1、Chapter 2 微生物的纯培养及显微技术Sect 1 微生物的分离和纯培养一、前言二、微生物操作基本技术 无菌技术三、微生物的分离和纯培养四、微生物的保藏技术一、 前言1、 微生物研究对象：群体2、研究基础：1）纯培养技术：把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的技术。 培养物： 在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物。 纯培养物：只有一种微生物的培养物。2）显微技术：包括显微标本的制作、观察、测定、分析和记录。培养基二、微生物操作基本技术 无菌技术1、微生物培养的常用器具及其灭菌1）常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿、接种环（针）、无菌操作台、酒精灯等2）灭菌：
2、 灭菌 (sterilization)： 杀灭物体上所有微生物的方法。即采用强烈的理化因素使任何物体内、外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。它比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。如高温、辐射、超声波和激光等。消毒 (disinfection)： 杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。即仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的生物基本无害的措施用以消毒的药品称为消毒剂 (disinfectant）抑菌 (bacteriostasis)： 抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。防腐 (ant
3、isepsis)：利用某种理化因素完全 抑制霉腐微生物的生长繁殖而对被消毒的物体基本无害的措施。如低温、缺氧、干燥、高酸、高渗或防腐剂。 细菌一般不死亡。无菌 (asepsis)： 不存在活菌。（ 1）常用物理消毒灭菌方法 热力灭菌法； 辐射杀菌法； 滤过除菌法； 超声波杀菌法。A、 热力灭菌法干热灭菌法焚烧：废弃物、尸体； 灼烧：接种环、试管口；干烤：玻璃器皿； 红外线：医疗器械。 湿热灭菌法 ）常压下：巴氏消毒法： 61.6-62.8 30min或 71.7 15-30s,主要用于牛乳消毒。 煮沸法；巴氏消毒的方法有几种？ 一种是将牛奶加热到 62-65 ，保持 30分钟 。这种方法目前在
4、广东较少使用。采用这一方法，可杀死牛奶中各种生长型致病菌，灭菌效率可达 97.3%-99.9% ，经消毒后残留的只是部分嗜热菌及耐热性菌以及芽孢等，但这些细菌占多数的是乳酸菌，乳酸菌不但对人无害反而有益健康。 第二种方法将牛奶加热到 75-90 ，保温 15-16秒，其杀菌时间更短，工作效率更高。但杀菌的基本原则是，能将病原菌杀死即可，温度太高反而会有较多的营养损失。 间歇蒸汽消毒法 ： 80-100 15-60 min,37 过夜，循环三次。主要适用于不耐热培养基灭菌。 ）加压下： 连续加压灭菌 ： 135-140 下处理 5-15 s ，主要适用于大规模的发酵工厂培养基灭菌； 常规加压灭菌
5、 ： 121 （压力： 1kg/cm2 或 15 磅 /英寸）1520 min，是一种最为广泛的灭菌方法。 注意灭菌物体含菌量的影响，含菌量越高灭菌时间越长。天然原料化学试剂 空气的排除程度，必须尽量驱尽锅内空气。是依靠温度而不是压力来达到灭菌的目的。15 磅 /英寸：纯蒸汽 121 ；排除 1/2 空气： 112 ；不排除空气： 100 。灭菌锅 灭菌对象体积； 50 ml (12min), 2000ml (30min) 灭菌对象 pH值： pH 6.0 最易死亡；而 pH6.08.0时，微生物最不易死亡。 加热与散热的速度。B、 辐射杀菌法； 紫外线： 波长 200-300nm的紫外线具有杀菌作用。其主要作用于 DNA，使一条 DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，导致细菌变异和死亡。电离辐射： 高速电子、 X射线、 射线
