免疫球蛋白电泳技术.doc

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1、免疫球蛋白电泳技术【相关帮助】 需要相关抗体试剂的可以访问 Fantibody 全球抗体搜索引擎fantibody 全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台,网址:http:/ 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的,可以访问探生网进行咨询,期待您的加入:http:/【实验原理】免疫电泳又称为 球蛋白电泳或免疫球蛋白

2、电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白 IgM, IgG, IgA 含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗体的扩散过程中,抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生(如图) 。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也可用于洗去未结合的蛋白,抗原和抗体结合所形成的沉淀线即可以肉眼观察也可利用染色方法观察。免疫电泳技术不仅可用于血清或尿样中单克隆抗体的鉴定,也可用于其它方面,比如免疫复合物的筛选、各种异常丙种球蛋白血症的识别和鉴定等。免疫电泳技术也是进行蛋白质

3、常规评价的一种可靠,精确的实验方法,可观察蛋白质结构的变化和浓度的改变。抗体抗原【实验材料】 实验器材水平电泳仪;打孔器;滴管;刀片;电源;水浴(55C);蒸馏水;烧杯 (400-600ml);加样枪(5-100ul)。 实验试剂 纯化的抗体;蛋白质混合物;1%琼脂。 Tris-巴比妥缓冲溶液:2.24g 巴比妥酸,4.43g Tris, 0.053g 乳酸钙及 0.065g 叠氮抗原/抗体复合物化钠溶于 100ml 蒸馏水中。 电泳缓冲溶液:将 Tris-巴比妥缓冲溶液与蒸馏水按 1:4 的比例混合。【实验方法】 准备琼脂糖凝胶将琼脂和电泳缓冲溶液混合放入 90C 水浴加热至溶化,制成 1%

4、琼脂,将琼脂在冷却前铺在水平玻璃板上,待冷却至室温后,按图用内径 4 毫米的打孔器打孔及制作凹槽。 电泳将用电泳缓冲溶液稀释的 4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,将胶板放入电泳槽中并用润湿的滤纸将胶板和电泳槽中的缓冲溶液相连。盖上电泳槽盖,接通电源,6V/cm 通电至前沿移动约 35mm,时间约为 1 小时,利用示踪染料判断移动距离。 扩散将胶板移出电泳槽并放在水平位置上,用滤纸润干胶板凹槽中的缓冲溶液,在凹槽中加入适量的抗体(0.2ml0.25ml),注意抗体不能溢出凹槽以避免污染 .将胶板移至含有叠氮化钠且有一定湿度的盒内,加盖密封后在 30C 水浴扩散至少 10 小时后,移至 0.85%盐水中以终止扩散并洗去未结合的蛋白。【实验结果】观察抗原和抗体之间所形成的沉淀线,并进行记录。【思考题】 什么是抗原和抗体?并解释抗原抗体结合的特点。 简述免疫电泳的基本原理。 - +40mm

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