1、第七章 重组子的筛选与鉴定第一节 遗传学检测法第二节 核酸分子杂交检测法第三节 电泳检测法第四节 免疫化学检测法第五节 核酸序列分析及其他方法w 将目的 DNA片段与载体连接形成 重组子 ，然后通过各种方法将重组子导人宿主细胞。得到所需要的带有重组DNA的转化子是基因工程的目的所在。w 转化子 就是导入外源 DNA后获得了新的遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞。w 在转化反应中，并非所有的细胞都转入重组 DNA分子，即使所有的受体细胞都变为转化体，所获得的转化子仍是多种类型的 DNA分子，因为在连接产物中既有裁体和一个或数个串联目的基因的连接，也有载体的自连，还有目的 DNA分子的自连，更多的是
2、未发生连接反应的载体和目的 DNA片段。w因此在成千上万个转化子中，真正含有期望的重组 DNA分子的比例很少，为了将含有外源 DNA的宿主细胞和不含外源 DNA宿主细胞分开，以及将含有正确重组子的宿主细胞和含有其他外源DNA的宿主细胞分开。这就需要设计出容易于筛选重组子克隆的方案并加以验证，这就是我们这一章要讨论的内容。w阳性克隆的筛选与鉴定可以从不同的层次、利用不同的方法进行。总的来说，重组子的鉴定可以从 直接和间接 两个方面分析，可以从 DNA、 RNA和蛋白质 三个不同的水平进行鉴定。第一节 遗传学检测法w1 根据栽体表型特征的筛选w2 根据插入基因遗传性状的筛选1 根据栽体表型特征的筛
3、选w根据载体分子所提供的表型特征，选择重组体DNA分子的遗传选择法，可适用于大量群体的筛选，因此是一种比较简单而又十分有效的方法。w 含有一个选择标记 :实际操作中，最典型的方法是使用抗药性标记的插入失活作用，或是 半乳糖苷酶基因的显色反应，将重组体 DNA分子的转化子同非重组的载体转化子区别开来。w 对 噬菌体的置换型载体来说。 噬菌体头部外壳蛋白容纳 DNA的能力是有一定限度的。其包装能力应控制在野生型 DNA长度的 75一 105之间 (3651kb) ，这样才能形成噬菌斑。因此， 包装限制 这一特性，保证了体外重组所形成的有活性的 重组体分子，一般都应带有外源 DNA的插入片段， 噬菌斑的形成本身就是对 重组体的一种筛选特征。1.1抗药性标记及其插入失活选择法w在 PBR322质粒上有两个抗生隶抗性基因，wTetr上有插入位点BamH I和 Sal I; wAmpr上有插入位点 Pst I。四环素：氨苄青霉素抗性基因：产生 -内酰胺酶，使氨苄青霉素转变为青霉酮酸，使 碘 -青霉素指示液 （ I2-KI-Aampicillin）（蓝灰色）褪色。抑制细菌生长，但不杀死细菌。杀死生长的细菌，但不杀死停止生长的细菌。环丝氨酸：
