1、1小鼠脑原位模型建立和其他文献分享 陶冶 2019-05-22背景简介 手术方法实验结果2背景简介目的：通 过 改良 肿 瘤移植的方法以 获 得良好的人 脑 胶 质 瘤裸小鼠 脑 内移植模型。在此基础 上 ,去建立人 脑 多形性胶 质 母 细 胞瘤(glioblastoma multiform,GBM)的裸小鼠模型 ,并探知其生物学特性能否保持其 亲 本 肿 瘤的特性。脑 胶 质 瘤系 发 生于 脑 最常 见 的一 类肿 瘤。依其 细 胞构成不同又可分 为 星形母 细 胞瘤、星形 细 胞瘤、多形性胶 质 母 细 胞瘤、少突胶 质细 胞瘤、神 经 母 细 胞瘤、室管膜母 细 胞瘤、室管膜 细 胞
2、瘤等。此 类肿 瘤生 长 部位、 恶 性程度不同。 恶 性 脑 胶 质 瘤是 临 床上常 见 的一类颅脑肿 瘤，其 发 病率在 颅脑肿 瘤中高达60%。3手术方法 实验器材和用具： 手术 刀， 1%戊巴比妥钠，定位仪， 微量注射泵 ， 颅骨钻、 酒精， 双氧水 ，棉签，镊子， U87-MG-LUC细胞 ， 3M组织胶 ，电热毯4手术方法 1%戊巴比妥钠 (85.7mg/公斤 )将小鼠麻醉 ; 将其头部固定于定位仪上，上颚牙齿挂到定位仪上，旋动头部螺旋使其刚好压住老鼠的鼻子，将两侧小棒插入到小鼠双耳中，约 7格 ,使其头部稳定5手术方法 消毒，碘酒擦拭，然后用酒精擦，共三遍； 用手术刀从头部中央
3、划开一个小口，用镊子剪将伤口剪大； 用伤口夹将伤口处皮肤拉向两侧， 3%的双氧水将筋膜去除，找到 脑骨中线偏右侧2mm附近定点。6手术方法 电钻打孔； 注射：抽取 5L 浓度为 0.2x105的 U87-MG-LUC细胞 将 微量注射泵 固定于定位仪上，小心将针头下降至头颅钻孔水平面， 插入 2.5mm， 马上回退 0.5mm，使得颅内保持有空腔方便细胞的吸收。 注射速度为1L/min7手术方法 细胞 注射完后，要将其静止 3分钟后，慢慢将针头退出 ,以便病毒很好的被吸收 用捏子将伤口两侧皮肤扯到一块，用 3M组织胶粘合伤口 ，敷上抗生素，将小鼠放在热毯上，便于苏醒； .8实验结果 可见光活体
4、成像技术主要采用生物发光（ bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。 生物发光 是用荧光素酶（ Luciferase）基因标记细胞或 DNA，而 荧光技术 则采用荧光报告基团（ GFP、 RFP, Cyt及 dyes等）进行标记。利用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。通过这个系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据 , 得到多个时间点的实验结果。相比之下，可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点
5、进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，所得的数据更加真实可信。另外 , 这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高，不涉及放射性物质和方法 , 非常安全。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点9多种肿瘤模型小鼠上的实验结果显示，靶向该调控因子的特异性抑制剂不仅可以减缓肿瘤生长，与免疫检查点抑制剂联合使用还能帮助消除肿瘤。中性粒细胞是人体内数量最多的一类白细胞，正常情况下在对抗感染时冲锋陷阵。然而在癌症等病理条件下，有些中性粒细胞被肿瘤 “带坏 ”，转变为髓源抑制细胞（MDSC），包括多形核粒细胞性髓源抑制细胞（ PMN-MDSC）。这种免疫抑制细胞非但不能发挥杀敌作用，还会直接抑制免疫系统的攻击力，促进肿瘤进展和转移，是造成肿瘤患者预后不理想的重要原因之一。他与同事们注意到，无论是从肿瘤模型小鼠还是肿瘤患者体内分离出的 PMN-MDSC中，脂肪酸转运蛋白家族（ FATP）中的 FATP2表达水平显著增高。这对免疫抑制细胞有什么影响呢？
