1、艾滋病检测实验室的质量控制与评价,孙伟东北京市疾病预防控制中心北京市艾滋病确证中心,北京市疾病预防控制中心,一、质量控制,质量控制是指为确保检测工作正常进行而在每一次实验过程中必须采取的各种措施。涉及每一次试验中，保证实验正常进行必须包括的各种措施。是对检测过程的监控，尽可能减少实验过程中产生的各种误差。具体内容是将质控品（内部对照和外部对照）和检测标本一起实验操作，从而了解分析过程的质量情况。质控的最终结果可以了解本次实验是否有效、试验条件是否正常、试验结果是否可靠。,北京市疾病预防控制中心,采集标本前病人的准备正确的标本采集方法准确及时的运送标本实验前正确地处理和保存标本,实验前质量控制,
2、北京市疾病预防控制中心,实验中质量控制,质控品的准备试剂盒的评价开展质控图质控（或“即刻法”质控）,北京市疾病预防控制中心,实验后质量控制,实验后准确填写检验结果及时发出报告正确地解释检验结果的临床意义,北京市疾病预防控制中心,质控品,内部对照质控血清内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳性对照外部对照质控血清外部对照质控血清是各实验室为了监控每次检测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套阴性和阳性对照血清。设立外部对照还可以提示标本处于弱阳性和临界值状态时的检验操作情况,北京市疾病预防控制中心,外部对照质控血清的组成,理想的外部对照应该包括强阳性对照、弱阳性对照、
3、临界值对照和阴性对照。在每次实验时可只使用一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的值以设定在该试剂盒Cut-off值的23倍为宜。,北京市疾病预防控制中心,外部对照质控血清的来源,购买自备混合试剂盒内部对照血清。稀释HIV抗体强阳性血清。,北京市疾病预防控制中心,每一次试验必须使用外部对照质控血清建立质控图，即检验性能数据与计算出的“控制线”进行比较的图上面标有一中心横线及其上、下各一或两条平行的质控线，并有按时间顺序填入的各质控血清测定的数值，以便监控实验操作的一致性和结果的准确性。同时可以了解各批试剂盒之间的误差（批间差异）。,外部对照的使用,北京市疾病预防控制中心,算术平均
4、值（ ）：采用至少20次（天）所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值标准差（s）：是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清S/CO值均值有关的预期范围。一组S/CO值的标准差以s 表示变异系数（cv）：是反映各次S/CO 值相对均值的离散程度的一个指标，可以用于衡量被检标本检测的重复性或精密度,建立质控图的参数,北京市疾病预防控制中心,计算公式,北京市疾病预防控制中心,以每个质控对照的OD值 /CUT OFF比值（S/CO）为纵座标（Y轴），每一次实验为横座标（X轴）建立质控图。 采用至少20次（天）所测的外部对照质控血清S/CO 值结果计算出平均值（ ）； 计算2
5、0次S/CO值的标准差（s）； 计算出 1s， 2s ， 3s范围；标出每次实验外部对照值，每次实验质控的结果依次点入该质控图框架图中。,质控图的建立,北京市疾病预防控制中心,质控图制作实例,北京市疾病预防控制中心,质控图制作实例,1、计算均值=1.742、计算标准差=0.253、按标准差计算范围如下：1S=1.74+/-（10.25）=（1.49-1.99）2S=1.74+/-（20.25）=（1.24-2.24）3S=1.74+/-（30.25）=（0.99-2.49）,北京市疾病预防控制中心,=1.74 1s =1.49-1.99 2s =1.24-2.24 3s =0.99-2.49,
6、质控图,北京市疾病预防控制中心,质控图,北京市疾病预防控制中心,外部对照S/CO值超出2s，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察； 失控：外部对照S/CO值超出3s，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，需查找原因，重新检测；位移：如果几个连续质控对照值（3-5次）都落在均值的一侧称之为位移，通常表示存在大的变化（失控）。引起位移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器故障等。趋势：当几个连续质控对照值（5-7个）几乎按一个方向分布时称之为趋势，通常由参数的缓慢改变引起，如试剂失效和移液器逐渐不准确等。发生位移和趋势的最常见的原因是试
7、剂（如酶标记物）或对照的失效。,质控图的判定和分析,北京市疾病预防控制中心,北京市疾病预防控制中心,建立质控图的目的是发现出现的问题，所以在每次实验时应该观察外部对照值是否在允许范围之内；为减少试剂盒更换造成的变化，最好长期稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒及改用新批号试剂盒应重新制作质控图；每月定期召开质控分析会，讨论本月质控情况；质控结果失控时，应填写报告单交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告；使用新批次的外部对照质控血清时，必须重新绘制质控图。变异系数小于20%，表示处于稳定状态。,质控图分析要点,北京市疾病预防控制中心,过去认为OD值在CUT OFF值10%15
8、%范围内的样本定为灰色带反应。对这类标本最好复检，或用其他方法再检测，通过灰区的判断有助于发现早期感染者目前的EIA试剂已有较高的灵敏度，EIA检测应该只有两种结果：阳性或阴性,灰区问题,北京市疾病预防控制中心,即刻法质控,在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第三次检验结果进行质控计算方法：1、将质控血清的测定值从小到大排列：X1, X2 , X3 Xn（X1为最小值， Xn 为最大值）；2、计算 和 s ；3、计算SI上限值和SI下限值,北京市疾病预防控制中心,4、将SI上限和SI下限与表中数字比较当SI上限和SI下限 n3s值时表示该值已在3s范围之外， 属“失控” 数值处于“告警
9、” 和“失控”状态应舍去，重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的数值，其它值仍可继续使用,即刻法质控,北京市疾病预防控制中心,必须使用经卫生部批准或注册，中国药品生物制品检定所批批检定合格、有效期内且保存条件符合要求的国产或进口HIV1+2混合型抗体初筛试剂盒按照SOP中规定的要求进行操作，对影响检验的物理因素，如孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等，均应按试剂盒说明书的要求操作，以保证质量控制实验前必须检查待检标本的质量，如标本不符合要求必须重新采集标本。冰冻的标本应全部融化，摇匀后检测每次检验，内部对照和外部对照的结果必须在允许的范围内，否则应视为无效,质量控制的基本要求,北京市疾
10、病预防控制中心,二、质量评价,质量评价是一种手段，用于判定实验室测定结果的质量。通常使用有关权威机构提供的一套质控品(质量控制参比血清)从外部来评价实验室的工作，即对数个实验室的检测结果进行统计分析和评价。这种评价方式常称为室间质量评价（EQA）。质量评价用于评价质量保证体系的效果，其目的在于帮助发现其质控与质保系统有无问题。各实验室可根据上一级提供的质评检验报告的结果，检查其质量控制状况。,北京市疾病预防控制中心,必要性,是监督检验质量、得到质量保证的重要途径之一是一种有系统、有组织的外部约束和横向参比措施。不仅有助于提高各参评实验室的检测质量，增加实验室间检验结果的可比性，还可通过试剂评价
11、、方法比较和技术交流等方式，促进实验方法的进步和检验试剂的优化，这些工作都直接或间接地提高了检验质量,北京市疾病预防控制中心,也称为能力验证（PT），是指多家实验室分析统一标本并由外部独立机构收集、反馈实验室上报结果并评价实验室检测能力的活动。主要用途：评价实验室的分析能力；监控实验室可能出现的技术问题；改正存在的问题；改进分析能力、实验方法和其它实验室的可比性；评价实验室工作人员的能力；教育和训练实验室工作人员；作为实验室质量保证的外部监督工具。,室间质量评价,北京市疾病预防控制中心,PT报告中可以回答两个重要问题,比较本实验室与使用同一方法（试剂）的其他实验室的结果差异与做同一试验但使用不
12、同方法（试剂）的实验室结果进行比较通过比较可以提示实验室室内质控难以发现的偏差或系统误差。,北京市疾病预防控制中心,PT失败时应注意,核查原始记录，确认没有转抄错误；确认当时测定时，室内质控可接受审核仪器维护和校准记录查对标本处理记录核对与PT标本同时测定的其它实验记录若有剩余PT标本，重复分析,北京市疾病预防控制中心,PT的不足,评价的可能不是实验室的正常水平而是它的最好水平有时成绩不好并不代表实验室水平不行有时成绩比实际检测水平要好，靶值确定是一个十分重要的因素PT不可能确认分析前和分析后存在的许多问题整个过程时间较长,北京市疾病预防控制中心,室间质评与室内质控的关系,室内质控是对检验结果
13、的即时性评价，通过对室内质控结果的连续观察，监测实验室检验结果的精密性。室内质控是实验室检测质量保证的基础，没有完善的室内质控措施就谈不上质量保证，即使在室间质评中取得很好的成绩也不能说明实验室检验结果的可靠性。因此，实验室的质量保证工作，应首先从室内质控抓起，持之以恒，不断的观察、分析和解决实验中的质量问题，才能使检验工作的质量得到稳步提高。,北京市疾病预防控制中心,室间质评是对检验结果的回顾性评价，其主要目的是评价和修正实验室检验结果的准确性，并与各参评单位结果比较，了解本室结果的偏倚程度，是发现实验室系统误差的重要手段之一。,室间质评与室内质控的关系,北京市疾病预防控制中心,室间质评与室
14、内质控的关系,室间质评应在室内质控具有相当水平的基础上进行，因为实验室没有稳定可靠的室内质控措施，就不可能获得良好的精密性，没有良好的精密性是谈不上准确性的。因此，实验室不能好高骛远，舍本求末,只重视室间质评的成绩，而不实实在在地抓好室内质控。当然，室内质控和室间质评都是质量保证的重要环节之一，两者应互为补充，辩证统一，缺一不可。,北京市疾病预防控制中心,室间质量评价体系,1.国家艾滋病参比实验室和一些省级艾滋病确 证中心接受国际相关机构的质量评价。2.国家艾滋病参比实验室对全国各省、自治区和直辖市的艾滋病确证中心实验室和其他艾滋病确证实验室进行质量评价，并负责提供质量评价标本、标准以及有关文
15、件。3.艾滋病确证中心实验室对所在省份内各级艾滋病筛查实验室进行质量评价。,北京市疾病预防控制中心,室间质评方式,1.随机派调查员到实验室实地调查2.发放问卷调查表3.发放质控物4.以上方法相结合,北京市疾病预防控制中心,仪器设备的检定、维护或校准,仪器设备的检定：以下国家强检仪器设备是否由计量认证部门进行了定期检定？ 酶标仪 移液器 温度计,北京市疾病预防控制中心,仪器设备的检定、维护或校准,仪器设备的维护或校准:以下仪器设备是否定期要求厂家、供应部门或自行维护和校准？ 洗板机 生物安全柜高压蒸汽灭菌器,北京市疾病预防控制中心,是否有生物安全柜,是否有使用记录？是否有高压蒸汽灭菌器使用记录？
16、高压蒸汽灭菌器使用人员是否经过培训并取得上岗资质？是否配置了洗眼器？是否进行人员健康监护？,实验室生物安全,北京市疾病预防控制中心,是否有以下SOP文件,样品的接收、登记和处理检测方法和步骤仪器的使用维护和校准实验的质控计划结果解释与报告保密程序检测数据的记录与保存差错处理程序实验室的清理和消毒实验室生物安全防护,北京市疾病预防控制中心,质量评价管理,1.实验室质量评价工作每年要进行总结，以提高质量评价的工作质量。2.表彰质量评价工作做得好的实验室，推广和宣传质量管理好的经验。3.对多次质量评价不合格的实验室，由主管机构(卫生部疾病控制司和省级卫生行政部门)分别给予限期改进、停止工作整改和撤销实验室资格的处理。,谢谢!,
