是需要加上述酚类物质的，同时单子叶植物种类不同，农杆菌侵染进行遗传转化的效果也有很大差异。如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点：要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的 Vir 区（诱导）的基因，使 T-DNA 转移并插入到染色体 DNA 上。3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以
13、用大肠杆菌吗？提示：有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。4.-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的 -珠蛋白，想一想，应如何进行设计？提示：基本操作如下：（1 ）从小鼠中克隆出 - 珠蛋白基因的编码序列（cDNA ） 。（2 ）将 cDNA 前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。（3 ）将表达载体
14、导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明 -珠蛋白基因已进入其中。（4 ）培养进入了 - 珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取 - 珠蛋白。（二）求异思维你能推测出由 mRNA 反转录形成 cDNA 的过程大致分为哪些步骤吗？提示：1970 年，特明（H.M. Temin）和巴尔的摩（D. Baltimore）证实了 RNA 病毒中含有一种能将 RNA 转录成 DNA 的酶，这种酶被称为依赖 RNA 的 DNA 聚合酶，由于与中心法则中的从 DNA 到
15、 RNA 的转录是反向的，所以称为反转录酶（reverse transcriptase） 。反转录酶既可以利用 DNA 又可以利用 RNA 作为模板合成与之互补的 DNA 链。像其他 DNA聚合酶一样，反转录酶也以 53 方向合成 DNA（图 1-3） 。图 1-3 由 mRNA 反转录形成 cDNA 的过程cDNA 合成过程是：第一步，反转录酶以 RNA 为模板合成一条与 RNA 互补的 DNA 单链，形成 RNA-DNA 杂交分子。第二步，核酸酶 H 使 RNA-DNA 杂交分子中的 RNA 链降解，使之变成单链的 DNA。第三步，以单链 DNA 为模板，在 DNA 聚合酶的作用下合成另一
16、条互补的DNA 链，形成双链 DNA 分子。（三）寻根问底1.为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，即可通过 PCR 方式从含有该基因的生物的 DNA 中，直接获得，也可以通过反转录，用 PCR 方式从 mRNA 中获得，不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列
17、，往往就需要构建基因文库。2.将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？提示：有人采用总 DNA 注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总 DNA 提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。四、 知识拓展1.PCR 的扩增过程是怎样的？PCR 扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。PCR 的扩增反应过程包括以下几个主要过程。第一步：将反应体系（包括双链模板、引物、耐高温的 DNA 聚合酶、四种脱氧核糖
18、核苷酸以及酶促反应所需的离子等）加热至 9095 ，使双链 DNA 模板两条链之间的氢键打开，变成单链 DNA，作为互补链聚合反应的模板。第二步：将反应体系降温至 5560 ，使两种引物分别与模板 DNA 链 3端的互补序列互补配对，这个过程称为复性。第三步：将反应体系升温至 7075 ，在耐高温的 DNA 聚合酶催化作用下，将与模板互补的单个核苷酸加到引物所提供的 3-OH 上，使 DNA 链延伸，产生一条与模板链互补的DNA 链。上述三步反应完成后，一个 DNA 分子就变成了两个 DNA 分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以 2n 的形式增加。PCR 的反应过程都是在 PCR 扩增仪中
19、完成的。2.如何从基因文库中找到所需要的基因？从基因文库中找到目的基因是一件比较复杂的事情，要根据目的基因已有的某些信息来进行。下面介绍一种根据基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。第一步，通过 PCR 方法将目的基因已知的部分核苷酸序列扩增出来，进行放射性同位素标记（也可以用别的标记方法进行，如生物素、荧光素等） ，即用标记了放射性同位素的目的DNA 片段作为探针，与扩增出来的 DNA 杂交。第二步，将基因文库中的所有菌落转移至硝酸纤维膜上（也可以用其他类型的膜） ，然后，通过处理溶解消化掉细菌中的蛋白质，并使 DNA 固定在膜上。第三步，按 Southern 杂交的方法进行杂交。第四步，
20、在 X 光底片上出现黑斑的菌落，这表明这个菌落中含有所需要的目的基因（若选用别的标记方法，有阳性信号的菌落则含有所需要的目的基因） 。第五步，从该菌落中再提取目的基因。3.基因工程载体的构建需要考虑哪些方面的因素？道理何在？主要考虑以下几方面的因素。（1 ）基因的特点：如果一个来自动物的目的基因含有内含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的内含子剪切掉，只能用该基因的 cDNA。基因的产物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌中表达出来的58 高中生物选修 3 答案与提示_高中生物选修三蛋白就可能不具备天然状态下的活性，因为糖蛋白上的糖链是在
21、内质网和高尔基体上加上的，而细菌无这些细胞器。（2 ）要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使基因产物量增多。如果希望基因在生物的某个组织表达，如只在植物种子中表达，就要选择种子中特异表达的启动子。（3 ）要有选择标记基因，如抗生素基因，以便选择出真正的转基因生物。4.什么是分子杂交技术的显示带？分子杂交技术是基因工程中使用频率很高的一项技术，主要用于检测和鉴定，可以分为核酸分子之间的杂交和蛋白质分子之间的杂交。常用的技术有：Southern 杂交DNA 和 DNA 分子之间的杂交。目的基因是否整合到受体生物的染色体DNA 中，这在真核生物中是目的基因
22、可否稳定存在和遗传的关键。如何证明这一点，就需要通过 Southern 杂交技术。基本做法是：第一步，将受体生物 DNA 提取出来，经过适当的酶切后，走琼脂糖凝胶电泳，将不同大小的片段分开；第二步，将凝胶上的 DNA 片段转移到硝酸纤维素膜上；第三步，用标记了放射性同位素（或生物素）的目的 DNA 片段作为探针与硝酸纤维素膜上的 DNA 进行杂交；第四步，将 X 光底片压在硝酸纤维素膜上，在暗处使底片感光；第五步，将 X 光底片冲洗，如果在底片上出现黑色条带，则表明受体植物染色体 DNA 上有目的基因。Northern 杂交 DNA 和 RNA 分子之间的杂交。它是检测目的基因是否转录出 mR
23、NA 的方法，具体做法与 Southern 杂交相同，只是第一步从受体植物中提取的是 mRNA 而不是DNA，杂交带的显现也与 Southern 杂交相同。Western 杂交蛋白质分子（抗原抗体）之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。具体做法是：第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗） ；第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。由于这种抗原
24、抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。1.3 基因工程的应用一、学习目标1.举例说出基因工程应用及取得的丰硕成果。2.关注基因工程的进展。3.认同基因工程的应用促进生产力的提高。二、学习重点和难点1. 学习重点：基因工程在农业和医疗等方面的应用。2. 学习难点：基因治疗。三、小资料蛋白、抗凝血酶等）比工厂化生产的优越之处有哪些？（2 ）用基因工程技术实现动物乳腺生物反应器的操作过程是怎样的？第一个问题，既可以解决乳腺生物反应器的优越性问题，而且显示了社会需求是乳腺生物反应器这一创新成果产生的动力
25、。乳腺生物反应器的优点：产量高；质量好；成本低；易提取。第二个问题，用基因工程技术实现动物乳腺生物反应器的操作过程与转基因动物操作过程相同。而不同之处是：为了将目标产品在奶中形成，需要使用乳腺组织中特异表达的启动子，要在编码目的蛋白质的基因序列前加上乳腺组织中特异表达的启动子构建成表达载体。操作过程大致归纳为：获取目的基因（例如血清白蛋白基因）构建基因表达载体（在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子）显微注射导入哺乳动物受精卵中形成胚胎将胚胎送入母体动物发育成转基因动物（只有在产下的雌性个体中，转入的基因才能表达） 。四、 答案和提示思考与探究根据所学内容，试概括写出基因工程解决了哪些生活、生产
26、中难以解决的问题。提示：基因工程可以生产人类需要的药物，如胰岛素、干扰素等。我们吃的某些食品如番茄、大豆等也可以是基因工程产品。农业生产中的抗虫棉、抗病毒烟草、抗除草剂大豆等都已进入商品化生产，上述产品有些是常规方法难以生产的或者生产成本过高。五、 知识拓展1.利用微生物生产药物的优越性何在?所谓利用微生物生产蛋白质类药物，是指将人们需要的某种蛋白质的编码基因，构建成表达载体后导入微生物，然后利用微生物发酵来生产蛋白质类药物。与传统的制药相比有以下优越性：（1）利用活细胞作为表达系统，表达效率高，无需大型装置和大面积厂房即可生产出大量药品。 （2）可以解决传统制药中原料来源的不足。例如，胰岛素
27、是治疗糖尿病患者的药物，一名糖尿病患者每年需用的胰岛素需要从 40 头牛或 50 头猪的胰脏中才能提取到。1978 年科学家用 2 000 L 大肠杆菌发酵液得到 100 g 胰岛素，相当于从 1 000 kg 猪胰脏中提取的量。又如，生长素是治疗侏儒症患者的药物，治疗一名侏儒症患者每年需要从80 具尸体的脑下垂体中提取生长素。利用基因工程菌发酵生产就不需要从动物或人体上获取原料。（3 ）降低生产成本，减少生产人员和管理人员。2.在抗病毒转基因植物中，为什么使用病毒外壳蛋白基因可以抗病毒侵染？关于病毒外壳蛋白（coat protein，CP ）基因导入植物后的抗病毒机理，目前有几种假说。一种假
28、说认为：CP 基因在植物细胞内表达积累后，当入侵的病毒裸露核酸进入植物细胞后，会立即被这些外壳蛋白重新包裹，从而阻止病毒核酸分子的复制和翻译。另一种假说认为：植物细胞内积累的病毒外壳蛋白会抑制病毒脱除外壳，使病毒核酸分子不能释放出来。然而最近的研究表明，如果将病毒的外壳蛋白的 AUG 起始密码缺失，使之不能被翻译，或者将外壳蛋白基因变成反义 RNA 基因，整合到植物细胞染色体上，转基因植物则有很好的抗性。因此，有人认为抗性机理不是外壳蛋白在起作用，而是 CP 基因转录出 RNA 后，与入侵病毒 RNA 之间的相互作用起到了抗性作用。利用 CP 介导的抗病毒性还存在一些问题：转基因植物对病毒的抗
29、性有局限性，仅限于特定的病毒（被使用 CP 基因的病毒）或密切相关的病毒；转基因植物大多数只是发病延缓，一般为两周，并非根治；潜在着植物表达的外壳蛋白包被与另一种病毒形成新的杂合病毒的危险。1.4 蛋白质工程的崛起一、学习目标1.举例说出蛋白质工程崛起的缘由。2.简述蛋白质工程的原理。3.尝试运用逆向思维分析和解决问题。二、 学习重点和难点1 学习重点（1 ）为什么要开展蛋白质工程的研究？（2 ）蛋白质工程的原理。2. 学习难点：蛋白质工程的原理。三、答案和提示（一）思考与探究1.蛋白质工程是应怎样的需求而崛起的？提示（供教师在教学中参考）：蛋白质工程的崛起主要是工业生产和基础理论研究的需要。
30、而结构生物学对大量蛋白质分子的精确立体结构及其复杂的生物功能的分析结果，为设计改造天然蛋白质提供了蓝图。分子遗传学的以定点突变为中心的基因操作技术为蛋白质工程提供了手段。在已研究过的几千种酶中，只有极少数可以应用于工业生产，绝大多数酶都不能应用于工业生产，这些酶虽然在自然状态下有活性，但在工业生产中没有活性或活性很低。这是因为工业生产中每一步的反应体系中常常会有酸、碱或有机溶剂存在，反应温度较高，在这种条件下，大多数酶会很快变性失活。提高蛋白质的稳定性是工业生产中一个非常重要的课题。一般来说，提高蛋白质的稳定性包括：延长酶的半衰期，提高酶的热稳定性，延长药用蛋白的保存期，抵御由于重要氨基酸氧化
31、引起的活性丧失等。下面举一个如何通过蛋白质工程来提高重组 -干扰素专一活性和稳定性的例子。干扰素是一种抗病毒、抗肿瘤的药物。将人的干扰素的 cDNA 在大肠杆菌中进行表达，产生的干扰素的抗病毒活性为 106 U/mg，只相当于天然产品的十分之一，虽然在大肠杆菌中合成的-干扰素量很多，但多数是以无活性的二聚体形式存在。为什么会这样？如何改变这种状况？研究发现，-干扰素蛋白质中有 3 个半胱氨酸（第 17 位、31 位和 141 位） ，推测可能是有一个或几个半胱氨酸形成了不正确的二硫键。研究人员将第 17 位的半胱氨酸，通过基因定点突变改变成丝氨酸，结果使大肠杆菌中生产的 -干扰素的抗病性活性提
32、高到 108 U/mg，并且比天然 -干扰素的贮存稳定性高很多。在基础理论研究方面，蛋白质工程是研究多种蛋白质的结构和功能、蛋白质折叠、蛋白质分子设计等一系列分子生物学基本问题的一种新型的、强有力的手段。通过对蛋白质工程的研究，可以深入地揭示生命现象的本质和生命活动的规律。2.蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同？答：基因工程是遵循中心法则，从 DNAmRNA蛋白质折叠产生功能，基本上是生产出自然界已有的蛋白质。蛋白质工程是按照以下思路进行的：确定蛋白质的功能蛋白质应有的高级结构蛋白质应具备的折叠状态应有的氨基酸序列应有的碱基排列，可以创造自然界不存在的蛋白质。3.你知道酶工程吗？
33、绝大多数酶都是蛋白质，酶工程与蛋白质工程有什么区别？提示：酶工程就是指将酶所具有的生物催化作用，借助工程学的手段，应用于生产、生活、医疗诊断和环境保护等方面的一门科学技术。概括地说，酶工程是由酶制剂的生产和应用两方面组成的。酶工程的应用主要集中于食品工业、轻工业以及医药工业中。-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和葡萄糖异构酶这三个酶连续作用于淀粉，即可代替蔗糖生产出高果糖浆；蛋白酶用于皮革脱毛胶以及洗涤剂工业；固定化酶还可以治疗先天性缺酶病或是器官缺损引起的某些功能的衰竭等。至于我们日常生活中所见到的加酶洗衣粉、嫩肉粉等，就更是酶工程最直接的体现了。通常所说的酶工程是用工程菌生产酶制剂，而没有经过由酶的功
34、能来设计酶的分子结构，然后由酶的分子结构来确定相应基因的碱基序列等步骤。因此，酶工程的重点在于对已存酶的合理充分利用，而蛋白质工程的重点则在于对已存在的蛋白质分子的改造。当然，随着蛋白质工程的发展，其成果也会应用到酶工程中，使酶工程成为蛋白质工程的一部分。（二）正文中讨论题某多肽链的一段氨基酸序列是：丙氨酸色氨酸赖氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸 讨论：（1） 怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？请把相应的碱基序列写出来。（2 ） 确定目的基因的碱基序列后，怎样才能合成或改造目的基因（DNA ）？答：（1）每种氨基酸都有对应的三联密码子，只要查一下遗传密码子表，即可将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但
35、是由于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码，因此其碱基排列组合起来就比较复杂，至少可以排列出 16 种，可以让学生根据学过的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出 mRNA 序列为 GCU（或 C 或A 或 G） UGGAAA（或 G）AUGUUU（或 C） ，再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列：CGA（或 G 或 T 或 C）ACCTTT（或 C）TACAAA（或 G） 。（2 ）确定目的基因的碱基序列后，即可根据人类的需要改造它，通过人工合成的方法或从基因库中获取。（三）异想天开能不能根据人类需要的蛋白质的结构，设计相应的基因，导入合适的细菌中，让细菌生产
36、人类所需要的蛋白质食品呢？提示：理论上讲可以，但目前还没有真正成功的例子。一些报道利用细菌生产人类需要的蛋白质往往都是自然界已经存在的蛋白质，并非完全是人工设计出来而自然不存在的蛋白质。主要原因是蛋白质的高级结构非常复杂，人类对蛋白质的高级结构和在生物体内如何行使功能知之甚少，很难设计出一个崭新而又具有生命功能作用的蛋白质，而且一个崭新的蛋白质会带来什么危害也是人们所担心的。（四）旁栏思考题1.你知道人类蛋白质组计划吗？它与蛋白质工程有什么关系？我国科学家承担了什么任务？提示：人类蛋白质组计划是继人类基因组计划之后，生命科学乃至自然科学领域一项重大的科学命题。2001 年，国际人类蛋白质组组织
37、宣告成立。之后，该组织正式提出启动了两项重大国际合作行动：一项是由中国科学家牵头执行的“人类肝脏蛋白质组计划” ；另一项是以美国科学家牵头执行的“人类血浆蛋白质组计划” ，由此拉开了人类蛋白质组计划的帷幕。“人类肝脏蛋白质组计划”是国际上第一个人类组织器官的蛋白质组计划，由我国贺福初院士牵头，这是中国科学家第一次领衔的重大国际科研协作计划，总部设在北京，目前有 16 个国家和地区的 80 多个实验室报名参加。它的科学目标是揭示并确认肝脏的蛋白质，为重大肝病预防、诊断、治疗和新药研发的突破提供重要的科学基础。人类蛋白质组计划的深入研究将是对蛋白质工程的有力推动和理论支持。2.对天然蛋白质进行改造
38、，你认为应该直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？答：毫无疑问应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造，主要原因如下：（1 ）任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造，即使改造成功，被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。（2 ）对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作，难度要小得多。专题 2 细胞工程2.1 植物细胞工程一、学习目标1. 简述植物组织培养和植物体细胞杂交技术。2. 列举植物细胞工程的实际应用。3. 尝试进行植物组织培养。二、学习重点和难点1 学习重点：（1 ） 植物组织培养的原理和过
39、程。（2 ） 植物体细胞杂交的原理。（3 ） 植物细胞工程应用的实例。2. 学习难点： 植物组织培养的实验。58 高中生物选修 3 答案与提示_高中生物选修三三、答案和提示2.1.1 植物细胞工程的基本技术（一） 思考与探究1.为什么“番茄马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？提示：1978 年，梅尔彻斯（Melchers）等人首次获得了马铃薯与番茄的属间体细胞杂种。他们将培育的二倍体马铃薯品系和番茄叶片细胞进行融合，所产生的杂交株被称为“马铃薯番茄” 。像大多数杂种一样，杂交株同时具有马铃薯和番茄的形态特征。其中一些植株形成了“类似块茎的生殖根” ，但是没有
40、产生可结实的花、果实以及真正意义上的块茎。到目前为止“马铃薯番茄”一类的体细胞杂交植物还不能产生经济效益，但是其研究价值不可忽视。至于马铃薯番茄没有像人们预想的那样地上长番茄、地下结马铃薯，主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，所以马铃薯番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，杂交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯就是很自然的了。2.自然界中有一种含有叶绿体的原生动物眼虫，说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活，请探讨：动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？如果理论上
41、可行，请设计出具体实验方案。提示：根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。具体的实验方案可以设计如下：（二） 正文中讨论题【实验 胡萝卜的组织培养】1.在组织培养实验中，为什么要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作？提示：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。造成培养基污染的因素有很多，一般包括：外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌不彻
42、底、操作人员操作不规范等。所以在组织培养实验中用到的植物材料和各种器械都要进行彻底地灭菌，实验人员操作一定要规范，避免带入杂菌。2.在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。请思考一下，胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花） ，是否也能培养成小植株，你能用实验的方法进行验证吗？提示：胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生形成小植株，只是诱导愈伤组织比较困难。可以让学生参考利用胡萝卜根进行组织培养的实验，尝试设计出利用胡萝卜的茎、叶、花进行组织培养的实验流程。3.请根据上面的实验过程，概括出植物组织培养技术的流程简图。提示：2.1.2 植物细胞工程的实际应用（一） 思考与探究1.通过查阅资料，请你再列举出植物组织培养技术在我们生活中的另外一些应用。 提示：a. 拯救濒危植物；b. 提供食品制作的原料；c. 利用愈伤组织进行转基因操作。
