1、芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/011标准操作程序项 目 甲型肝炎病毒 IgM 检测的标准操作程序方 法 ELISA 方法编写人 冯岚 日期 2005/01/01审核人 曹进平 日期 2005/01/01批准人 陈健康 日期 2005/01/01文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科本规程自 2005 年 01 月 01 日起实施，每 2 年复审一次文件编号 CHDEYY-JYK-MY-001文件版本号 第 1 版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任芜湖
2、市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/012实验室名称 项目 编号 制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒 IgM 检测的标准操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共 2 页 第 1 页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该 SOP 变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经专业主管、科主任批准签字。标本的采取和保存采静脉血 2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不
3、可用 NaN3 防腐。测定原理采用兔抗-人 IgMu 链包被反应被，加入待测标本，同时加入 HAVAg，抗 HAV-HRP，如待测标本中含有抗-HAV-IgM 时，就能与包被兔抗-人 IgMu 链结合，并且与 HAVAg,抗-HAV-HRP 结合成复合物，加 TMB 底物产生显色反应，反之则无显色反应。操作步骤1. 将待测标本用生理盐水作（1：1000）稀释，每孔加入稀释标本 100ul，设阴、阳性对照各 2 空，每孔加入阴性对照（或阳性对照）100ul （或 2 滴） ，并设空白对照一孔，封板，置 37 度孵育 20 分钟。2. 洗板机洗板：选择洗涤 5 次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内
4、液体，洗涤液注满各空，静置 5 秒，甩干，重复三次后拍干。3. 每孔加入 HAVAg30ul（或一滴） ，酶结合物 50ul（或一滴） ， （空白对照孔不加） ，充分混匀，封板，置 37 度孵育 20 分钟。4. 洗板机洗板：选择洗涤 5 次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置 5 秒，甩干，重复三次后拍干。5. 每孔加显色剂 A 液、B 液各 50ul（或一滴） ，充分混匀，封板，置 37 度孵育 10 分钟。6. 每孔加入终止液 50ul（或一滴） ，混匀。7. 用酶标仪读数，取波长 450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长 630nm） ，先用空白孔校零，
5、然后读取各孔 OD 值。结果判断样品 OD 值除以阴性对照平均 OD 值大于或等于 2.1 判断为阳性，否则为阴性阴性对照 OD 值低于 0.05 作 0.05 计算，高于 0.05 按实际 OD 值计算临床意义血清中 HAVIgM 在亚临床期即已出现，其滴度在感染后 3 个月维持在 1000 以上，早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。注意事项1 试剂使用前应摇匀，并弃去 12 滴后垂直滴加，注意均匀用力。2 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡 30 分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3 洗板时所用的洗水纸请勿反复。4 不同批号试剂请勿通用。5 结果判断须在 10 分钟内完成。
6、芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/013实验室名称 项目 编号 制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒 IgM 检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共 2 页 第 2 页2005-01-016 封片不能重复使用。7 用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/014标准操作
7、程序项 目 乙肝表面抗原检测的标准操作程序方 法 ELISA 方法编写人 冯岚 日期 2005/01/01审核人 曹进平 日期 2005/01/01批准人 陈健康 日期 2005/01/01文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科本规程自 2005 年 01 月 01 日起实施，每 2 年复审一次文件编号 WHDEYY-JYK-MY-002文件版本号 第 1 版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/015实验室名称 项目 编号
8、 制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共 2 页 第 1 页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该 SOP 变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随机静脉血 2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用 NaN3 防腐。测定原理双抗体夹心法测 HBsAg：抗 S 包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗 S，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤
9、1 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡 30 分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20 稀释。2 加待测标本：加入待测标本每孔 0.05 毫升，并设阳性对照 2 孔，阴性对照 2 孔，空白对照 1 孔。3 加酶结合物：每孔 0.05 毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置 37孵育 30 分钟。4 洗板：1） 手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置 510 秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复 5 次，拍干。2） 洗板机洗板：选择洗涤 5 次的程序洗板，最后拍干。5 加显色剂：先加显色剂 A，每孔 0.05 毫升；再加显色剂 B，每孔 0.05 毫升；充分混匀，放置 37避光孵
10、育 15 分钟。6 终止反应：每孔加入终止液 0.05 毫升，混匀。7 测定：用酶标仪读数，可选择波长 450nm（以空白孔校零）或双波长 450/630nm，读取各孔 OD 值。结果判断Cutoff 值计算：COV= 阴性对照平均 OD 值*2.1标本 OD 值大于 COV 为阳性，标本 OD 值小于 COV 为阴性注：阴性对照 OD 值低于 0.05 按 0.05 计算，高于 0.05 按实际 OD 值计算。临床意义HbsAg 在感染早期出现于患者血循环中，可持续数月，数年乃至终生，是诊断 HBV 感染最常用的指标。但所谓 HBV 感染的“窗口期” ，HbsAg 可以阴性，而抗 HBc 等
11、其他 HBV血清标志物则可阳性。注意事项1 试剂使用前应摇匀，并弃去 12 滴后垂直滴加，注意均匀用力。2 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡 30 分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3 洗板时所用的洗水纸请勿反复。芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/016实验室名称 项目 编号 制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共 2 页 第 2 页2005-01-014 不同批号试剂请勿通用。5 结果
12、判断须在 10 分钟内完成。6 封片不能重复使用。7 用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/017标准操作程序项 目 乙肝表面抗体检测的标准操作程序方 法 ELISA 方法编写人 冯岚 日期 2005/01/01审核人 曹进平 日期 2005/01/01批准人 陈健康 日期 2005/01/01文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科本规程自 2005 年 01 月 01 日起实施，每 2 年复审一次文件编号 WHDE
13、YY-JYK-MY-003文件版本号 第 1 版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/018实验室名称 项目 编号 制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共 2 页 第 1 页2005-01-01目的保证检测结果准确可靠。该 SOP 变动程序本标准操作程序的变动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。标本的采取和保存随
14、机静脉血 2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用 NaN3 防腐。测定原理双抗原夹心一步法测 HbsAb：S 抗原反应包被板，加入待测血清后，再加入酶标抗 S，加底物显色为阳性，证明样品中含被测物，含量与显色程度成正比。操作步骤1 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡 30 分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20 稀释。2 加待测标本：加入待测标本每孔 0.05 毫升，并设阳性对照 2 孔，阴性对照 2 孔，空白对照 1 孔。3 加酶结合物：每孔 0.05 毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置 37孵育 30 分钟。4 洗板：a)
15、 手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置 510 秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复 5 次，拍干。b) 洗板机洗板：选择洗涤 5 次的程序洗板，最后拍干。5 加显色剂：先加显色剂 A，每孔 0.05 毫升；再加显色剂 B，每孔 0.05 毫升；充分混匀，放置 37避光孵育 15 分钟。6 终止反应：每孔加入终止液 0.05 毫升，混匀。7 测定：用酶标仪读数，可选择波长 450nm（以空白孔校零）或双波长 450/630nm，读取各孔 OD 值。结果判断Cutoff 值计算：COV= 阴性对照平均 OD 值*2.1标本 OD 值大于 COV 为阳性，标本 OD 值小于 CO
16、V 为阴性注：阴性对照 OD 值低于 0.05 按 0.05 计算，高于 0.05 按实际 OD 值计算。临床意义抗HBs 为 HBV 的中和抗体，有清除 HBV，防止在感染的作用，抗HBs 一般出现于乙肝患者恢复期，提示感染已终止。此外，注射过乙肝疫苗的人，抗HBs 阳性。注意事项1 试剂使用前应摇匀，并弃去 12 滴后垂直滴加，注意均匀用力。2 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡 30 分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。3 洗板时所用的洗水纸请勿反复。4 不同批号试剂请勿通用。芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期
17、 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/019实验室名称 项目 编号 制定日期芜湖市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共 2 页 第 2 页2005-01-015 结果判断须在 10 分钟内完成。6 封片不能重复使用。7 用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件操作人员 部门主管 质量负责人姓名 冯岚 曹进平 陈健康日期 2005/01/01 2005/01/01 2005/01/0110标准操作程序项 目 乙肝 E 抗原检测的标准操作程序方 法 ELISA 方法编写人 冯岚 日期 2005/01/01审核人 曹进平 日期 2005/01/01批准人 陈健康 日期 2005/01/01文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科本规程自 2005 年 01 月 01 日起实施，每 2 年复审一次文件编号 WHDEYY-JYK-MY-004文件版本号 第 1 版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任
