1、1基因工程复习题一、名词解释：（1020%）基因工程 基因工程工具酶 限制性内切酶 限制性内切酶的 Star 活性 PCR 引物PCR 扩增平台期 DNA 芯片 基因组文库 cDNA 文库 转化 限制与修饰系统 原位杂交：将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上，然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。粘性末端：双链 DNA 被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。Northern 印迹杂交：将 RNA 进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交的一种核酸分子杂交技术，可用于检测目的基因的转录水平。转位：
2、一个或一组基因片段从基因组的一个位置转移到另一个位置的现象。基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的 DNA 与载体 DNA 连接成为重组 DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组 DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA 克隆和重组 DNA 等。目的基因：基因工程中，那些被感兴趣的、被选作研究对象的基因就叫作目的基因。连接器：人工合成的一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目的基因的两端，便于基因重组中的切割和连接。转化：受体细胞被导入外源 DNA 并使其生物性状发生改变的过程。停滞效应：PCR 中后期，随着目的 DNA 扩展产物逐渐积累
3、，酶的催化反应趋于饱和，DNA 扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。逆转录 PCR：以 mRNA 为原始模板进行的 PCR 反应。PCR: 即聚合酶链式反应。在模板，引物，4 种 dNTP 和耐热 DNA 聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的 DNA 区段地酶促合成反应。-互补 （-complementation）： 指在 M13 噬菌体 DNA 或 PUC 质粒序列中，插入了 lac 启动子-操纵子基因序列以及编码 -半乳糖苷酶 N-端 145 个氨基酸的核苷酸序列（又称 -肽） ，该序列不能产生有活性的 -半乳糖苷酶。感染（infection）
4、特指以 噬菌体、粘粒和真核细胞病毒为载体的重组 DNA 分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。其中，由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移过程又称为转导（transduction） 。47、转染（transformation）指真核细胞主动摄取或被动导入外源 DNA 片段而获得新的表型的过程。二、填空题（20%）1、DNA 片段重组连接的方法主要有 平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接 。2、感受态细胞是指 具有摄取外源 DNA 分子能力的细胞。23、 噬菌体蛋白对重组 DNA 体外包装时，包装长度为野生型 DNA 的 75105%。5
5、、PCR 反应体系含有耐热的 TaqDNA 聚合酶，化学合成的寡核苷酸引物，四种 dNTP，合适的缓冲液体系。6、核酸探针包括： cDNA 探针；基因组 DNA 探针；寡核苷酸探针和 RNA 探针。7、部分酶切可采取的措施有：(1)_(2)_ (3)_等。(1) 减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积8、DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用_切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为76kDa 的大片段，具有两种酶活性： (1)_； (2)_的活性。枯草杆菌蛋白酶；(1)5-3 合成酶的活性；(2)3-5 外切核酸酶9、为了防止 DNA 的自身环化，可用_去双链 DNA_。
6、碱性磷酸酶；5端的磷酸基团10、基因工程中有 3 种主要类型的载体： _、_、_。质粒 DNA；病毒 DNA；质粒和病毒 DNA 杂合体11、pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基因来自于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。pMBl； pSCl01；pSF2124(R 质粒)13、DNA 重组连接的方法大致分为四种：(1)_ (2)_ (3) _(4)_ _。(1) 黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法14、差示杂交(differential hybridization)技术需要_。两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即
7、在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因16、将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个_，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_。基因组 DNA 克隆； 基因组 DNA 文库17、根据 Northern 杂交的结果可以说明： _。外源基因是否进行了转录18、在_技术中，DNA 限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的 DNA 探针杂交。Southern 印迹19、可用 T4 DNA 聚合酶进行平末端的 DNA 标记，因为这种酶具有_和_的活性。53合成酶；3 5 外切核酸酶20、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考
8、虑三种因素： (1)_ (2)_(3)_。(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3) 不含内含子321、放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记22、黏粒(cosmid) 是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、COS 位点序列来自 ，最大的克隆片段达到 kb。质粒； 噬菌体； 4523、限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_，第二、三两个字母取自_，第四个字母则用_表示。属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名24、第一个分离的限制性内切核酸酶是_；而第一个用于
9、构建重组体的限制性内切核酸酶是_。EcoK；EcoRl25、切口移位(nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用_的_和_的作用。DNA 聚合酶 I：5一 3外切核酸酶；5 一 3合成酶26、就克隆一个基因(DNA 片段) 来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_、_、_。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源 DNA的插入27、pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。 pUC 系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。pBR322 和 M1
10、3；pMBl；转座子28、噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是 。它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源 DNA 的扩增；对某些噬菌体(如 噬菌) 的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽29、Northern 印迹和 Southern 印迹有两点根本的区别：(1)_(2)_。(1)印迹的对象不同：Northern 是 RNA，Southern 是 DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件30、限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源 DNA 的 限制 和对自身 DNA 的 修饰 来实现的。31、II 型限
11、制酶既具有 识别位点 的专一性，也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。432、个体之间 DNA 限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性（RFLP） 。33、人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附 DNA, _时摄人DNA。0 C；42C34、野生型的 噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。(1) 分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记35、形成平末端的方法有： 用产生平末端的限制酶切，用 S1 核酸酶切除粘末端 ，用DNA 聚合酶填平粘末端。36、回收 DNA 片段时，在确定 DNA 条带位置时，应使用 长 波长紫
12、外灯，以最大限度减少对 DNA 的照射损伤。37、基因工程受体菌的基因型常为 r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型， m-表示 修饰缺陷型 ，rec-表示 重组缺陷型 。38、CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时，DNA 以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。39、TaqDNA 聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。53聚合酶活性， 35外切酶活性，校正功能40、PCR 循环次数一般设定为 ，过多的循环次数会导致 的出现。2530 次， PCR 反应 “平台效应 ”。41、如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA 产生 5突出的黏性末端，则可以用_进行 3末端标记。如果用限制性内切
13、核酸酶切割 DNA 产生的是 3突出的黏性末端，可以用_进行 3末端标记。Klenow 酶填补的方法；T4DNA 聚合酶42、限制酶是一类专门切割 DNA 的酶，它能特异性识别切割双链 DNA。43、需要部分酶切时可采取的方法有：减少酶的用量；缩短反应时间；增大反应体积。45、重组 DNA 技术的基本过程：目的基因的制备；载体的选择和制备；DNA 分子的体外连接；将重组 DNA 导入宿主细胞；重组体的筛选和鉴定；重组体的扩增、表达和其他研究。46、在分离质粒 DNA 的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：可以扩增质粒 DNA；抑制了菌体的数量，有利于裂解。48、II 型限制酶既具有 识别位点
14、 的专一性，也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。50、基因工程受体菌的基因型常为 r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型， m-表示 修饰缺陷型 ，rec -表示 重组缺陷型 。52、核酸的体外标记法分为 和 。化学法；酶法553、核酸的体外标记法中的酶法最常用的是 和 标记。 125I；光敏生物素标记。54、影响核酸分子杂交的因素有：（1）核酸分子的浓度与长度；（2）温度；（3）离子强度；（4）甲酰胺；（5）核酸分子的复杂性；（6）非特异性杂交反应等。三、选择题（20%）1、下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（ ） CA重组 DNA 技术所用的工具酶是限制
15、酶、连接酶和运载体B所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达2、下列不属于获取目的基因的方法是（ ） BA“鸟枪法” B转录法 C反转录法 D根据已知氨基酸序列合成法3、以下说法正确的是（ ） AA. 在真核细胞的基因结构中，编码区也含有不能编码蛋白质的序列B. 终止子是转录终止的信号，因此它的 DNA 序列与终止密码 TAA 相同C. 基因的非编码区通常不起什么作用D. 启动子的作用是阻碍 RNA 聚合酶的移动，并使其从 DNA 模板链上脱离下来4、型限制性内切核酸酶： ( ) B(A)有内切核酸
16、酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(B)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供(C)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (D)有外切核酸酶和甲基化酶活性(E)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5、关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 B(A)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成(B)这一系统中的核酸酶都是 类限制性内切核酸酶(C)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰(D)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统6在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制那一项最好?( ) B(A)反应时间 (B)酶量 (C)反应体积 (D)
17、酶反应的温度7、限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( ) B(A)双链 DNA 的特定碱基对 (B)双链 DNA 的特定碱基序列(C)特定的三联密码 (D)以上都正确8、在基因工程中，可用碱性磷酸酶( ) A(A)防止 DNA 的自身环化 (B)同多核苷酸激酶一起进行 DNA 的 5末端标记6(C)制备突出的 3末端 (D)上述说法都正确9、下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的 C(A)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数(B)可以在氯霉素作用下进行扩增 (C)通常带有抗药性标记 (D)同严紧型质粒融
18、合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子10、下列哪种克隆载体对外源 DNA 的容载量最大?( ) C(A)质粒 (B)黏粒 (C)酵母人工染色体(YAC) (D) 噬菌体 (E) cDNA 表达载体 11、Col El 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( ) ACD(A)是松弛复制型 （B)具有四环素抗性 (C)能被氯霉素扩增 (D)能产生肠杆菌素12、同一种质粒 DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )B(a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA(c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA13、能够用
19、来克隆 32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是( ) A(A)charomid (B)plasmid (C)cosmid (D)phagemid14、双脱氧末端终止法测序体系与 PCR 反应体系的主要区别是前者含有( ) D(A) 模板 (B) 引物(C) DNA 聚合酶 (D) ddNTP (E) 缓冲液 15、PCR 实验的特异性主要取决于（ ） C(A) DNA 聚合酶的种类 (B)反应体系中模板 DNA 的量(C)引物序列的结构和长度 (D)四种 dNTP 的浓度(E)循环周期的次数16、常用的 Southern 转膜方法有哪几种（ ） 。BCD(A) 硝酸纤维素膜法 (B) 毛细管
20、虹吸印迹法 (C) 电转印法 (D) 真空转移法17、原位杂交可以用来检测（ ） ABCD(A) DNA (B) RNA (C) cDNA ( D) RNA 和 DNA18、核酸酶 S1 能降解（ ）AC(A) DNA 单链 (B) DNA 双链 (C) RNA 单链 (D) DNA/RNA 杂交双链19、构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（A、B、C、D）(A)避免载体自身环化 (B) 提高连接效率 (C)控制外源基因的插入方向7(D) 便于转化后的筛选 (E) 便于修改阅读框20、获得 DNA 重组体后，还需进一步鉴定，可采用的方法有：（A B C D）(A) DNA 序列测定
21、(B) PCR 鉴定(C) 酶切鉴定 (D) 表达产物的鉴定(E) 进行定点突变21、外源基因与载体的连接方式有：（A B C D E）(A) 粘端连接 (B) 平端连接(C) 加同聚尾连接 (D) 加人工接头连接(E) 用 T 载体连接22、关于多克隆位点，下列叙述正确的是：（A B D）(A) 是外源基因的插入部位 (B) 由许多酶切位点组成(C) 是宿主细胞上的一段特殊序列 (D) 是人工合成的一段 DNA 序列(E) 含有药物抗性基因23、用蓝白斑筛选重组子时，IPTG 的作用是：（A ）(A) 诱导载体上的 Lac Z 基因表达 (B) 作为显色反应的指示剂(C) 作为酶的作用底物
22、(D) 诱导载体上的抗性基因表达E. 诱导宿主上的 Lac Z 基因表达24、PUC 系列载体的抗性筛选标记为：（C）(A) 卡那霉素 (B) 四环素(C) 氨苄青霉素 (D) G418(E) 氯霉素25、 免疫印迹法筛选重组体的原理是：（E）(A) 根据载体抗性基因的表达 (B)根据载体报告基因的表达(C) 根据 DNA 与 DNA 的杂交 (D) 根据 DNA 与 mRNA 的杂交(E) 根据外源基因的表达26、Ti 质粒：( ) ACDE(A)可从农杆菌转到植物细胞中 (B)作为双链 DNA 被转移(C)在植物中导致肿瘤 (D)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 (E)需
23、要细菌的 vir 基因帮助转移 (F)在植物细胞中作为染色体外质粒28、关于 cDNA 的最正确的说法是：( )C(A)同 mRNA 互补的单链 DNA (B)同 mRNA 互补的双链 DNA(C) 以 mRNA 为模板合成的双链 DNA (D) 以上都正确29、用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为：( )C(A)染色体 DNA 断成了碎片 (B)染色体 DNA 分子量大，而不能释放8(C)染色体变性后来不及复性 (D)染色体未同蛋白质分开而沉淀30、关于碱解法分离质粒 DNA，下面哪一种说法不正确?( )D(A)溶液 I 的作用是悬浮菌体 (B)溶液的作用是使
24、 DNA 变性(C)溶液的作用是使 DNA 复性(D)质粒 DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性31、在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型 B(A)r+m+rec* (B)r-m-rec- (C)r-m-rec+ (D)r+m+rec-32、cDNA 文库包括该种生物的( )AA 某些蛋白质的结构基因 B 所有蛋白质的结构基因C 所有结构基因 D 内含子和调控区33、Southem 印迹的 DNA 探针( )杂交。CA 只与完全相同的片段 B 可与任何含有相同序列的 DNA 片段C 可与任何含有互补序列的 DNA 片段D 可与用某些限制性内切核酸酶切成的 DNA 片段
25、 E 以上都是34、用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 CASouthem 印迹杂交 BNorthem 印迹杂交CWestern 印迹 D 原位菌落杂交35、报告基因( ) ACDA 以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列B 以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区C 能用于检测启动子的活性 D 能用于确定启动子何时何处有活性36、在利用 lacZ 失活的显色反应筛选法中， IPTG 的作用是( )AA 诱导宿主的 肽的合成 B 诱导宿主的 肽的合成C 作为酶的作用底物 D 作为显色反应的指示剂37、切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。
26、BA DNA 聚合酶 I，RNA B DNA 聚合酶 I，DNAC DNA 聚合酶，RNA D DNA 聚合酶，DNA38、用免疫化学法筛选重组体的原理是( )AA 根据外源基因的表达 B 根据载体基因的表达C 根据 mRNA 同 DNA 的杂交 D 根据 DNA 同 DNA 的杂交39、分离质粒 DNA 时，用蔗糖的目的是：( )BA. 抑制核酸酶的活性 B. 保护 DNA，防止断裂C. 加速蛋白质变性 D. 有利于细胞破碎40、CsCl-EB 密度梯度离心法纯化质粒 DNA 的原理是：( )C9A 氯化铯可以较多地插入到线状 DNA 中去B 氯化铯可以较多地插入到 SC DNA 中去C E
27、B 可以较多地插入到线状 DNA 中去D EB 可以较多地插入到 SC DNA 中去41、用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为：( )CA 染色体 DNA 断成了碎片B 染色体 DNA 分子量大，而不能释放C 染色体变性后来不及复性D 染色体未同蛋白质分开而沉淀42、切口平移法标记 DNA 探针时，需用的酶是： （B）A 限制酶 B DNase IC RNase D DNA 连接酶E 拓扑异构酶43、重组 DNA 分子导入受体细胞的方法有：（A B C）A. 转化 B. 转染C. 转导 D. 转位E. 转录 44、关于菌落杂交法筛选重组体，下列叙述正确的是：（B
28、 D）A. 需要外源基因的表达 B. 需要探针与外源基因有同源性C. 需要 IPTG 诱导 D. 不需要外源基因的表达E. 不需要探针与外源基因有同源性45、核酸分子杂交时，用于标记的探针可以是：（A B）A. DNA B. RNAC. 抗原 D. 抗体E. DNA 连接酶46、限制性内切酶可特异性识别 ( B )A. 双链 DNA 的特定碱基对 B. 双链 DNA 的特定碱基序列C. 单链 RNA 的特定碱基序列 D. 单链 DNA 的特定碱基序列E 双链 RNA 的特定碱基对47、下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E)A. EDTA 浓度 B. 甘油浓度 C. DNA 纯度
29、D. 酶的自身活性 E. 盐浓度48、重组连接时，反应体系必须的组分有（ A、C）AMg2+ B. BSA C. ATP D. PO43- E . EDTA49、PCR 产物具有特异性是因为 ( )C10A. Taq DNA 酶保证了产物的特异性B. 合适的变性 ,退火,延伸温度C. 选择特异性的引物D. 引物的 Tm 值不同.50、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是（ ） A限制酶 连接酶 解旋酶 还原酶A B C D51、用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为：CA. 染色体 DNA 断成了碎片B. 染色体 DNA 分子量大，而不能释放C. 染色体变
30、性后来不及复性D. 染色体未同蛋白质分开而沉淀52、同一种质粒 DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：BA. OC DNASC DNAL DNAB. SC DNAL DNAOC DNAC. L DNAOC DNA.SC DNAD. SC DNAOC DNAL DNA53、在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）AI 类限制酶 B. II 类限制酶 C. III 类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase54、下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。 C. 它们的切割方式可以相同，也可以
31、不同。 D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。55、需进行 DNA 部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ）A. 反应时间 B. 反应体积 C. PH D. 限制酶量 E.反应温度56、在回收 DNA 片段时，观察电泳结果为尽量减少对 DNA 的照射损伤应使用（A）A长波长紫外 B. 短波长紫外 C . 长波长红外 D. 短波长红外 E. ABCD都不可57、DNA 回收时，如要除去 EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（ A ）A正丁醇 B. 苯酚 C. 氯仿 D. 异戊醇 E. 乙醇58、大肠杆菌出现感受态的生理期是 （ B ）
