1、预购 2018 年度动物疫病监测诊断试剂清单 序号 种类 参数 数量 单价 金额 1 口蹄疫 O型ELISA试剂盒 1阻断 ELISA 2保存条件： 28保存； 3敏感性： 98% 4特异性： 99.2% 5稳定性：批内及批间差异 3%。 6试剂盒规格： 480 孔（ 5 板） /盒 7试剂盒组成： rP13C 蛋白包被板，样品稀释液，阴性对照血清，阳性对照血清，酶标抗体，底物液，终止液，洗液。 8操作时间： 2 小时 15 操作步骤： （ 1）、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温（ 25+3），取出抗原被板； （ 2）、 标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液 8
2、0ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各 20ul 后进行震荡混匀； （ 3）、室温孵育 60 分钟； （ 4）、洗板：每孔加入洗液 300ul，洗涤 3 次，最后在吸水纸上拍干； （ 5）、每孔加入 100ul 酶标抗体，室温孵育 60 分钟； （ 6）、洗涤 3 次； （ 7）、每孔加入 TMB 底物反应液 100ul.室温暗处放置 15 分钟。 （ 8）、每孔加入终止液 50ul，置酶标仪 450nm 波长处读数。 9结果判定： SN 值 0.6，阴性； SN 值 0.6，阳性。 10 试剂盒有效期 12 个月。 3 盒 2 口蹄疫 A型ELISA试剂盒 1阻断 ELISA 2保存
3、条件： 28保存； 3敏感性： 98% 4特异性： 99% 5稳定性：批内及批间差异 3%。 6试剂盒规格： 480 孔（ 5 板） /盒 7试剂盒组成： rP13C 蛋白包被板，样品稀释液，阴性对照血清，阳性对照血清，酶标抗体，底物液，终止液，洗液。 8操作时间： 2 小时 15 分钟。 （ 1）、使用前将试剂盒所有的组成恢复到室温（ 25+3），取出抗原被板； （ 2）、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔 加入样品稀释液 80ul，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各 20ul 后进行震荡混匀； （ 3）、室温孵育 60 分钟； （ 4）、洗板：每孔加入洗液 300ul
4、，洗涤 3 次，最后在吸水纸上拍干； （ 5）、每孔加入 100ul 酶标抗体，室温孵育 60 分钟； （ 6）、洗涤 3 次； （ 7）、每孔加入 TMB 底物反应液 100ul.室温暗处放置 15 分钟。 （ 8）、每孔加入终止液 50ul，置酶标仪 450nm 波长处读数。 9结果判定： SN 值 0.6，阴性； SN 值 0.6，阳性。 10试剂盒有效期 12 个月。 2 盒 3 口蹄疫亚 1型ELISA液相阻断试剂盒 1、规格：（ 10 板 *96 孔） /盒，可检测 100 200 份样品。 2、用途：用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫亚洲型病毒抗体，适用于动物疫苗免疫抗体定
5、量检测。 3、试剂盒主要组成： (1)兔抗包被 ELISA 板 10 块； (2)U 型 96 孔抗原抗体反应板 2 块； (3)移液槽 5 个； (4)口蹄疫亚洲 I 型病毒抗原约 2 瓶， 7ml/瓶； (5)口蹄疫亚洲 I 型豚鼠抗体工作液 1 瓶， 55ml； (6)兔抗豚鼠 IgG-HRP 工作液 1瓶， 55ml； (7)口蹄疫亚洲 I 型阳性对照血清 1 管， 1ml； (8)口蹄疫阴性对 照血清 1 管， 1ml； (9)25 倍 PBST 浓缩洗液 3 瓶， 180ml/瓶； (10)TMB 底物 A、 B 溶液，各 1 瓶， 30ml/瓶； (11) 终止液 1 瓶， 50
6、ml； (12)封膜板 10 张。 4、操作步骤 4.1抗原抗体（阴阳性对照血清及待检血清）反应：根据不同的需要，选择图 1-2 中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。图 1 为抗体效价测定（定量）检测 10 份样品布局图；图 2 为抗体滴度测定（定量）检测 20 份样品布局图。 4.1.1 稀释血清：以图 1 为例操作，在 U 型反应板上，以 50 l/孔的量用 1 PBST2 倍连续稀释血清，被检 血清在第 1 10 列从 1:4（即 A1 A10 孔， 75 l1 PBST加 25 l 被检血清）稀释至 1:512；在第 11 列稀释阳性对照血清，从 1:2（即 A11 孔 50 l1 P
7、BST 加 50 l 阳性对照血清）稀释至 1:256； A12 B12 孔稀释阴性对照血清，从 1:2 稀释至 1:4； E12 H12 孔为病毒抗原对照孔。 4.1.2 加病毒抗原：将病毒抗原 4.1.2 用 1 PBST 稀释至工作浓度，以 50 l/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内， 4 孔病毒抗原对照孔仅加入 100 l/孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等 量的病毒抗原后，血清的稀释度加倍，被检血清从 1:8 1:1024，由于阳性对照血清已经预先作了 8 倍稀释，则变为 1:32 1:4096。封板，振荡， 4静置过夜或 37温育 90 分钟。 4.2.将抗原抗体
8、混合液从 U 型反应板上按次序转移至已包被口蹄疫亚洲型兔抗的 ELISA 板上， 50 l/孔，封板， 37温育 60 分钟。 4.3.洗板 5 次，甩干，按 50 l/孔加口蹄疫亚洲型豚鼠抗体工作液（红色），封板， 37温育 30 分钟。 4.4.同上洗板 5 次，甩干，按 50 l/孔加兔抗豚鼠 -IgG-HRP 工作液（蓝色），封板， 37温育 30 分钟。 4.5.同上洗板 5 次，加 50 l/孔底物溶液（底物溶液务必要加双氧水（ H2O2），每 1ml 加 10 l 配备的 3%双氧水），37温育 15 分钟，每孔再加 50 l 终止液终止反应，读取 D492nm 或 D490nm
9、值）。 5、结果判定 5.1.试验认可标准 每块板设 4 孔病毒抗原对照，病毒抗原对照 D492nm 值应在 1.5 0.5 范围内。阳性对照抗体效价应在 1 1024 1滴度以内，阴性对照血清抗体效价应 0.7 阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30% OD PC / OD NC 0.3 结果判定： 对于每个样品，计算其 S/N 百分比（ S/N%） 每个样品得出一个（ S/N） 短时孵育或过夜孵育的结果如下： 值 结果 值 结果 S/N% 50% 阳性 S/N% 50% 阳性 50% S/N% 60% 可疑 50% S/N% 60% 可疑 S/N% 60% 阴性 S/N% 60% 阴性
10、 6 禽流感H5-Re8株抗原 禽流感病毒 H5 亚型（ Re-8 株）血凝抑制试验抗原，用于 H5 亚型（ Re-8 株）禽流感病原检测。 2ml/瓶。 1.抗原为禽流感病毒接种 SPF 鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于 7Log2； 2 .试剂在 2 8保存，有效期不少于 1 年；在 -20以下保存，有效期不少于 2 年； 3.试验结果阴阳性对照成立； 4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。 2 瓶 7 禽流感 H7抗 原 禽流感病毒 H7 亚型血凝抑制试验抗原， 用于 H7 亚型禽
11、流感病原检测。 2ml/瓶。 1.抗原为禽流感病毒接种 SPF 鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经 纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于 7Log2； 2.试剂在 2 8保存，有效期不少于 1 年；在 -20以下保存，有效期不少于 2 年； 3.试验结果阴阳性对照成立； 4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。 2 瓶 8 禽流感 H9抗原 1. 抗原为禽流感病毒接种 SPF 鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于 7Log2； 2. 试剂在 2 8保存，有效期不少于
12、 1 年；在 -20 以下保存，有效期不少于 2 年； 3. 试验结果阴阳性对照成立； 4. 无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。 1 瓶 9 新城疫抗原 1. 抗原为鸡新城疫病毒 La Sota株接种 SPF鸡胚培养，收获鸡胚尿囊液，经纯化、甲醛溶液灭活后，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。抗原效价不低于 9Log2； 2. 试剂在 2 8保存，有效期不少于 1年；在 -20以下保存，有效期不少于 2年； 3. 试验结果阴阳性对照成立； 4无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典 附录进行检验，应符合要求。 2 瓶 10 布病虎红平板凝集抗原
13、 1. 主要成分及含量：含灭活的布氏菌菌株 2. 性状：红色均匀悬浮液，久置后，上不澄清，底部有少量红色菌体沉淀。 3. 作用与用途：用于虎红平板凝集试验诊断布氏菌病。 4. 用法与判定 取被检血清 0.03mL 与抗原 0.03mL 相混合， 4 分钟内观察结果。凡出现“ +”以上反应者判为阳性。对出现阳性反应的动物，须进一步作补体结合试验或其他辅助诊断试验。凝集反应判定标准： + 凝集块呈菌丛状，凝块间液体明显清亮。 + 凝集反应较强， 液体较清亮。 + 形成较明显卷边，凝集块间液体稍清亮。 + 稍能查到凝集，稍有卷边形成：凝集物间液体呈红色。 无凝集，呈均匀粉红色。 5. 规格： 5 m
14、L/瓶 6. 贮藏与有效期： 2 8保存，有效期为 12 个月。 7. 有经农业部颁发的兽药生产的批准文号。 2 瓶 11 禽流感H5-Re8株阳性血清 禽流感病毒 H5 亚型阳性血清（ Re-8 株）， 用于血凝抑制试验检测 H5 亚型（ Re-8 株）禽流感病毒试验的阳性对照。 2ml/瓶 1. 阳性血清系用禽流感病毒灭活疫苗接种 SPF 鸡，采血、分离血清，经 冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于7Log2； 2. 试剂在 2 8保存，有效期不少于 1 年；在 -20以下保存，有效期不少于 2 年； 3. 试验结果阴阳性对照成立； 4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典
15、附录进行检验，应符合要求。 1 瓶 12 禽流感 H7阳性血清 禽流感病毒 H7 亚型阳性血清，用于 H7 亚型禽流感病原检测的阳性对照， 2ml/瓶。 阳性血清系用禽流感病毒灭活疫苗接种 SPF 鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于 7Log2； 试剂在 2 8保存，有效 期不少于 1 年；在 -20以下保存，有效期不少于 2 年； 试验结果阴阳性对照成立； 1 瓶 4.无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。 13 禽流感 H9阳性血清 1. 阳性血清系用禽流感病毒灭活疫苗接种 SPF 鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝
16、一抑制效价不低于7Log2； 2. 试剂在 2 8保存，有效期不少于 1 年；在 -20以下保存，有效期不少于 2 年； 3. 试验结果阴阳性对照成立； 4. 无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。 1 瓶 14 新城疫 阳性血清 1. 阳性血清系用鸡新城疫灭活疫苗接种 SPF鸡，采血、分离血清，经冷冻真空干燥制成。血凝一抑制效价不低于 8Log2； 2. 试剂在 2 8保存，有效期不少于 1 年；在 -20以下保存，有效期不少于 2 年； 3. 试验结果阴阳性对照成立； 4. 无菌检验、剩余水分测定、真空度测定按现行中国兽药典附录进行检验，应符合要求。
17、1 瓶 15 伪狂犬ELISA试剂盒（ gB） 实验原理： 微 量滴定板已经用伪狂犬病毒抗原包被。加入样本和对照，经过孵育，如样本中含有抗体，将形成抗原 -抗体复合物。经过洗板，加入过氧化物酶结合物，它与伪狂犬 gB 抗原剩余点位结合，形成复合物。经过洗板，加入含底物 TMB 液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比；若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在 450nm 波长检测 OD 值。注意：稀释缓冲液 4 加入血清稀释后会改变颜色 试剂盒内容： 试剂 微量滴定板，已用伪狂犬 gB 病毒抗原包被 酶结合物浓缩液（ 10X） 阳性对照 阴性对照 稀释缓冲液 4 稀释缓冲液 3 浓缩洗涤液（ 20X） 底物溶液 终止液（ H 2 SO 4 0.5M） 1. 酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在 5（ 3）下贮存。 1 盒
