1、HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_1HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南（2013 版）Guideline for HIV-1 Viral Load Testing and Quality Assurance中国疾病预防控制中心2013 年 1 月HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_2前 言 随着 HIV-1病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断、抗病毒治疗监测及相关科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。自 1997年艾滋病实验室首次引进 HIV-1病毒载量检测技术以来，截至 2012年底全国已经配备 115台 HIV-1病毒载量检测仪，覆盖疾控、医院、检疫、军队等
2、系统，艾滋病流行重点地区及少数县级实验室均已配备 HIV-1病毒载量检测仪，每年检测量已达 13万人份以上。由于 HIV-1病毒载量检测质量对艾滋病的早期诊断及治疗有重要影响，因此急需加强该领域的培训和质量控制，规范实验室操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。自 2008年开始实施HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南（试行，以下简称指南）以来，参与 HIV-1 病毒载量能力验证工作的实验室从 2007年的 29家增加到 2012年的 107家，占已开展工作实验室的百分之九十以上。通过综合分析近几年能力验证发现的问题与检测技术发展的实际情况，考虑各种试剂的检测要求，结合专家意见和一线实验室工作
3、人员的经验与需求，对本指南进行了适当修改、调整和补充，主要修改内容包括：（1）增加“人员要求”章节；（2）修改“常用 HIV-1病毒载量检测方法”；（3）修改“HIV-1 病毒载量检测能力验证（PT）”；（4）补充常见问题分析和处理等内容。修订后的指南共分八章，包括：总则，人员要求，实验室环境与设施，样品的采集、处理保存运输，常用检测方法简介，室内质量控制，实验室检测能力验证（PT），实验室生物安全，以及四个附表。本指南在修改过程中，接纳了国内专家、同行的意见和建议，经过多次修改编写成指南（2013）版。本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国
4、疾病预防控制中心批准执行，并在 HIV-1病毒载量检测实验室网络内发布实施。由于国内各实验室条件不同，不能采纳所有实验室的建议，因此本指南主要提出一些原则上的参考建议，其中定有不妥之处，希望广大同仁提出意见，以便不断完善。本指南在 2008 年颁布的指南 （试行）的基础上修订，在此对编写试行版过程中给予帮助的国际组织和专家表示感谢。对本次修订过程中提出建议的HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_3全国 HIV-1 病毒载量检测实验室基层工作人员表示衷心的感谢。本指南的解释权属于中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心。本指南编写主持人：蒋岩本指南编写人员： 潘品良 蒋岩 李敬云 钟平 尚红
5、 李太生 李繁 本指南审核咨询专家及技术人员：邵一鸣 汪宁 王佑春 郭志宏 肖瑶 邱茂锋 邢文革 姚均 朱红 秦光明 徐建青本指南编写联系人：潘品良本指南适用于全国 HIV-1病毒载量检测实验室本指南编写单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心本指南自发布之日实施，同时终止2008年颁布的HIV-1病毒载量测定及质量保证指南（试行）。HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_4HIV-1病毒载量测定及质量保证指南目录第一章 总则第二章 人员要求第三章 实验室环境与设施第四章 样品的采集、处理、保存、运输第五章 常用检测方法简介第六章 室内质量控制第七章 实验室检测能力验证（PT）第八章
6、实验室生物安全附表 1 常见问题分析和处理附表 2 HIV-1病毒载量检测样品送检及接收单附表 3 HIV-1病毒载量检测能力验证样品接收专用单附表 4 HIV-1病毒载量检测报告单参考文献缩略语HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_5第一章 总 则1.1意义HIV-1病毒载量是指每毫升血浆中病毒颗粒的数量，是艾滋病防治工作中一项重要的实验室检测指标。HIV-1 病毒载量检测主要用于抗病毒治疗监测，包括治疗时机判定、治疗效果评估、耐药预警；还可用于 HIV感染的辅助诊断，包括窗口期、病程晚期、婴儿感染、疑难样本等的诊断；也可用于血液筛查。为了保证检测结果的准确性和可靠性，必须对开展 HIV-
7、1病毒载量检测的实验室进行规范化管理和质量控制。1.2目的指导 HIV-1病毒载量检测工作，规范实验室质量控制与管理。1.3适用范围适用于我国开展 HIV-1病毒载量检测工作的所有实验室。HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_6第二章 人员要求HIV-1病毒载量检测人员分为检验人、复核人、签发人。2.1 培训实验室在使用新方法前，须对技术人员进行上岗培训，获得资格后方可开展相应工作。上岗培训内容至少应包括：HIV 检测相关基础知识，HIV-1 病毒载量检测技术及管理要求，实验操作，质量保证与质量控制，生物安全。2.2检验人进行 HIV-1病毒载量检测的人员须具有艾滋病检测实验室的上岗资格，接
8、受过省级以上的实验操作技术及艾滋病实验室生物安全培训及厂家的技术操作培训。所有相关检验人员需经公司工程师操作培训，能独立熟练地操作，并经考核合格，持证上岗。2.3复核人、签发人应具备对检测过程进行分析、解决问题的能力。复核人负责对原始数据查阅、结果核对，签发人核实结果正确后对外签发报告。HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_7第三章 实验室环境与设施除了 HIV-1病毒载量检测仪器，合理地、充分地配备实验室环境、设施、辅助设备是保证 HIV-1病毒载量检测质量的重要方面。3.1实验室环境HIV-1病毒载量实验室应符合分子生物学实验室基本要求，包括试剂准备区、样品处理区、扩增产物分析区。实验室
9、设置总体原则为各区独立、控制风向、因地制宜、方便工作。具体要求： 3.1.1各区必须是相互独立的，有条件各区内可分别设置缓冲间，以保证不同区之间完全分隔开。3.1.2各区的仪器设备与各种物品必须为专用，避免交叉污染。3.1.3试剂准备区和样品处理区内须保持低度正压（或常压）状态，使空气流向始终由室内向外，以避免扩增污染物进入此区域。3.1.4扩增产物分析区内须保持低度负压状态，使空气流向始终由室外向内，以防止扩增产物通过气溶胶流出，造成与其他区域的交叉污染。实验室可安装排风扇或其他排风装置。3.1.5扩增产物分析区可以设在远离其他各区的地方。3.1.6工作时必须遵循单一工作流向，即只能从试剂准
10、备区开始，到样品处理区，然后到扩增产物分析区。3.2 实验室设施各种 HIV-1病毒载量检测方法除病毒载量检测仪外，还需要配备相应的辅助设备才能完成检测。HIV-1 病毒载量检测实验室设备分布示意图提供为 HIV-1病毒载量检测实验室不同区内必备的辅助设备及耗材。辅助设备应根据不同检测方法作相应变化。3.2.1样品处理区：生物安全柜：二级离心机（32000g，适合 1.5mL 离心管）冰箱：2-8，-20，-70以下水浴箱：误差范围小于 0.5加样器 1套（20L、200L、1000L）HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_8带滤芯的一次性吸头（无 DNA和 RNA酶） ，1.5mL 离心管
11、（无 DNA和 RNA酶）及相应试管架计时器旋涡振荡器：震动频率可调一次性工作服、帽、口罩、无粉手套和鞋套HIV-1病毒载量检测实验室设备分布示意图病毒载量仪 加样器扩增产物分析区样品处理区试剂准备区注:箭头表示风的流动方向3.2.2试剂准备区：超净工作台（或密闭工作台）加样器 1套（20L、200L、1000L）离心机（18000g，适合 1.5mL 离心管）冰箱：2-8，-20计时器旋涡振荡器，震动频率可调带滤芯的一次性吸头（无 DNA、RNA 酶）1.5mL 离心管（无 DNA和 RNA酶）及相应试管架冰箱2-8离心机紫外灯洗手池生物安全柜加样器漩涡振荡器实验台离心机冰箱-70水浴箱洗手
12、池紫外灯超净工作台 加样器漩涡振荡器冰箱2-8实验台冰箱-20 紫外灯HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_9一次性工作服、帽、口罩、无粉手套、鞋套3.2.3扩增产物分析区：HIV-1病毒载量检测仪加样器 1套（20L、200L、1000L）冰箱：2-8，-20旋涡振荡器，震动频率可调一次性工作服、帽、口罩、无粉手套和鞋套带滤芯的一次性吸头（无 DNA、RNA 酶）HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南_10第四章 样品的采集、处理、保存和运输样品的采集、处理、保存和运输要求保证满足不同 HIV-1病毒载量检测方法对样品性质的，并保证生物安全。因此需按照所使用检测方法的要求严格执行抗凝、分样
13、时间、运输包装、保存温度、冻融记录。用于 HIV-1病毒载量检测的样品须采用抗凝血浆。4.1 样品的采集4.1.1采样器材：一次性抗凝真空采血管、持针器、蝶形针等。4.1.2抗凝剂：通常采用 EDTA（乙二胺四乙酸）或 ACD（枸橼酸钠） ，须符合不同检测方法对样品的要求。4.1.3样品标识：在采血管上贴唯一性样品编号。4.1.4样品采集量：通常采集全血 8-10ml, 采集的样品量应与定量采血管的刻度要求一致，避免血液凝固或稀释。4.1.5样品混匀：采集血液后，立即轻轻上下颠倒抗凝管 10次，使血液与抗凝剂充分混匀。4.1.6其它信息：HIV-1 病毒载量检测样品送检及接收单（附表 2）的备
14、注栏内需注明采集对象的基本信息和流行病学资料、抗病毒药物使用情况、最近一次的实验室病毒载量检测结果。4.2 样品的处理4.2.1 要求在采血后 6小时内离心样品，室温下使用离心力为 800-1200g（1500-3000rpm）离心 10分钟后，吸出血浆,分装到无菌的聚丙烯螺口冻存管中，并注明分装时间，冻存管应提前贴上耐冻的样品编号标签。4.2.2 血浆样品不能灭活。4.2.3 做好样品处理记录，包括冰箱温度变化、样品存取。4.3 样品的保存4.3.1保存条件：根据血浆检测时间而定，4 天内可在 4暂时保存，3 个月内应冻存于-20以下，3 个月以上应置于-70以下。不能使用自动除霜冰箱。4.3.2血浆样品冻融不应超过 3次。
