细胞原代培养(Cell primary culture)实验目的 了解细胞体外培养的原理、基本方法,了解无菌操作方法及注意事项。 学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。实验原理用直接从机体获得的细胞进行的培养称为 原代培养 。这种培养过程主要是采用无菌操作的方法,把组织(或器官)从动物体内取出,经酶消化处理, 使分散成单个细胞, 然后在人工条件下培养,使其不断地生长和繁殖。原代培养是建立各种细胞系的第一步。消化培养法又称为 组织消化分散法 : 将妨碍细胞生长的细胞间质去除,使细胞分散,形成悬液,按不同浓度接种培养瓶培养。实验仪器n 超净工作台 ,压力蒸汽消毒器,电热干燥箱,滤器,酸缸n CO2培养箱n 倒置显微镜n 自动双重纯水蒸馏器,纯水仪n 耗材:培养瓶,吸管,电动吸引器超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器,除去空气中的尘埃颗粒,使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面,使工作台内构成无菌环境。 滤 器滤器工作原理CO2培养箱nCO2培养箱设定的条件为 37 , 5 CO2 。n使用 CO2培养箱应注意的问题: 用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气。 保持培养箱内空气干净。定期消毒(90 , 14 h)。 箱内无菌蒸馏水 3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度,避兔培养液蒸发。倒置显微镜