1、1模块一 生物技术实践练习题【2014 年高考】下面是关于固定化酶和细菌培养实验的问题。请回答： （ 1）某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，分组见下表。 （1 ）将吸附了 淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去 _。按上表分组，将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行 KI-I2 检测。若流出液呈红色，表明有_生成；若各组呈现的颜色有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是_组。 （2 ）下列关于上述固定化酶实验的叙述，错误的是（ ） A固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量 B淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉 C各组
2、实验所用的淀粉溶液浓度应相同 D淀粉溶液的 pH 对实验结果有影响 （3 ）现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中的细菌数，进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用_法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进行计数。该实验应注意，接种前，从盛有_的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_作为对照。 （4 ）在上述细菌培养实验中进行计数时，应计数的是接种了（ ） A各个稀释度样品的培养基上的细菌数B合理稀释度样品的培养基上的细菌数 C各个稀释度样品的培养基上的菌落数 D合理稀释度样品的培养基上的菌落数【2015 年高考】某工厂为了
3、生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。2请回答：（1 ）上壤悬液泞先经 80处理 15 分钟，其目的是筛选出 （2 ）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行 ，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到 ，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与 强弱相关。（3 ）筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时斋要振荡，其主要目的是 。液体培养基与固体培养基相比.不含有的成分是 。（4 ）在合适条件下，将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成凝胶固体小球。该过程是对酶进行 。A.吸附 B.
4、包埋 C.装柱 D.洗涤（5 ）温度与植酸酶相对酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是 。A.测试温度中，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为 60和 45B.测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动低于非固定化植酸酶C.固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在 80%以上时的温度范围较宽D. 65时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白质变性而位于最低点1 （省 2009 高考题）请在标有序号的空白处填空，并将序号及相应答案写在答题纸上：下面是有关食醋和泡菜制作的实验。请回答：（1）食醋可用大米为原料经三步发酵来制作：第一步：大米经蒸熟、冷却后加入淀粉酶，将原料中的淀粉分解成 （填中
5、间产物） ，然后进一步分解成葡萄糖，这一过程可用 （填淀粉指示剂）来检测，因为该试剂遇淀粉呈蓝色，遇上述中间产物呈红色。第二步：用 菌将葡萄糖转化成乙醇，这一发酵过程中，玻璃发酵瓶不应完全密闭的主要原因是 。第三步：用 菌将乙醇转化成乙酸，这一过程 氧气。（2）泡菜发酵过程中，会产生多种酸，其中主要是 ，还有少量的亚硝酸。对亚硝酸盐的定量测定可以用 法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与 N-1-萘基乙二胺偶联成 色化合物。进行样品测定时，还要取等量水进行同样的测定，目的是 。2 （省 2009 调研卷）某生物实验室要进行大肠杆菌的培养和分离及植物组织培养实验。现有以下几种试剂供实验用：
6、A.生长素溶液 B.脱落酸溶液 C.秋水仙素溶液 D.琼脂 3E.细胞分裂素溶液 F.赤霉素溶液(1)大肠杆菌的培养和分离实验中，先用 LB 进行扩大培养，再在 LB固体平面培养基上进行 分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的上述试剂是 。在培养基上完成接种后，需将培养皿倒置，目的是 ，然后置于恒温箱中培养。(2)用 MS 培养基进行植物组织培养实验的基本过程：植物细胞 愈伤组织丛状苗试管苗。若用成熟花粉培养得到的试管苗 植株。以上过程需要加入上述试剂中的 两种物质刺激，且不同的培养时期这两种物质的比例不相同，当其中的 浓度较高时主要是促使其长芽。愈伤组织中细胞的分裂方式是 ，愈伤
7、组织中的一部分细胞长成根，而另一部分细胞却长成芽，原因是细胞发生了分化，实质是 。(3)MS 培养基和 LB 培养基配制好后都需要进行 、分装和灭菌处理。3 （省 2010 调研卷） 下图为实验室制作葡萄酒的基本流程：请回答：上述流程中，A 为 过程，该过程中酵母菌的呼吸类型主要是 ，B 为 过程。用 KMnO4溶液浸泡葡萄的目的是 。发酵瓶中葡萄汁的装量应控制在 ，主要原因是 。在配制酵母斜面培养基时，培养基中应加入一定量的凝固剂，如 。培养基配好后，置于高压蒸汽锅内，在压强为 0.1 MPa（1kg/cm 2） 、温度为 oC 的条件下，维持一段时间，可达到 的目的。加热结束后，不能立即开
8、启锅盖，其目的主要是为了防止及人身伤害。4(2010 年高考)某同学进行苹果汁制作实验，工艺如下图所示。请回答：(1)图中用 溶液浸泡苹果的目的是 。黑曲霉提取液中含有的 4KMnO浓缩清水冲洗B洗净 发酵酵母斜面菌种 A 1000 mL 酵母培养液 酵母菌液成熟葡萄 KMnO4 溶液浸泡 榨汁 发酵瓶 葡萄酒4可水解果胶，从而使果汁澄清。固定化柱中填充的石英砂通过 方式将酶固定化，酶被固定后用蒸馏水洗涤固定化柱是为了除去 。(2)实验中，操作流程 A 和 B 的先后次序为 。在苹果汁澄清过程中，应关闭的流速 调节阀是 。要测定从固定化柱流出的苹果汁中是否还有果胶，可取一定量的果汁与等量的 混
9、合，如果出现 现象说明果胶还没有被完全水解。 为使果胶完全水解，应将流速调 。(3)实验后，将洗涤过的固定化柱在低温环境中保存若干天。该固定化柱仍可用予苹果汁制作实验，说明固定化酶可被 使用。5.（2011 年调研卷）某同学用组织培养方法快速繁殖百合，其流程如下。请回答：（1）配好的培养基需经 灭菌后才能使用。用乙醇和次氯酸钠对百合鳞茎进行，然后在 中用无菌水冲洗，再用无菌滤纸吸干表面水分，进行切割后接种。（2）诱导丛状苗时，培养基中应添加的植物激素及配比是 。A生长素浓度高于细胞分裂素浓度 B生长素浓度低于细胞分裂素浓度C生长素浓度低于赤霉素浓度 D生长素浓度高于赤霉素浓度（3）诱导生根时，
10、发现不同种类的百合生根能力差异很大，这是因为它们的 不同。将生根后的百合直接定植于土壤中，死亡率很高。改进的措施是将其移至蛭石中，用塑料布罩 2-3 天后，逐步加大塑料布开口，使其生长环境中的 逐步降低，这一过程即为上述图中的 。（4）培养过程中，发现培养基上长有多种细菌，若要从中分离某种细菌，可用接种环挑取少量细菌，在 LB 培养基上 ，形成单 后，再进一步观察确认。6.（2011 年高考）杨梅是浙江省的特色水果之一，为对其进行深加工，某厂进行了杨梅酒和杨梅醋的研制，基本工艺流程如下：请回答：（1）在制备杨梅酒过程中，为了提高杨梅的出汁率，在压榨前可加入一定浓度的纤维素酶和酶。甲罐顶上弯管中
11、加水的主要目的是 。发酵一定时间后，观察到发酵罐内液面不再有 ，说明发酵基本完毕。（2）在制备杨梅醋过程中，乙罐内先填充经 处理的木材刨花，然后加配制培养基 诱导丛状苗 诱导生根 取材定植5入含菌的培养液，使该菌 在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵，杨梅醋的 pH 可通过控制杨梅酒的 来调节。（3）若甲罐中的杨梅酒全部流经乙罐制成杨梅醋，则乙罐中 CO2的产生量是 。A甲罐的两倍 B与甲罐的相等 C甲罐的一半 D几乎为零（4）在杨梅酒和杨梅醋发酵的整个过程中，某物质浓度随时间变化的示意图如右，该物质是 。7.（2012 年调研卷）下列是有关固定化酶及细菌培养与分离的问题
12、。请回答：（1）固定化酶是将水溶性的酶用物理或 。 的方法固定在某种介质上，使之成为 而又有酶活性的制剂。可用 法将 -淀粉酶固定在石英砂上形成固定化酶柱。（2）为获取土壤中的芽胞杆菌，某同学进行了相关实验，操作流程如下。上图中步骤 A 为 ，步骤 B 为 。要判断培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是 。（3）下列消毒灭菌方法中，常用于接种环灭菌的是 。A70%酒精浸泡 B紫外线照射 C灼烧 D高压蒸汽（4）请分析划线分离法能得到单菌落的原因：。8.（2012 年高考题）17幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如
13、下：请回答：（1）在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为 Hp 含有 它能以尿素作为氮源；若有 Hp，则菌落周围会出现 色环带。（2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是 灭菌。A高压蒸汽 B紫外灯照射 C70酒精浸泡 D过稀释B划线分离取土样观察并挑取单菌落配制 LB 固体培养基 灭菌 A85处理 10 分钟6滤（3）步骤 X 表示 。在无菌条件下操作时，先讲菌液稀释，然后将菌液 到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得 菌落。（4）在培养时，需将培养皿倒置并放在 中。若不倒置培养，将导致 。（5）临床上用 呼气试验检测人体是否感染 Hp，旗基本原理是 Hp 能将 标记的 14C 1
14、4C分解为 和 。3NH2O9.（2013 年高考卷）利用紫甘薯制酒可提高其附加值。请回答：(1)为提高紫甘薯的利用率，工厂化生产时，可加入果胶酶和淀粉酶，其中果胶酶可来自_ _等微生物。由于酶在水溶液中不稳定，因此常将酶固定在某种介质上制成_ _。(2)果胶酶可将紫甘薯匀浆中的果胶水解成_。A半乳糖醛酸和葡萄糖 B半乳糖和果糖C半乳糖醛酸甲酯和果糖 D半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯(3)紫甘薯匀浆流经 淀粉酶柱后，取适量流出的液体，经脱色后加入 KII 2溶液，结果液体呈红色。表明该液体中含有_。A淀粉 B糊精 C麦芽糖 D葡萄糖(4)在发酵前，为使酵母菌迅速发生作用，取适量的干酵母，加入温水和
15、_ _。一段时间后，酵母悬液中会出现气泡，该气泡内的气体主要是_ _。将酵母菌接种到待发酵液后，随发酵的进行，酵母菌在_ _条件下产生了酒精和二氧化碳。(5)下图表示发酵液 pH 对酒精浓度的影响。据图判断，最 佳 pH 是_。10.（1）下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程， A 过程配制的培养基有 和 。配制过程中要用 作为培养基的凝固剂。B 过程尿素溶液用 使之无菌。（2）果酒和果醋的制作充分利用了不同的微生物在特定的条件下的代谢产物，在果酒制作中，当发酵瓶中停止 ，即表示发酵完毕；在果醋制作中利用 在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸，发酵过程中每天用 pH 试纸检测流出液的 pH
16、 监控发酵进行的情况，等到流出液的 pH 时停止实验。（3）如果做测定泡菜中亚硝酸盐含量的实验，紫甘蓝不适合用作实验材料的原因是 。测定时，必须先制备已知浓度的亚硝酸钠标准溶液，利用光电比色法测定 _ _ ，绘制_ ，将显色反应后的样品与其进行比对，可以大致计算出泡菜中亚硝酸盐的含量。11.在我国北方及西南地区，人们有制作泡菜和酸菜的习惯。请回答：7（ 1） 其中腌制泡菜所需要菌种假丝酵母和_ _，后者的呼吸方式是 ；但这类菜品在腌制过程中会产生一定量的_ _。腌制泡菜的基本过程是：选用原料白菜等，将洗净的菜坛加入蔬菜、盐水、糖及调味品，混合均匀，再加上一些白酒，在_ _条件下，微生物利用菜中
17、的一些营养物质和_ _，其发酵产物是有机酸和醇类物质。写 出 制 作 过 程 中 相 关 的 反 应 方 程 式 （ 任一 种 ） 。（ 2） 下 列 不 是 白 酒 的 作 用 的 是 ？ （ ）A. 白 酒 可 以 促 进 假 丝 酵 母 生 长 B. 白 酒 可 以 调 味C. 可 抑 制 泡 菜 表 面 杂 菌 生 长 D. 白 酒 可 增 加 醇 香 感（ 3） 在 发 酵 中 期 ， 随 着 _ _产 生 ， pH 值 _ _。12.如图简单表示了葡萄酒的酿制过程，请据图分析：（1）葡萄酒的酿制原理是先通气进行 ，以增加酵母菌的数量，然后再 获得葡萄酒。（2）下列有关酒精发酵和果醋
18、发酵说法正确的是（ ）A后者菌种具有成形的细胞核 B前者菌种无具膜细胞器来源:学+科+网 Z+X+X+K C两种菌种都具有细胞壁 D两种菌种都对青霉素敏感 （3）制备固定化 -淀粉酶的过程中，将 -淀粉酶固定在石英砂上的方法是 ，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解为 ，遇碘呈 色，此实验最适温度为 。（4）关于固定化酶中的酶说法正确的是（ ）A酶的种类多样性，可催化一系列的酶促反应 B酶被固定在不溶于水的载体上，可反复利用C酶作为催化剂，反应前后结构不改变，所以固定 化酶可永远利用下去D固定化酶由于被固定在载体上，所以丧失了酶的高效性和专一性特点13.菊花的幼苗经无菌操作接入培养
19、基后，在一定条件下形成试管苗，经健苗处理后再移至土里栽培，实现植物的无性生殖。请问：（1）在超净台中，取已经进行过无菌培养的菊花幼苗，在无菌培养皿上切成若干段，每段至少含有 1 张叶片，将这些幼茎切断先放入 培养基中，封上封口膜，在适宜的温度和光照条件下培养。待长出丛状苗后转入 培养基中继续培养。（2）若使用自然生长的茎进行组织培养，需先依次用 70%的乙醇、 、5%的次氯酸钠对茎进行消毒一段时间后后，最后在超净台中用 清洗，再将葡萄汁+白糖+酵母菌（一天搅拌 23 次）断绝与空气接触（1520约 7 天）气泡不再发生时，盖上盖子（1520约 35 天）甲 乙 丙8茎的切段培养在生芽培养基中。
20、A.50%酒精 B.无菌水 C.蒸馏水 D.生理盐水（3）植物组织培养所用的基础培养基是 培养基。诱导长芽后，使用的生芽培养基中有较多的苄基腺嘌呤（BA） ，BA 的作用类似于植物天然激素中的 。生根后要对幼苗进行锻炼，方法是逐渐降低幼苗生长空间的 ，直到与自然环境的相似为止。（4）在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，当土壤稀释液制备好后，用 法分离其中含有的细菌，根据样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大约推测出样品中活细菌数。14.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：（1）图中物质 A 为 ，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用 法接种
21、到尿素培养基上,对照组配制的培养基为 培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数 (大于、等于或小于)对照组。在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是 。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是 灭菌。A高压蒸汽 B紫外灯照射 C70%酒精浸泡 D过滤（3）下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是 。A葡萄糖、NaCl、K 2HPO4、酚红、琼脂糖、水B葡萄糖、NaCl、K 2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素CNaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素D葡萄糖、NaCl、K 2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物（4）欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩
22、大培养，应使用 LB 培养基。15.请回答下列与大肠杆菌有关的问题。(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于 ，它的异化作用类型是 。从细胞壁被革兰氏染色剂的着色情况看，大肠杆菌属于革兰氏 菌。(2) 以下微生物发酵生产特定产物时，所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是 。A制作果酒 B由果酒制作果醋C获取果胶酶的苹果青霉 D制作腐乳时的毛霉（3）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 ，操作者的双手需要进行清洗和消毒。（4）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜时间后，观察培养基上
23、是否有 产生。若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。9（5）利用培养基不仅可以分离、培养微生物，在植物组织培养的过程中，也要配制培养基，培养基根据是否加入琼脂等凝固剂分为固体、半固体和液体培养基，将外植体放在培养基上获取愈伤组织用的是 培养基，对愈伤组织进行处理得到胚性细胞时用的是 培养基。16下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用 法进行微生物接种，图乙是利用 法进行微生物接种。(2) 这两种方法所用的接种工具分别是 和 ；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是 和酒精消毒。(3) 右图是采用上述接种方
24、法接种后培养的效果图解，其接种方法是 (填图甲或图乙)。(4) 用图甲方法接种后，在固体培养基上倒置培养细菌的目的是 。A防止杂菌污染 B防止菌落被打散C促进细菌生长 D促进更快地形成菌落(5)下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是 。A利用 B 接种法可以分离微生物但不能对微生物进行计数B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C以尿素为唯一氮的培养基可分离出能利用尿素的细菌DB 接种法中使用的接种工具须保存在 70%的酒精中17.微生物与人类的生活、健康有着密切的联系。请回答下列有关问题。（1）在果醋、泡菜和果酒的制作过程中，均利用相应微生物的代谢特点进行条件控制，其中需要提
25、供氧气的是 的制作。泡菜腌制原理是 和 等主要微生物利用菜中的 和其它营养物质进行发酵，产生有机酸和醇类物质，在这过程中也产生了亚硝酸盐，该物质可用 法进行定量检测。（2）根据微生物的特点，可以利用相应的培养基进行分离或培养，例如用 培养基培养苹果青霉，可提高果胶酶的产量。（3）在微生物培养或分离过程中，下列操作不恰当的是 A. 在超净台中进行接种时应该关闭紫外灯 B. 扩大培养时必须保证氧气的供应C. 控制液体培养基中营养物质的浓度 D. 空白的培养基平板需进行无菌试验（4）利用固体培养基可以进行植物组织培养和微生物培养，前者与后者的明显不同是 A. 需要添加琼脂 B. 需要添加有机物 C.
26、 需要添加激素 D. 需要灭菌处理18.大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有 109个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：（1）测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。10该方法首先配置 LB _培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至 60，在_ _旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取 0.1ml 奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用 涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中 数目；该数据比实际数值要
27、 (高、低)，原因是_ _。实验完成后需要对培养基进行 处理，然后才能倒掉。（2）若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配置 LB_ _培养基，灭菌后，将_ 在 酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养_ _h 即可。19.菊花是进行植物组织培养常用材料，其离体组织或细胞在一定条件下形成试管苗。（1）该实验的基础培养基是 固体培养基，为此必须在培养基中加入 ，两者的 决定组织是生根还是发芽。（2）将无根的非洲菊幼苗转入无植物激素的培养中，在适宜的温度和光照等条件下培养一段时间后，应出现的现象是 （3）愈伤组织分化成根和芽，再由芽发育成叶和茎，这一过
28、 程需要光照，原因是 。（4）若将菊花的花粉进行培养，得到的试管苗属于 倍体，需经 或 处理，使它的染色体数目加倍，成为可育的植株，通常这些植株的性状并不一致，其原因主要是是由于存在 变异而致。20.（1）以金樱子果实为原料经粉碎、发酵得到金樱子果酒，在发酵过程中使用到的微生物是 ，用金樱子果酒制果醋的过程中使用到的微生物是 ，后一个过程应该在 （有、无）氧的条件下才能进行。刚制备好的金樱子果酒是浑浊的， 酶可用于果酒澄清。（2）下列关于果胶酶的说法，不正确的是 ( )A果胶酶的化学本质是蛋白质 B果胶酶并不是唯一能水解果胶的酶C有些微生物可用于生产果胶酶 D半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯在果胶酶
29、的作用下形成果胶（3）泡菜发酵过程中，起作用的微生物主要是 和乳酸菌，在无氧的条件下，微生物利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵，会产生有机酸和醇类物质，还有少量的亚硝酸。对亚硝酸盐的定量测定可以用 法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与 N-1-萘基乙二胺偶联成 色化合物。进行样品测定时，还要取等量水进行同样的测定，目的是 。21 （1）植物组织培养过程中对植物样本进行消毒，可将植物样本先放入 70%酒精中浸泡l0min，再放入 5% 溶液中浸泡 5min，并重复一次，最后用无菌水冲洗。培养基除了含有必需的营养物质和凝固物质外，还必须加入 。消毒后的植物样本要先后培养在 培养基和 培养基中，在合适条件下
